介绍一种蛋白质固定化的新方法_氰基硼氢化钠还原法

。
升的重 蒸 水 中 依 次 混 入
毫升 的
氢氧 化
毫升
的戊
以
毫升 的环 氧 氯 丙 烷
环 氧 熟 丙烷
℃ 振 荡反 应
,
。
万于 含 理 毫 克 的 釜 液
。
各物质 的 终 浓 度 分 别 为
胶
,
八 琼脂糖 凝
将这 一
的 专一 的 功
。
继 续置 笔升
℃ 搅动 反 应 过
。
夜
此 步操 作 目 的 是 防止 亚 从 的 裂 解 此后
一
。,
用重
℃ 振 荡保 温 反 应
小 时 后 转 移 到 砂芯
此 步 骤 中反 应 温
。
蒸 水 洗 至 中性 后 连 于
缓 冲液 中
,
用 大 里 的 水 抽滤 洗 胶
,
、
加 少 量 防 腐剂
置
℃ 冰箱
度 较为 重 要
二 其悬 于
,
过 高或 过 低都 影 响 反 应 效 率
中保 存
。
对 酸 或 碱 不稳 定 的 蛋 白 质 的
环 级化
加
一
以
琼脂 璐的
毫
。
定 化 可 参 照 以 上 方 法 可 用 磷 酸 缓 冲液 替 醋 酸缓 冲液
,
翻
凝 集素 的 固 定 化 要 用 其 相 应 的
一
将
钠和
克 洗净 后 抽 干 的 琼 脂糖 悬 浮 于
,
结 合 专一 的 糖 代替 将所得 凝 胶
二醛 溶液 中
及
,
甲基 甘露糖 普 克 悬于
,
定化
。
,
环级 化珠 有 特 的 奴 化
倍 体 积 的 浓 氨水 中 这 一 悬 液在
。 。 。
可 省 去 用 酸 性与 碱 性级 冲 液 洗 胶 这 一 步 骤 我 们 固定 化 凝 集 素 的 试 验 表 明
℃
环 氧 活 化的 琼 脂 糖 凝 胶 用 大 量 水 洗 净后 将
小 时 反 应 完 成 后 转 入 砂 芯 漏斗 振荡 温 育 蒸水 洗 净 中 用重
介绍一 种蛋 白质固 定化的新方法一 氛基硼 氢化 钠还原 法
赵
明
孙
册
中 国科学 院上 海生 物 化学 研 究所
目前 蛋 白 质 的 固 定 化有 多 种方 法
。
,
最常 使
四
、
蛋 白 质 和 甲吸 毅 休 的侧联 的
和
用 的 方 法 是 用 澳 化氰 活 化 琼 脂 糖 然 后 将 蛋 白 质
以 伴刀 豆 球 蛋 白
相 化 为例
,
接 到活 化 的 琼 脂 糖 上 这一 方法 需 要 在 碱 性
毫 克的
溶 解 于
,
毫克 的
酉 酸 缓 冲 液 中 昔
,
条 件下 进 行
,
有 时 会对 蛋 白质 的 构 象 及 性质 产
,
。
毫 升 的
级
‘,
生 一 定的 影 响 在 使 用 上 受 到 一 定 的 限 制 这 里
浪 含
和
。 ,
物在 一
℃ 温 育振 荡
小 时 再用 重 蒸 水洗 净
一
乞 八
一
克 吸 干的琼 脂糖
,
在砂 毫 升二
反 应 完成 后 别用
以及
,
将 凝 胶 转移 至 砂 芯 漏 斗 上
酷 酸缓 冲液
,
,
芯 上 用 水洗 净并 吸 干
然后 分 别 混 入
及一 Leabharlann 升用 重 蒸 水 洗 去未 反 应 的
然 后再 分
,
含
。
毫克 毫 将这 一 悬
氢 氧化 钠 溶 液
。
碳 酸 缓 冲液
,
洗凝 胶
三 于
、
用 该方 法
无 论 是 蛋 白质 的 交 联 率 还 是 交 联 后 蛋 白 质 的 活
性均 优 于 嗅 化 氰活 化 法 参
」
,
。
甲 吸级 体
一
。
的 翻备
,
考
,
文
献
,
克 吸 干 的 氨化 琼 脂 糖
生。 , 飞
中 加入
,
毫升
,
的 戊 二 醛 溶液和
。
一
一 一
毫 克氰 基 硼 氢 化 钠
将 此 混和
一
介 绍一 种 新 的 方法
— 该 方法 使 用 的条 件 比 较 温 和
性 的 影 响 较 小 或 没 有影 响
一
、 。
氰 基 硼 氢 化 钠 还原 法
,
,
,
甲基 甘 露 糖
下 昆
对 蛋 白质 天 然 属
普
和
。
将 该 溶 液和 置
克 的 甲酞
。
,
℃ 搅动 反 应 过 夜
,
对 其 它 蛋 白质 的 固 代
,
悬 液于
小时
。
。
然 后 转入 砂 芯 漏
将凝 胶 置 于
,
一
斗
,
用 大最 的 水 抽 滤 洗 净
缓 冲液 中 勺含 室温 反应
!
毫 克的
。
,
环氧 化 的 琼 脂 糖也 可 以 用 如 下 方 法 得 到 将 甘油 醚 升 翻 氢 化钠 的 液于
漏斗
,
小 时 以 封 闭 残 留 的 甲 酞基 团
, ,