大鼠卵巢培养

1．材料和方法

1.1实验动物

1）采用健康性成熟为交配过的雌性SPF级Wistar大鼠，鼠龄（60±5）d，每只体质量200～250g，试验期间提供足量自来水及普通饲料，动物是温度保持在22℃左右，自动通风，光照周期8:00～18:00,适应3d后用于实验。《被动吸烟对大鼠卵巢雌激素受体α、孕激素受体表达的影响》解剖学杂志201 1年第34卷第l期

2）雌性SD大鼠90只，日龄50-60d，体质量145-165g，普通喂养，自由进食，给予12h的亮暗间隔。《大鼠胚胎卵巢原位移植的生殖内分泌研究》南方医科大学报

3）成年雌性Wistar大鼠清洁级39只，体重（186.76±9.33）g。上海实验动物中心提供。成年雌性SD大鼠清洁级16只，体重（243.93±17.4）g。福建医科大学实验动物中心提供。《镉对大鼠卵巢性激素分泌功能的影响》毒理学杂志2005年12月第19卷第四期

4）未交配过成年雌性SD大鼠，经阴道细胞学检查，证实动情周期正常者作为受体，随机分成4组，每组20只。供体分别为成年雌性sD大鼠和出生2～3天雌性SD大鼠，各20只。《大鼠卵巢组织移植的实验研究》中华器官移植杂志1996年7月第17卷第三期

5）受体为SD成年雌性大鼠(购于浙江大学医学院实验动物中心)，体重220～250 g。卵巢来源：出生24 h以内的SD新生大鼠(购于浙江大学医学院实验动物中心)卵巢。《微囊化新生大鼠卵巢组织体外及异体移植》细胞生物学杂志

1.2实验试剂

1)兔抗大鼠ERa、PR多克隆抗体购自Santa-Cruz公司；SP免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。《被动吸烟对大鼠卵巢雌激素受体α、孕激素受体表达的影响》解剖学杂志201 1年第34卷第l期

2)孕马血清促性腺激素（PMSG),杭州动物药品厂;人绒毛膜促性腺激素（HCG)，安徽新力药业股份有限公司。孕酮（P)、雌二醇（E2）放免测定药盒，北京北方生物制品研究所，DME/F-12 1:1细胞孵育盒，Hyclone公司。《镉对大鼠卵巢性激素分泌功能的影响》毒理学杂志2005年12月第19卷第四期

3)海藻酸钠f中国医药集团上海化学试剂公司)；聚左赖氨酸分子量为27400(Sigma公司，美国)；RPMI 1640培养基(上海吉诺生物医药技术有限公司)；胎牛血清(FBS，杭州四季青生物制品所)；Estradiol Test Units(美国Beckman Coulter公司)；PGN Test Units(美国Beckman Coulter公司)；其余试剂均为分析纯。《微囊化新生大鼠卵巢组织体外及异体移植》细胞生物学杂志

2.大鼠器官体外培养

2.1 椎间盘体外培养

1）取健康清洁级SD大鼠60只，5-6周龄，150g左右，无菌条件下完整取出腰段椎间盘器官（包括髓核组织、纤维环、上下软骨终板及少量附着于终板的松质骨）共350个，随机分为5组；

2）无菌条件下高渗肝素盐水冲洗椎间盘3次，2.5倍放大镜下进一步修整后置入12孔培养皿内，37℃、5％CO2条件下培养，高渗DMEM/F12培养液通过每1000ml等渗培养液内加入3.72克NaCl获得，小牛血清浓度：20％，每天换液一次。

2.2 体外前庭器官培养

按照Lambert的方法，取新生2 d大鼠，20℃冰箱冷冻麻醉5min后全身浸入750mL／L乙醇5 min，无菌条件下断头，置于冰的Hank液中，在解剖显微镜下取出椭圆囊，打开囊壁，去除耳石，用吸管悬滴将椭圆囊移人鼠尾胶包被过的24孔培养板中央，放于37℃，50

mL／L CO2培养箱，待组织贴壁后加入适量DMEM高糖培养液，置于培养箱中培养．每日于倒置显微镜下观察移植物色泽及培养液情况，隔日将原液吸出，加入等量培养液．培养至1，3，5和7d取出固定，透射电镜观察。