脂质体的制备

脂质体的制备及检测

一.目的要求

1.掌握注入法制备脂质体的工艺。

2.掌握脂质体包封率的测定方法。

二.实验原理

1. 60年代初，Begkan等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂质膜且被水隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。1971年Rymen 等人提出将脂质体作为药物载体，即将酶或药物包裹在脂质体中。

2. 脂质体系一种人工细胞膜，它具有洋葱似的封闭球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用，特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等，合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，形成椭圆形或球状结构一—脂质体。常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。

3. 脂质体载药系统的优势：

1.被动靶向：脂质体进人体内可被巨噬细胞作为外界异物而吞噬，主要被单核巨噬细胞系统的巨噬细胞所吞噬而摄取，形成肝、脾等网状内皮系统的被动靶向性。

2.缓释作用：将药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢，延长药物在血液中的滞留时间，使药物在体内缓慢释放，从而延长了药物的作用时间。

3.降低药物毒性：药物被脂质体包封后，有效地在肝、脾和骨髓等单核巨噬细胞较丰富的器官中浓集，对心、肾有毒性的药物或对正常细胞有毒性的抗癌药包封脂质体后，可明显降低药物的毒性。

4.提高稳定性：一些不稳定的药物被脂质体包封后，可受到脂质体双层膜的保护。

4. 常用的脂质体制备方法：

注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。

脂质体作为药物载体的应用：

1、抗肿瘤药物载体：

2、抗寄生虫药物载体：

3、抗菌药物载体：

4、激素类药物载体。

5. 脂质体可分为三类：

小单室(层)脂质体：粒径在20～50nm，凡经超声波处理的脂质体混悬液，绝大部分为小单室脂质体；多室(层)脂质体：粒径约在400～3500nm；

大单室脂质体：粒径约为200～1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多属这一类。脂质体包封(裹)率的测定：

包封率％＝（C总-C游离）/C总×100 ％

式中C总------脂质体混悬液中的药物浓度

C游离------未包入脂质体中的药物浓度

影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组成比例，制备方法及介质的离子强度等。

6. 包封率的测定方法：

凝胶过滤法：常用凝胶为Sephadex G50、G100或Sephrouse4B、6B。

超速离心法

透析法

超滤膜过滤法

7. 脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。

薄膜分散法：是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理，得到小单室脂质体。特点是操作简便，但包封率较低。

注入法：根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入法。乙醇注入法是将磷脂、胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醇中，在搅拌下慢慢滴入50～60℃水性溶液中，蒸去乙醇，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备脂质体。本实验采用此法制成脂质体，水杨酸为模型药物。乙醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％～20％乙醇。最近还有人研究用Freon 为溶剂溶解磷脂质等脂溶性成分，采用注入法制备脂质体。此法适于不耐热的药物。

反相蒸发法：是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率高。

冷冻干燥法：适于在水中不稳定的药物制备脂质体。

熔融法：适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。

三.试剂与器材

1.试剂：水杨酸、卵磷脂、胆固醇、生理盐水

2.器材：磁力搅拌器、光学显微镜、超滤器、分光光度计

四.思考题

1.注入法制备脂质体成败的关键是什么？

2.制备脂质体时加入胆固醇的目的是什么？