选修一--生物技术实践知识复习汇总

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选修1《生物技术实践》知识归纳图解(马中邹伟春)

（一）培养基的基本知识 1．培养基的营养成分

2 (1)目的明确。要根据微生物的种类、培养目的等选择原料、配制培养基。

(2)营养要协调。各种营养物质要保证适当的浓度和比例。营养物质比例过低，不能满足微生物生长；浓度过高则会抑制微生物的正常生长。营养物质

的浓度比(如C/N)还会直接影响某些微生物的代谢产物，如谷氨酸生产，C/N=4∶1时，菌体大量繁殖，谷氨酸产量少；而C/N=3∶1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大。

(3)pH 要适当。不同微生物生长所需pH 不同。如细菌pH 保持在6.5～7.5之间；放线菌保持在7.5～8.5之间；真菌应保持在5.0～6.0之间。 3微生物的实验室

胚。

②加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。

③选择培养基一般只生长具有特定的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。

注意：选择培养基的选择方法

(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主

要营养成分完整的基础上加入。

(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为惟一碳源时，可以分离出消除石油污染的微生物。

(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。

（二）灭菌技术

1．无菌技术的概念

在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，其主要技术是无菌操作。无菌技术是指通过一定物理、化学的手段，防止实验室培养物被外来微生物污染。无菌技术主要围绕如何避免杂菌污染展开的。

2．消毒、灭菌的方法

注意：

①无菌操作是微生物培养过程中，防止杂茵污染的关键步骤。

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②消毒只能消灭或抑制营养体的活动，而不能达到彻底灭菌。酒精消毒用体积分数为70%的酒精效果最好，因浓度过高，会使菌体表面蛋白凝固成一层保护膜，乙醇分子不能进入其中；浓度过低，杀菌力减弱。而灭菌除杀死营养体外，还必须杀死芽孢和孢子。 ③灭菌消毒的原理，就是通过一定理化手段，使病原茵蛋白质变性，失去生命活性。

（三）微生物的纯化培养技术

1．常用细菌培养基——蛋白胨培养基配制流程：

2．纯化大肠杆菌

Ⅰ．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。 Ⅱ．微生物接种方法： (1)平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生

在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如图) (2)稀释涂布平板法：10倍系列稀释操作

计算 称量 溶化 灭菌

注意：据配方计算配制一定体积培养基时各成分的用量 注意： ①倒平板时，烧杯口要通过酒精灯火焰灭菌。 ②平板冷凝后要将平板倒置，以确保拿放方便，同时避免水分蒸发，以利微生物生长，也可防止皿盖上凝结的水滴滴入培养基，影响pH ；其次防止细菌透过皿底、皿盖的缝隙，落在培养基上。 ③倒平板时，不能将培养基溅在皿底与皿盖之间，以防止杂菌滋生，污

染培养基 （调PH ） 倒平板 注意：

①牛肉膏较粘稠，应玻棒挑取，在称量纸上称量

②牛肉膏蛋白胨易吸潮，动作要迅速

注意： ①溶化琼脂时要控制火力的大小并不断

搅拌，以免培养基溢出或烧焦；

②加热过程中部分水分蒸发，待琼脂完全

溶化后应补加蒸馏水，以保持溶液的浓度

注意： 由于不同微生物适宜的pH 不同，因此在熔化后，必须用NaOH 或HCl 来调节pH 装瓶 注意：分装至试管时培养基的高度不要超过试管高度的1/5 注意： ①可用高压蒸汽灭菌法 ②用干热灭菌法时温度160～170℃ (不能超过180℃，否则易引起报纸等燃烧) ③一般是培养基先灭菌再倒平板，也可先倒平板,再灭菌

划线操作时注意：

（1）用接种环取菌种之前、每次划线之前和划线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再操作；(第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者)

（2）划线时不要划破培养基，如果采用分段划线法操作从第二次操作应总在上一次划线末端开始，首尾不能相连；（3）操作始终在酒精灯火焰旁进行。涂布操作时注意：

（1）配制系列梯度稀释液时，所用的试管和移液管均需灭菌，必须用无菌水配制；

（2）涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰引燃。不要将过热的涂布器放入盛有酒精的烧杯中，一面引燃其中的酒精；

（3）配制系列梯度稀释液和转移菌液以及涂布过程等必须都在酒精灯火焰旁进行，移液管头不能接触任何物体。

3．菌种的保存

①对于频繁使用的菌种，可以采用4℃冰箱中临时保藏的方法。②对于需要长期保存的菌种，可以采用-20℃甘油管藏的方法。

注意：①菌种保藏的原理是：低温、干燥和隔绝空气，使微生物代谢能力和繁殖能力降低。

②不同菌种的保藏方法因不同菌种而异。需氧型，必须低温有氧，而厌氧型必须低温无氧；腐生微生物可提供牛肉膏蛋白胨培养基，而寄生微生

物需提供活体组织等非人工培养基，如病毒需提供活鸡胚。

（三）微生物的筛选与计数（以“土壤中分解尿素的细菌”为例）