GMS-六胺银-真菌

GMS –六胺银- GROCOTT'S改良法
目的：鉴别真菌。

原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。

醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。

对照：含有真菌的组织。

由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。

固定：10%甲醛
技术：4-5m石蜡切片。

设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。

试剂：
2% 铬酸：
三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。

1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite:
偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

5% 硼砂：
四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

六胺银备用液：
3% 六亚甲基四胺Methenamine
(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml
5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml
混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

工作液：
六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml
蒸馏水Distilled water 25.0 ml
5% 硼砂Borax 2.5 ml
使用前新鲜配制，用后丢弃。

0.5%氯化金：
氯化金Gold chloride 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。

警告：避免接触和吸入。

0.2%亮绿：
亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml
混合溶解。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。

保持所有打开盖的热溶液于通风橱中。

避免接触和吸入染料和化学品。

铬酸：对皮肤和粘膜有腐蚀性，高度毒性，影响靶器官为肾。

致癌物质。

偏重亚硫酸钠：侵入途径为摄入，能引起胃肠道不适，对皮肤、眼睛和粘膜有刺激性。

硝酸银：剧烈的皮肤和眼睛刺激，氧化剂。

摄入将导致严重的胃肠道不适。

可能致癌：可疑的肿瘤发生因素。

硫代硫酸钠：摄入毒性。

能引起胃刺激，接触对皮肤、眼睛和呼吸系统有刺激性。

亮绿SF Yellowish：可能致癌。

程序：
1. 脱蜡至无水酒精。

2. *2% 铬酸微波高火45 seconds，放置5 minutes。

3. 流水冲洗蒸馏水稍洗。

4. 1% 偏重亚硫酸钠温室1 minute。

5. 流水冲洗，蒸馏水稍洗3 changes。

6. *六胺银工作液微波高火70seconds，在热溶液中摇动玻片，直至组织应呈褐纸袋色。

7. 蒸馏水稍洗2 changes。

8. 0.5% 氯化金1 minute 或直至灰色。

9. 蒸馏水稍洗。

10. 5% Hypo, 3 minutes.
11. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。

12. 亮绿液1 minute.
13. 蒸馏水稍洗。

14. 脱水、透明和封固。

*传统方法：5% 铬酸60°C 水浴1 hour。

银液：60°C 水浴 1 hour 或直至棕色。

结果：
真菌：黑色
背景：绿色
注意：
1.如果铬酸变褐色是需要更换，传统方法5%铬酸胜于2%，高浓度的铬酸容易在微波处理时引起组织掉片。

2. 如果微生物不变黑色，检查：
a. 铬酸是否新鲜。

b. 偏重亚硫酸钠是否新鲜。

c. 硼砂是否新鲜f。

3. 如果银液出现混蚀或在染色缸上出现银镜时，重新配制溶液。

参考文献：
Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp243-246, Battelle Press, Ohio
Luna L, Manual of Histologic Staining Methods of the AFIP, 3rd Ed,1968, pp 230-231, McGraw-Hill,NY
Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech
程序卡
GMS - METHENAMINE SILVER, GROCOTT'S, MODIFIED
对照：含有真菌的组织。

由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。

技术：4-5m石蜡切片。

程序：
1. 脱蜡至无水酒精。

2. *2% 铬酸微波高火45 seconds，放置5 minutes。

3. 流水冲洗蒸馏水稍洗。

4. 1% 偏重亚硫酸钠温室1 minute。

5. 流水冲洗，蒸馏水稍洗3 changes。

6. *六胺银工作液微波高火70seconds，在热溶液中摇动玻片，直至组织应呈褐纸袋色。

7. 蒸馏水稍洗2 changes。

8. 0.5% 氯化金1 minute 或直至灰色。

9. 蒸馏水稍洗。

10. 5% Hypo, 3 minutes.
11. 流水冲洗，蒸馏水稍洗。

12. 亮绿液1 minute.
13. 蒸馏水稍洗。

14. 脱水、透明和封固。

*传统方法：5% 铬酸60°C 水浴1 hour。

银液：60°C 水浴 1 hour 或直至棕色。

结果：
真菌：黑色
背景：绿色
安全：所有打开盖的热溶液于通风橱中。

避免接触和吸入染料和化学品。

2% 铬酸：
三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。

1% 偏重亚硫酸钠:
偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

5% 硼砂：
四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

六胺银备用液：
3% 六亚甲基四胺Methenamine
(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml
5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml
混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

工作液：
六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml
蒸馏水Distilled water 25.0 ml
5% 硼砂Borax 2.5 ml
使用前新鲜配制，用后丢弃。

0.5%氯化金：
氯化金Gold chloride 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。

警告：避免接触和吸入。

0.2%亮绿：
亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml
混合溶解。

保存期6个月。

5%硝酸银备用液：
硝酸银Silver nitrate 25.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
用酸清洗过的瓶。

冷藏，保存期6个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

日期：
技师：
使用限期：
3% 六亚甲基四胺
六亚甲基四胺Methenamine 30.0 gm
蒸馏水Distilled water 1000.0 ml
用酸清洗过的瓶。

冷藏，保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

日期：
技师：
使用限期：
1% 偏重亚硫酸钠：
偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

日期：
技师：
使用限期：
1% 偏重亚硫酸钠
日期：
技师：
六胺银备用液：
3% 六亚甲基四胺
(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml
5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml
混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。

警告：腐蚀性，可能致癌。

日期：
技师：
使用限期：
5% 硼砂：
四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

日期：
技师：
使用限期：
2% 铬酸：
三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm
蒸馏水Distilled water 500.0 ml
混合溶解，保存期6个月。

警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。

日期：
技师：
使用限期：
2% 铬酸
日期：
技师：
0.5%氯化金：
氯化金Gold chloride 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。

警告：避免接触和吸入。

日期：
技师：
使用限期：
0.5%氯化金
日期：
技师：
0.2%亮绿：
亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml
冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml
混合溶解。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

日期：
技师：
使用限期：
0.2%亮绿：
日期：
技师：。