原核蛋白包涵体表达案例

原核蛋白（包涵体）表达案例
原核蛋白（包涵体）表达案例
1.实验目的
以客户提供的目的蛋白基因构建表达载体，通过原核蛋白表达体系获得目的蛋白A。

2.实验设计
（1）分析客户提供的目的蛋白序列，设计蛋白表达方案；
（2）选择钟鼎特色载体pCzn1，构建表达质粒pCzn1-A；
（3）IPTG诱导进行目的蛋白表达，并且优化表达条件，将诱导条件调整至37℃，经分析目标蛋白主要呈包涵体形式，通过Western Blot检测蛋白A是否表达；（4）通过Ni柱纯化获得目的蛋白A，SDS-PAGE检测纯化蛋白纯度，BSA方法测定蛋白浓度。

3.蛋白分析
（1）经EditSeq翻译目的蛋白A序列：m.w.=23.25kd，pI=5.22
（2）经UniProt匹配，蛋白A物种来源：人类
（3）蛋白性质分析
蛋白亲疏水分析
蛋白跨膜结构域分析
蛋白信号肽预测
分析结果：
目的蛋白整体呈亲水性、无跨膜结构域、无信号肽序列，可尝试全长表达。

结论：将目的基因构建在钟鼎特色载体pCzn1上，利用载体自带信号肽分泌表达。

4.表达载体构建
4.1pCzn1-A质粒酶切验证：
4.2 pCzn1-A 质粒测序验证：
部分序列比对结果图
5. 蛋白表达及纯化
钟鼎特色载体pCzn1 酶切鉴定
Marker: 200,500,800,1200,2000,3000,4500
Line1: 酶切前质粒 Line2: 酶切后质粒
基因名称：A （OD260/OD280:1.82） 酶切位点：NdeI /XhoI
6.实验结论
目的蛋白A在IPTG诱导下进行包涵体形式表达，蛋白表达成功。