试验六远志对小白鼠的祛痰作用

远志对小鼠的祛痰作用

小鼠气管酚红法

【目的】

1．学习酚红呼吸道排泌试验筛选祛痰药的方法。

2．观察远志对小鼠气管酚红排泌量的影响。

【原理】 给小鼠腹腔注射指示剂酚红后，后者可以部分地从气管分泌排出。远志能增强呼吸道的分泌功能，从而相应增加酚红的排泌量。经碳酸氢钠溶液灌洗气管后，使灌洗液显色，灌洗液用分光光度计检测吸光度或与酚红标准管比色，可确定酚红的排泌量，从而检验药物的祛痰作用。

【材料】

1．动物 昆明种小鼠，20±2g ，清洁级，雌雄兼用。

2．器材 722n 型分光光度计、JY4001电子天平、离心机、注射器（1mL ）、5号针头、8号针头、小鼠灌胃器、手术剪、眼科剪、眼科镊、蛙板、蛙钉、橡皮泥、丝线、试管、酚红标准管（0.1μg ／mL ～100μg ／mL ）、滤纸等。

3．药品 1g ／mL 远志水煎液、0.05g ／mL （5%）氯化铵溶液、0.005g ／mL （0.5%）酚红溶液、0.05g ／mL （5%）碳酸氢钠溶液、1mol ／L 氢氧化钠溶液、生理盐水。

0.005g ／mL 酚红溶液的配制：酚红0.5g ，以1mol ／L 氢氧化钠5mL 溶解，加生理盐水至100mL 。

【方法】

取6只小鼠，称重、编号，随机分为三组，每组各2只、标记，分别灌胃远志水煎液、氯化铵溶液、生理盐水0.2mL ／10g 。30min 后，每鼠分别腹腔注射酚红溶液0.1mL ／10g 。30min 后，处死动物，解剖分离气管，于喉头下将磨平的8号针头插入气管约0.3cm ，用丝线结扎固定后，用1mL 注射器抽取0.05g ／mL 碳酸氢钠溶液0.5mL ，通过针头来回灌洗呼吸道3遍，最后1遍抽回灌洗液，注入试管中。上述操作连续重复3次，共冲洗9个来回，抽得灌洗液1.5mL （极限量，尽可能回抽获得），混匀于同一试管中。

酚红浓度的测定：

方法1：灌洗液经3000r ／min ，15min 离心后取上清液，用722n 型分光光度计、波长546nm ，读取吸光度。吸光度代入标准曲线方程，换算出相应的酚红浓度。

方法2：灌洗液与不同浓度酚红标准管比对颜色，按颜色接近程度确定相应灌洗液酚红浓度。 汇总全班实验结果，进行单因素方差分析，检验远志能否增加气管酚红排泌量。

【结果】

表 远志对小鼠气管酚红排泌量的影响（ _ x ±s ）

组别 药物 剂量

（g ／kg ）

动物数 （n ） 气管酚红排泌量 （μg ／mL ） 阴性对照组 生理盐水 —

阳性对照组 氯化铵溶液 1.0

受试给药组 远志水煎液

20.0 【注意事项】

1．酚红必须准确注入腹腔内。

2．解剖操作及针头插入气管时应避免损伤血管，以免血液混入灌洗液而干扰比色。

3．必须按时处死动物，及时灌洗；事先应掌握好个体间实验间隔时间。

4．灌洗操作应轻盈连贯，抽得灌洗液量应一致。

5．标准曲线适用于同批次实验。

【讨论】

【结论】