重组类生物制品蛋白原液检验

外观、可见异物、澄明度检测是指在规定的
条件下，肉眼可观察到的。 装量差异（最低装量）检测是考察制品的均 匀性。 pH检测：蛋白质是带电荷的，在其等电点处 易沉淀。人体内环境是弱碱性的。
水分测定
目的：是对生物制品稳定性影响较大，水分
越少，越稳定 方法： 费休氏法：1、容量滴定法、2、库伦滴定法 烘干法 减压干燥法 甲苯法 气相色谱法
渗透压摩尔浓度
生物膜具有半透膜性质，简单扩散属于渗透，
阻止渗透所需要的压力成为渗透压，在涉及 溶质扩散或通过生物膜的液体转运各种生物 的过程，渗透压都起着极其重要的作用。因 此在注射剂和眼用制剂中关注其渗透压是非 常重要的 通常采用冰点测定法。
无菌（微生物限度）检测
各类生物制品（除另有规定外）都不应有外
肽图
目的：肽图分析可作为与天然产品或参考品
的蛋白质一级结构作精密比较的手段，与氨 基酸组成和序列分析合并研究，可作为蛋白 质一级结构的精确鉴别。 方法： 裂解法：化学法 蛋白酶裂解法 特殊方法处理 分析法：反相HPLC、 SDS-PAGE电泳、毛细 管电泳、质谱分析
N端氨基酸序列
目的：蛋白质结构的重要指标
重组类蛋白制品各项检测
参考资料
目录
百度文库前言
原液检定 半成品检定 成品检定
一、前言
重组DNA蛋白制品是采用重组DNA技术，对
编码所需蛋白质的基因进行遗传修饰，利用 质粒或病毒载体将目的基因导入适当的宿主 菌，从而表达并翻译成蛋白质，经过提取纯 化等步骤制备而成的具有生物学活性的蛋白 制品，用于疾病的预防和治疗。
宿主菌DNA具有致癌性，是其所含的可编码
活性致肿瘤基因的特异性DNA序列。 方法：DNA探针杂交法 荧光染色法
残余抗生素
目的：生产工艺原则上不使用抗生素。如果
使用了抗生素，不仅要在纯化工艺上去除， 也要对终产品进行检测。最常用的抗生素是 氨苄西林 抗生素残留量检测法（培养法），依据抗生 素的抑菌作用，此实验仅为定性实验。
质量控制的必要性
药品要求使用安全、有效、合理
质量控制与分子大小、结构特征、质量属性
复杂程度以及生产工艺相关。
二、原液检定
理化检定
生物检定 残余杂质检定
理化检定
蛋白含量
纯度 等电点 肽图
紫外光谱
分子量 鉴别试验 N端氨基酸序列
蛋白质含量检测
目的：
其他检测项目检测的前提 制备药物制剂前提 方法： 凯氏定氮法 福林酚法（Lowry法） 双缩脲法 BCA法 考马斯亮蓝法 紫外-可见分光光度计法
方法：
体外测定法 体内测定法 酶促反应测定法 免疫活性方法
残余杂质检测
宿主菌残余蛋白质
宿主DNA残留量检测 残余抗生素残留量 细菌内毒素
宿主菌残余蛋白质
目的：在临床上需要反复多次注射的药品，
则需要做残余宿主菌蛋白质含量测定
方法：双抗夹心ELISA
宿主菌DNA残留量
检测方法：基本原理为Edman化学讲解法
現已有全自动蛋白测序仪
生物学活性检测
目的：基因工程的化学本质是蛋白质、多 肽，其活性由产品的氨基酸序列及其空间结 构决定。 其生物学活性是蛋白质药物的重要质控指 标。活性测定必须采用国际上通用的方法， 用国际或国家标准品对测定结果进行校正， 以国际单位或指定单位表示。
分子量
目的：对于某一重组蛋白来说，其相对分子
质量应该是一致的 检测方法： SDS-PAGE还原型电泳
等电点
目的：生产过程中，批与批之间重组蛋白的
等电点应当是相对一致的 检测方法： 等电聚焦电泳 毛细管电泳
鉴别试验
目的：对于重组类蛋白药物来说，其具有抗
原性 检测方法： 免疫印迹 免疫斑点
援微生物污染，无菌检测就是为了保证成品 中没有杂菌污染。 方法：直接接种法 薄膜过滤法
紫外光谱检测
目的：对于某一重组蛋白来说，其最大吸收
波长是固定的，在生产过程中每批产品的紫 外吸收光谱应当是一致的
检测方法：用水或者生理盐水将样品稀释至
100-500μg，在光路1cm、波长230-360nm处进 行扫描
纯度
目的：纯度是重组类蛋白质药物检测重要指
标之一 检测方法： SDS-PAGE非还原电泳 HPLC法
细菌内毒素检测
由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，内毒素
为外源性致热源，可引起发热反应。 方法：细菌内毒素可以引起凝胶反应，从而 创立了鲎试剂检测法，此法现已广泛应用， 此外还有光度测定法。
制剂检测
外观检测
可见异物检测 澄明度检测 pH检测 渗透压摩尔浓度检测 水分检测 装量差异（最低装量） 无菌检测 生物学活性 鉴别实验