无菌操作技术(何玉琴)

无菌操作技术（二）—干燥箱、培养箱、高压灭菌器、超净台的使用及维护

教学大纲

一、实验教学目的

了解干燥箱、培养箱、高压灭菌器、超净台的工作原理，掌握干燥箱、培养箱、高压灭菌器、超净台的使用及维护方法。

二、实验项目内容、基本要求与学时分配

实验讲义

一、干燥箱

干燥箱广泛用于机电、化工、塑料、轻工等行业及科研单位对各种产品、试品进行烘培、干燥、固化、热处理及其它方便的加热。

使用方法：

1、通电前请检查本箱的电器性能，并应注意是否有断路或漏电现象。

2、将需干燥的物品均匀放置于试样搁板上，试品之间有一定的间隔。

3、关上箱门同时旋开顶部的排气阀，接上电源。

4、设定所需的温度和时间（按照使用说明书操作）。

5、当温度升到所需的温度时，指示灯灭。刚开始恒温时可能会出现温度继续上升，此乃余热影响，此现象约半小时左右会趋于稳定。在恒温过程中，借助箱内控温器自动控温，不用人工管理。

注意事项：

1、该箱应放在室内水平处。

2、此箱为非防爆干燥箱，故带有易燃挥发物品，切勿放入干燥箱内，以免发生爆炸。

3、每次使用结束后，关电源。打开箱门取物时请千万注意，以免烫伤。

4、若长期停用，必须对箱体进行内、外清洁，拔掉电源插头罩上塑料防尘套。

二、培养箱

培养箱是科研实验的必需设备，主要适用于医疗卫生、医药、生物、农业、科研单位等部门作储藏菌种、生物培养之用。现在主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热式和隔水式培养箱三种类型，每种类型都有其特点和独特的功用，可以根据自己的需求选择适合的培养箱。

（一）生化培养箱这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。因此可适应范围很大，一年四季均可保持在恒定温度，因而逐渐普及。该培养箱使用与维修保养类似电热式培养箱. 由于安装有压缩机，因此也要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定，不要过度倾斜，及时清扫散热器上的灰尘等。

（二）二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进，主要是能加入CO2，以满足培养微生物所需的环境。主要用于组织培养和一些特殊微生物的培养。

1. CO2培养箱的安装与调试：CO2培养箱的正面有操作盘，盘上设有电源开关，温度调节器（手动式和液晶显示盘），CO2注入开关，CO2调节旋扭，湿度调节旋扭，温度显示盘，CO2显示盘和湿度显示盘，二氧化碳样品孔（用于抽取箱内的样品，以检测箱内的CO2是否达到显示盘上所显示的含量）和报警装置（超温报警灯）。

（1）培养箱应放置于位置比较平稳，并远离热源的地方，以防止温度波动和微生物的污染。（2）在接通电源前，应按照使用说明书，在培养箱内加入一定的蒸馏水（所加入的水最好加入一定量的消毒剂，详见说明书），以免烧坏机器。

（3）当水加到一定量后，报警灯亮，即停止加水，打开电源开关，即开始加温，将温度控制器调到所需温度。

（4）当温度达到所需温度时，则自动停止加热，超过所需温度时，超温报警灯亮，并发出报警声。

（5）培养箱所用的CO2可以用液态CO2或气体，无论用哪种CO2给供的管子不能太变曲，以保证气体的畅通。一般选用CO2钢瓶，接上压力控制表即可。

（6） CO2含量的调零在箱内温度和湿度稳定后（一般须三天），旋动CO2 调节旋扭，使显示盘的数字调到0.00，过5分钟后如需要再重复调整，直到显示盘上的读数稳定为止。打开CO2注入开关（注入灯亮），将CO2设定值调到所需浓度，使浓度达到设定值浓度后（注入灯熄灭），并至少维持10分钟。此后则由CO2控制器自动调节箱内的CO2含量。（7） CO2培养箱湿度的调整先将湿度调节旋扭按下，再将湿度调节旋扭转动至所需培养湿度，此后由湿度调节器自动调整湿度。

（三）电热式和隔水式培养箱电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成，隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层，电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成，以增强保温效果，培养箱顶部设有温度计，用温度控制器自动控制，使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温，电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。在培养箱内的正面侧面，有指示灯和温度调节旋扭，当电源接通后，红色指示灯亮，按照所需要温度转动旋扭至所需刻度，待温度达到后，红色指示灯螅灭，表示箱内已达到所需温度，此后箱内温度可靠温度控制器自动控制。

注意事项：

1、培养箱应放置在具有良好通风条件的室内，在其周围不可放置易燃易爆物品；

2、培养箱外壳必须有效接地，以保证使用安全；

3、箱内外应每日保持清洁，每次使用完毕应当进行清洁。长期不用应盖好塑料防尘罩，放在干燥室内；

4、箱内物品放置切勿过挤，必须留出空间；

5、设备管理员根据检定计划联系通过CNAL认可的计量单位进行检定，并保存计量证书。

设备管理员定期对温度控制情况进行检查。

三、高压灭菌锅

又名高压蒸汽灭菌锅，利用电热丝加热水产生蒸汽，并能维持一定压力的装置。主要有一个可以密封的桶体，压力表，排气阀，安全阀，电热丝等组成。原理：利用高压蒸汽穿透力强，灭菌效果好的特点设计的。分类：手提式高压灭菌锅和自动高压灭菌锅。

（一）手提式电热高压灭菌器应用于耐受高温高压蒸汽的各种器材、试剂的灭菌。主要需注意的是安全。安全阀、压力表必须保证正常。灭菌前注意补充水量，否则干烧将导致电热管损坏。一般连续工作时间不能超过1小时，总之，普通电热灭菌器时刻须有人值守。维护主要是安全阀、压力表的检查，电热管的检查，密封垫的检查，保证正常。水质不良的地区需要清理水垢。

（二）自动高压灭菌锅

使用方法：

1、用橡胶管连接在放汽管上，然后插没到一个装有冷水的容器里。

2、打开盖子加水（自来水或蒸馏水）到灭菌室，直到水位指示处，每次灭菌前

都应及时充水，并关紧放汽阀和放水阀，防止缺水干燥。

3、将待消毒的物品放在不锈钢网篮中，放入灭菌室，并仔细检查密封圈是否脱

落，然后顺时针用力旋紧盖子，直到不能旋动为止。

4、打开电源开关，设定灭菌的温度和时间。

5、按下“工作”键进入自动控制灭菌过程。

注意事项：

1、启盖或合盖时都应在电源断开时操作。

2、灭菌前压力表的读数应为0Mpa。

3、检查排水盒里的水是否在“HIGH”和“LOW”刻度之间，并确认排气旋钮”EXHAUST”处于关闭状态（closed）。

4、连续使用此高压灭菌锅时，两次使用间请使盖子处于打开状态15min或更长时间。

5、不要在消毒过程中或刚消毒完毕时触摸内胆、盖子等以免烫伤。

6、在使用过程中，当压力表指示超过0.165MPA时，安全阀不要开启，应立及切断电源，放尽蒸汽，冷却后及时更换安全阀。

四、超净工作台

超净工作台是一种局部净化设备，即利用空气洁净技术使一定操作区内的空间达到相对的无尘、无菌状态。以气流方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。

使用方法：

1、每次使用超净工作台时，实验人员应先开启超净工作台上的紫外灯，紫外照射20分钟后使用。并检查操作区周围各种可开启的门窗处于工作时位置。操作最好在操作区的中心位置进行，在设计上，这是一个较安全的区域。

2、开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。

3、整个实验过程过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。

4、实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15分钟。

5、如遇机组发生故障，应立即通知实验动物室，由专业人员检修合格后继续使用。

6、实验人员应注意保持室内整洁。

7、超净工作台的滤材每2年更换一次，并作好更换记录。

注意事项：