白芍中芍药内酯苷和芍药苷制备工艺研究
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梅特勒 ＸＳ１０５ＤＵ 分析天平（梅特勒利多上海有限 公司，瑞士）；安捷伦 １２００ 高效液相色谱仪（ 安捷伦有 限公司，美国）；ＨＹ －２Ａ 快速振荡混匀器（金坛市荣华 仪器制造有限公司，中国）；Ｈ６６ＭＣ 超声清洗机（ 无锡 超声电子，中国）；ＫＤＣ －４０ 高速离心机（ 科大创新股 份有限公司中佳分公司，中国） 。 １．２ 试药
图 １ 芍药内酯苷泄漏曲线
图 ２ 芍药苷泄漏曲线
从绘制的泄漏曲线可知，在上样体积达 ２５ｍＬ 时， ２ 种成分的峰面积突然增大，表明此时树脂已经达到 最大吸附量，２ 种成分均开始泄漏。 因此，白芍提取物 最大上样量确定为白芍提取液体积与树脂重量比为 ２０∶１００，即 １∶５。 ２．６ 乙醇洗脱浓度的考察
含量（ ％）
（％）
总含量 （％）
转移率 （ ％）
１
２６ ．２６
２７．２１
５３ ．４７
９２ ．６７
２
２６ ．８５
２５．４５
５２ ．３０
９３ ．１５
３
２８ ．９６
２５．１２
５４ ．０８
９１ ．３８
３ 讨论 采用大孔吸附树脂法纯化白芍中的芍药苷成分或
内酯 苷 类 成 分 已 有 一 些 研 究［３ －４］ 。 也 有 学 者 采 用 Ｄ１０１ 型大孔吸附树脂对桂枝茯苓胶囊中白芍、牡丹皮 共有成分进行研究［５］ 。 但采用大孔吸附树脂法使芍 药内酯苷和芍药苷两种单体成分含量之和达到 ５０％， 尚未见报道，本研究可为进一步新药研发和工业化生 产提供基础。 此外，在树脂型号筛选中，也曾比较了与 ＡＢ －８ 性能相近的 Ｄ１０１ 型树脂，该树脂对两种成分 的同时保 留 能力 与 ＡＢ －８ 型 号 有 一 定 差 距， 同 时， ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂也是现代生产中较常用的树脂 型号之一，相 关 研 究 较 多， 工 业 化 生 产 技 术 也 相 对 成 熟，因此确定采用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂。 参考文献：
表 ３ 洗脱剂的选择
乙醇浓度 （ ％）
芍药内酯苷 芍药苷含量
含量（ ％）
（％）
总含量 （ ％）
转移率 （ ％）
１０
１５ ．９６
１５ ．９８
３１ ．９４
５３ ．９８
２０
２１ ．６９
２２ ．７２
４４ ．４１
６９ ．７２
２５
２６ ．８６
２６ ．６９
５３ ．５５
９５ ．３８
３０
２３ ．０１
２４ ．７７
４７ ．７８
芍药内酯苷解 吸量（ ｍｇ）
芍药苷解吸量 （ ｍｇ）
芍药内酯苷解 吸率（ ％）
芍药苷解吸率 （％）
ＡＢ －８
４６ ．１５０
４８．３９４
４４ ．５０２
４７ ．９６４
９６．４３
９９ ．１１
ＮＫＡ －９
２３ ．００４
２９．８２４
２０ ．０４４
２９ ．４４１
８７．１３
９８ ．７２
Ｄ３０１
２６ ．０２４
３４．４６７
大 连 化 物 所 Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ 色 谱 柱 （ ３．９ｍｍ × ２５０ｍｍ，５μｍ）； Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ 保护柱； 流动相： ０．１％磷 酸水溶液 －乙腈（１６∶８４ ）；流速：１．０ｍＬ ／ｍｉｎ；检测波 长：２３２ｎｍ；柱温 ４０℃。 ２．２．２ 标准曲线绘制
分别 取 芍 药 内 酯 苷 和 芍 药 苷 对 照 品 １３．０、 １２畅０ｍｇ，精密称定，置 ２５ｍＬ 容量瓶中，加 ５０％甲醇溶 解、定容至刻度。 按色谱条件测定，采用自动进样器分 别进样 ３、６、９、１２、１５μＬ，记录各峰峰面积。 以色谱峰 面积 Ｙ 与 质 量 Ｘ 绘 制 标 准 曲 线， 回 归 方 程 为： Ｙ ＝ １畅１７５ ×１０６ ｘ －１．３２５ ×１０５ 、Ｙ ＝１．２４３ ×１０６ ｘ －３．４７２ × １０５ （相关系数分别为 ｒ ＝０．９９９ ９ 和 ｒ ＝０．９９９ ９。 ２．２．３ 供试品溶液制备
取干浸膏粉末 ５０ｍｇ，精密称定，置 ２５ｍＬ 容量瓶 中，加 ５０％甲醇溶液约 ２０ｍＬ，超声 １０ｍｉｎ，放至室温， 加 ５０％甲醇溶液定容至刻度，溶液过 ０．４５μｍ 微孔滤 膜滤过，备用。 ２．３ 大孔吸附树脂预处理
大孔吸附树脂用乙醇充分浸泡溶胀后，采用湿法 装柱，用乙醇冲洗至乙醇流出液与水混合（１∶２） 不呈 白色混浊，再以大量蒸馏水洗至无醇味。 ２．４ 树脂型号的筛选
中药分析研究。
有限公司；其余试剂为分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 上柱样品液的制备
取白芍药材 ２ｋｇ，加 ７０％乙醇回流提取，溶剂体积 为 １２Ｌ，提取 ２ 次，每次 １ｈ，过滤后，合并提取液，滤液 减压回收至无醇味后，减压浓缩至相对密度为 １．２０ （４０ ℃热测） 的稠膏，放冷，备用。 ２．２ 芍药内酯苷和芍药苷含量测定方法 ２．２．１ 色谱条件
取预处理后的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，６ 份，分别装入内径为 ２．４ｃｍ 的玻璃柱，按 ２．５ 确定的 吸附条件，将白芍提取液各 ２０ｍＬ 分别加入的树脂柱 中，进行动态吸附。 先用蒸馏水洗脱至洗脱液近无色
２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期 中 医 药 学 报
收稿日期：２０１３ －１１ －２６ 修回日期：２０１４ －０２ －１５ 基金项目：黑龙江省教育厅“ 骨干教师支持计划” （１２５１Ｇ０５７） 作者简介：吴修红（１９７８ －） ，女，博士，博士后，副教授，主要从事中药及
复方药效物质基础研究。 倡通讯作者：孙晖（１９６３ －） ，女，博士，教授，博士研究生导师，主要从事
图 ３ 芍药内酯苷洗脱曲线
图 ４ 芍药苷洗脱曲线
２．８ 验证试验 取预先处理好的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，
装柱，加入白芍提取液 ２０ｍＬ （ 比重为 １．２０，４０℃热 测），平行操作 ３ 份，先用蒸馏水（４ＢＶ） 洗至流出液无 色后，再用 ２５％ 乙醇溶液，按确定的洗脱条件进行洗 脱，收集洗脱液，减压回收至无醇味厚，减压干燥成干 膏，称定干膏重量，并采用 ＨＰＬＣ 法测定干膏中芍药内 酯苷和芍药苷含量。 结果见表 ４。
２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期 中 医 药 学 报
Ｖｏｌ畅４２，Ｎｏ畅２，Ａｐｒ．２０１４
Ａｃｔａ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
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白芍中芍药内酯苷和芍药苷制备工艺研究
吴修红，马艳春，何录文，孙畅，杨恩龙，孙晖倡
（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 １５００４０）
中剩余芍药内酯苷和芍药苷含量，计算每种树脂的吸 脂性能均最优。 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂是现代生产中
附量和吸附率。 再将吸附白芍提取物达饱和的上述 ４ 应用较多的树脂之一，工业化技术比较成熟，因此，综
种树脂，以蒸馏水冲洗，然后将树脂装入具塞三角烧瓶 合考虑，采用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂用于白芍中芍药
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中 医 药 学 报 ２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期
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采用静态吸附法。 按大孔树脂处理方法分别将 ４
在筛选的 ４ 种树脂中，以 ＡＢ －８ 型树脂的对于白
摘 要：目的：研究白芍中芍药内酯苷和芍药苷的制备方法。 方法：采用 ＨＰＬＣ 法，以芍药内酯苷和芍药 苷的含量和转移率为指标，考察不同型号大孔树脂对白芍药材醇提物吸附性能及洗脱参数。 结果：以 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂的纯化效果最佳，２ 种成分加和大于 ５０％。 结论：ＡＢ －８ 大孔树脂可用于白芍中 芍药内酯苷和芍药苷的分离富集。 关键词：白芍；芍药内酯苷；芍药苷；大孔吸附树脂 中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２ －２３９２（２０１４）０２ －００７１ －０３
白芍为毛莨科芍药（ Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ．） 的去 皮干燥根， 性微苦， 味苦酸，具有养血柔肝， 缓中止 痛， 敛阴收汗的功能，为桂枝茯苓方药的主要组成药 物［１］ 。 白芍主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷等单 萜类化合物［２］ 。 本研究采用大孔吸附树脂法，以芍药 内酯苷和芍药苷双指标考察白芍的大孔吸附树脂纯化 工艺。 １ 仪器与试药 １．１ 仪器
ＡＢ －８ 型 （ 批 号 ２００７１０１５ ）、 ＮＫＡ －９ 型 （ 批 号 ２００７０２１２ ）、ＮＫＡ －２ 型 （ 批 号 ２００７１２１５ ）、 Ｄ３５２０ 型 （批号 ２００７０３１６ ） 大孔吸附 树 脂： 南 开 大 学 化 工 厂； Ｄ１０１ 型大孔吸附树脂（ 天津制胶厂）；芍药苷对照品： 中国生物制品检定所（１１０７３６ －２００８３２ ），供含量测定 用；芍药内酯苷对照品：上海中药现代化研究中心（ 供 含量测定用，纯度大于 ９８％）；白芍提取物：实验室自 制；乙腈：美国迪马公司，色谱级；纯净水，杭州娃哈哈
中，加入 ９５％的乙醇 １００ｍＬ，盖塞置摇床上，每隔 ２ｈ 内酯苷 和 芍 药 苷 的 分 离 富 集 工 艺 研 究。 结 果 见 表
晃动 １０ｍｉｎ，浸泡 １２ｈ，滤过，测定滤液中芍药内酯苷和 １ ～２。
芍药苷含量，计算每种树脂的解吸率。
表 １ 树脂吸附量测定结果
树脂型号
芍药内酯苷初 始量（ ｍｇ）
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（４ ＢＶ） ，再分别用不同浓度的乙醇溶液洗脱至近无色， 将乙醇洗脱液减压回收后，减压干燥，称定干膏重量， 并用 ＨＰＬＣ 法测定干膏中芍药内酯苷和芍药苷含量， 结果见表 ３。 从结果可知，用 ２５％乙醇作为洗脱溶剂， 乙醇洗脱物中芍药内酯苷及芍药苷含量均较高，两种 成分的含量之和已超过 ５０％，且转移率达到 ９５％，因 此，确定 ２５％乙醇为最佳洗脱剂。 结果见表 ３。
９４ ．２７
５０
２２ ．５６
２２ ．５３
４５ ．０９
９６ ．９８
７０
１４ ．７６
１９ ．０２
３３ ．７８
９８ ．４３
２．７ 洗脱曲线的考察 取预处理后的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，装
柱，按 ２．６ 和 ２．７ 确定的吸附和洗脱条件，取白芍提取 液进行样品 上 柱、 吸 附 和 洗 脱 操 作， 每 个 树 脂 柱 体 积 （ＢＶ）收集 １ 份，分段收集乙醇洗脱液，收集 １０ 份。 分 别取 １ －１０ＢＶ 洗脱液，采用 ＨＰＬＣ 法测定洗脱液中芍 药内酯苷及芍药苷的峰面积。 结果见图 ３ ～４。 从结 果可知，８ 倍柱体积时芍药内酯苷及芍药苷峰面积均 已较低，且再下一柱体积也相差不多，可判定树脂柱上 吸附的芍药内酯苷及芍药苷成分已经洗脱完全，故洗 脱剂用量确定为 ７ 倍量柱体积。
４３ ．６１９
５
４ ．６０１
５ ．９６５
Ｄ３０１
６５ ．３８８
７３ ．４４３
３９．３６４
３８ ．９７６
５
５ ．２０５
６ ．８９３
Ｄ１０１
６５ ．３８８
７３ ．４４３
２８．８６７
３５ ．８０２
５
７ ．３０４
７ ．５２８
表 ２ 树脂解吸率测定结果
树脂型号
芍药内酯苷吸 附量（ ｍｇ）
芍药苷吸附量 （ ｍｇ）
芍药苷初始量 （ ｍｇ）
芍药内酯苷剩 余量（ ｍｇ）
芍药苷剩余量 （ ｍｇ）
树脂量 （ ｇ）
芍药内酯苷吸 附率（ ｍｇ ／ｇ）
芍药内酯苷吸 附率（ ｍｇ ／ｇ）
ＡＢ －８
６５ ．３８８
７３ ．４４３
１９．２３８
２５ ．０４９
５
９ ．２３０
９ ．６７９
ＮＫＡ －９
６５ ．３８８
７３ ．４４３
４２．３８４
种大孔吸附树脂预处理，每种取 ５ｇ 分别放入具塞三角 芍中的芍药内酯苷及芍药苷 ２ 种成分的吸附率最高；
烧瓶中，加入白芍提取液 １００ｍＬ，盖塞，置摇床上，每隔 且该树脂对两种成分的解吸率也 ９０％以上，无论吸附
２ｈ 晃动 １０ｍｉｎ，放置 １２ｈ，充分吸附后，滤过，测定滤液 率还是解吸率，在筛选的树脂中，ＡＢ －８ 型大孔吸附树
１７ ．２３３
２４ ．８１９
６６．２２
７２ ．０１
Ｄ１０１
３Hale Waihona Puke Baidu ．５２１
３７．６４１
２７ ．４７７
３６ ．３４０
７３．９２
９６ ．５４
２．５ 动态吸附曲线的考察 取 ＡＢ －８ 型 大 孔 树 脂 １００ｍＬ， 预 处 理 后 装 柱
（２畅４ｃｍ ×２０．０ｃｍ），按上述确定的吸附条件，将白芍醇 提物样品液（比重为 １．２０，４０℃热测） 通过树脂柱，进 行动 态 吸 附 考 察。 流 出 液 每 ５ｍＬ 收 集 １ 份， 采 用 ＨＰＬＣ 法测定每份流出液中芍药内酯苷及芍药苷的峰 面积（进样体积 １０μＬ），以流出液体积为 Ｘ 和芍药内 酯苷 及 芍 药 苷 的 峰 面 积 为 Ｙ 绘 制 泄 漏 曲 线， 见 图 １ ～２。
从表 ４ 可以看出，三次验证试验结果均较稳定，芍 药内酯苷及芍药苷含量均超过精制部位的 ５０％，且转 移率也都在 ９０％以上，工艺稳定，重现性好，且操作简 单，在生产中完全可以利用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂对 白芍中芍药内酯苷及芍药苷进行精制。
表 ４ 验证试验结果
树脂使用 次数（ 次）
芍药内酯苷 芍药苷含量
图 １ 芍药内酯苷泄漏曲线
图 ２ 芍药苷泄漏曲线
从绘制的泄漏曲线可知，在上样体积达 ２５ｍＬ 时， ２ 种成分的峰面积突然增大，表明此时树脂已经达到 最大吸附量，２ 种成分均开始泄漏。 因此，白芍提取物 最大上样量确定为白芍提取液体积与树脂重量比为 ２０∶１００，即 １∶５。 ２．６ 乙醇洗脱浓度的考察
含量（ ％）
（％）
总含量 （％）
转移率 （ ％）
１
２６ ．２６
２７．２１
５３ ．４７
９２ ．６７
２
２６ ．８５
２５．４５
５２ ．３０
９３ ．１５
３
２８ ．９６
２５．１２
５４ ．０８
９１ ．３８
３ 讨论 采用大孔吸附树脂法纯化白芍中的芍药苷成分或
内酯 苷 类 成 分 已 有 一 些 研 究［３ －４］ 。 也 有 学 者 采 用 Ｄ１０１ 型大孔吸附树脂对桂枝茯苓胶囊中白芍、牡丹皮 共有成分进行研究［５］ 。 但采用大孔吸附树脂法使芍 药内酯苷和芍药苷两种单体成分含量之和达到 ５０％， 尚未见报道，本研究可为进一步新药研发和工业化生 产提供基础。 此外，在树脂型号筛选中，也曾比较了与 ＡＢ －８ 性能相近的 Ｄ１０１ 型树脂，该树脂对两种成分 的同时保 留 能力 与 ＡＢ －８ 型 号 有 一 定 差 距， 同 时， ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂也是现代生产中较常用的树脂 型号之一，相 关 研 究 较 多， 工 业 化 生 产 技 术 也 相 对 成 熟，因此确定采用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂。 参考文献：
表 ３ 洗脱剂的选择
乙醇浓度 （ ％）
芍药内酯苷 芍药苷含量
含量（ ％）
（％）
总含量 （ ％）
转移率 （ ％）
１０
１５ ．９６
１５ ．９８
３１ ．９４
５３ ．９８
２０
２１ ．６９
２２ ．７２
４４ ．４１
６９ ．７２
２５
２６ ．８６
２６ ．６９
５３ ．５５
９５ ．３８
３０
２３ ．０１
２４ ．７７
４７ ．７８
芍药内酯苷解 吸量（ ｍｇ）
芍药苷解吸量 （ ｍｇ）
芍药内酯苷解 吸率（ ％）
芍药苷解吸率 （％）
ＡＢ －８
４６ ．１５０
４８．３９４
４４ ．５０２
４７ ．９６４
９６．４３
９９ ．１１
ＮＫＡ －９
２３ ．００４
２９．８２４
２０ ．０４４
２９ ．４４１
８７．１３
９８ ．７２
Ｄ３０１
２６ ．０２４
３４．４６７
大 连 化 物 所 Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ 色 谱 柱 （ ３．９ｍｍ × ２５０ｍｍ，５μｍ）； Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ 保护柱； 流动相： ０．１％磷 酸水溶液 －乙腈（１６∶８４ ）；流速：１．０ｍＬ ／ｍｉｎ；检测波 长：２３２ｎｍ；柱温 ４０℃。 ２．２．２ 标准曲线绘制
分别 取 芍 药 内 酯 苷 和 芍 药 苷 对 照 品 １３．０、 １２畅０ｍｇ，精密称定，置 ２５ｍＬ 容量瓶中，加 ５０％甲醇溶 解、定容至刻度。 按色谱条件测定，采用自动进样器分 别进样 ３、６、９、１２、１５μＬ，记录各峰峰面积。 以色谱峰 面积 Ｙ 与 质 量 Ｘ 绘 制 标 准 曲 线， 回 归 方 程 为： Ｙ ＝ １畅１７５ ×１０６ ｘ －１．３２５ ×１０５ 、Ｙ ＝１．２４３ ×１０６ ｘ －３．４７２ × １０５ （相关系数分别为 ｒ ＝０．９９９ ９ 和 ｒ ＝０．９９９ ９。 ２．２．３ 供试品溶液制备
取干浸膏粉末 ５０ｍｇ，精密称定，置 ２５ｍＬ 容量瓶 中，加 ５０％甲醇溶液约 ２０ｍＬ，超声 １０ｍｉｎ，放至室温， 加 ５０％甲醇溶液定容至刻度，溶液过 ０．４５μｍ 微孔滤 膜滤过，备用。 ２．３ 大孔吸附树脂预处理
大孔吸附树脂用乙醇充分浸泡溶胀后，采用湿法 装柱，用乙醇冲洗至乙醇流出液与水混合（１∶２） 不呈 白色混浊，再以大量蒸馏水洗至无醇味。 ２．４ 树脂型号的筛选
中药分析研究。
有限公司；其余试剂为分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 上柱样品液的制备
取白芍药材 ２ｋｇ，加 ７０％乙醇回流提取，溶剂体积 为 １２Ｌ，提取 ２ 次，每次 １ｈ，过滤后，合并提取液，滤液 减压回收至无醇味后，减压浓缩至相对密度为 １．２０ （４０ ℃热测） 的稠膏，放冷，备用。 ２．２ 芍药内酯苷和芍药苷含量测定方法 ２．２．１ 色谱条件
取预处理后的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，６ 份，分别装入内径为 ２．４ｃｍ 的玻璃柱，按 ２．５ 确定的 吸附条件，将白芍提取液各 ２０ｍＬ 分别加入的树脂柱 中，进行动态吸附。 先用蒸馏水洗脱至洗脱液近无色
２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期 中 医 药 学 报
收稿日期：２０１３ －１１ －２６ 修回日期：２０１４ －０２ －１５ 基金项目：黑龙江省教育厅“ 骨干教师支持计划” （１２５１Ｇ０５７） 作者简介：吴修红（１９７８ －） ，女，博士，博士后，副教授，主要从事中药及
复方药效物质基础研究。 倡通讯作者：孙晖（１９６３ －） ，女，博士，教授，博士研究生导师，主要从事
图 ３ 芍药内酯苷洗脱曲线
图 ４ 芍药苷洗脱曲线
２．８ 验证试验 取预先处理好的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，
装柱，加入白芍提取液 ２０ｍＬ （ 比重为 １．２０，４０℃热 测），平行操作 ３ 份，先用蒸馏水（４ＢＶ） 洗至流出液无 色后，再用 ２５％ 乙醇溶液，按确定的洗脱条件进行洗 脱，收集洗脱液，减压回收至无醇味厚，减压干燥成干 膏，称定干膏重量，并采用 ＨＰＬＣ 法测定干膏中芍药内 酯苷和芍药苷含量。 结果见表 ４。
２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期 中 医 药 学 报
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白芍中芍药内酯苷和芍药苷制备工艺研究
吴修红，马艳春，何录文，孙畅，杨恩龙，孙晖倡
（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 １５００４０）
中剩余芍药内酯苷和芍药苷含量，计算每种树脂的吸 脂性能均最优。 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂是现代生产中
附量和吸附率。 再将吸附白芍提取物达饱和的上述 ４ 应用较多的树脂之一，工业化技术比较成熟，因此，综
种树脂，以蒸馏水冲洗，然后将树脂装入具塞三角烧瓶 合考虑，采用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂用于白芍中芍药
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中 医 药 学 报 ２０１４ 年 ４ 月第 ４２ 卷第 ２ 期
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Ｖｏｌ畅４２，Ｎｏ畅２，Ａｐｒ．２０１４
采用静态吸附法。 按大孔树脂处理方法分别将 ４
在筛选的 ４ 种树脂中，以 ＡＢ －８ 型树脂的对于白
摘 要：目的：研究白芍中芍药内酯苷和芍药苷的制备方法。 方法：采用 ＨＰＬＣ 法，以芍药内酯苷和芍药 苷的含量和转移率为指标，考察不同型号大孔树脂对白芍药材醇提物吸附性能及洗脱参数。 结果：以 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂的纯化效果最佳，２ 种成分加和大于 ５０％。 结论：ＡＢ －８ 大孔树脂可用于白芍中 芍药内酯苷和芍药苷的分离富集。 关键词：白芍；芍药内酯苷；芍药苷；大孔吸附树脂 中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２ －２３９２（２０１４）０２ －００７１ －０３
白芍为毛莨科芍药（ Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ Ｐａｌｌ．） 的去 皮干燥根， 性微苦， 味苦酸，具有养血柔肝， 缓中止 痛， 敛阴收汗的功能，为桂枝茯苓方药的主要组成药 物［１］ 。 白芍主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷等单 萜类化合物［２］ 。 本研究采用大孔吸附树脂法，以芍药 内酯苷和芍药苷双指标考察白芍的大孔吸附树脂纯化 工艺。 １ 仪器与试药 １．１ 仪器
ＡＢ －８ 型 （ 批 号 ２００７１０１５ ）、 ＮＫＡ －９ 型 （ 批 号 ２００７０２１２ ）、ＮＫＡ －２ 型 （ 批 号 ２００７１２１５ ）、 Ｄ３５２０ 型 （批号 ２００７０３１６ ） 大孔吸附 树 脂： 南 开 大 学 化 工 厂； Ｄ１０１ 型大孔吸附树脂（ 天津制胶厂）；芍药苷对照品： 中国生物制品检定所（１１０７３６ －２００８３２ ），供含量测定 用；芍药内酯苷对照品：上海中药现代化研究中心（ 供 含量测定用，纯度大于 ９８％）；白芍提取物：实验室自 制；乙腈：美国迪马公司，色谱级；纯净水，杭州娃哈哈
中，加入 ９５％的乙醇 １００ｍＬ，盖塞置摇床上，每隔 ２ｈ 内酯苷 和 芍 药 苷 的 分 离 富 集 工 艺 研 究。 结 果 见 表
晃动 １０ｍｉｎ，浸泡 １２ｈ，滤过，测定滤液中芍药内酯苷和 １ ～２。
芍药苷含量，计算每种树脂的解吸率。
表 １ 树脂吸附量测定结果
树脂型号
芍药内酯苷初 始量（ ｍｇ）
Ｖｏｌ畅４２，Ｎｏ畅２，Ａｐｒ．２０１４
Ａｃｔａ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
·７３·
（４ ＢＶ） ，再分别用不同浓度的乙醇溶液洗脱至近无色， 将乙醇洗脱液减压回收后，减压干燥，称定干膏重量， 并用 ＨＰＬＣ 法测定干膏中芍药内酯苷和芍药苷含量， 结果见表 ３。 从结果可知，用 ２５％乙醇作为洗脱溶剂， 乙醇洗脱物中芍药内酯苷及芍药苷含量均较高，两种 成分的含量之和已超过 ５０％，且转移率达到 ９５％，因 此，确定 ２５％乙醇为最佳洗脱剂。 结果见表 ３。
９４ ．２７
５０
２２ ．５６
２２ ．５３
４５ ．０９
９６ ．９８
７０
１４ ．７６
１９ ．０２
３３ ．７８
９８ ．４３
２．７ 洗脱曲线的考察 取预处理后的 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂 １００ｍＬ，装
柱，按 ２．６ 和 ２．７ 确定的吸附和洗脱条件，取白芍提取 液进行样品 上 柱、 吸 附 和 洗 脱 操 作， 每 个 树 脂 柱 体 积 （ＢＶ）收集 １ 份，分段收集乙醇洗脱液，收集 １０ 份。 分 别取 １ －１０ＢＶ 洗脱液，采用 ＨＰＬＣ 法测定洗脱液中芍 药内酯苷及芍药苷的峰面积。 结果见图 ３ ～４。 从结 果可知，８ 倍柱体积时芍药内酯苷及芍药苷峰面积均 已较低，且再下一柱体积也相差不多，可判定树脂柱上 吸附的芍药内酯苷及芍药苷成分已经洗脱完全，故洗 脱剂用量确定为 ７ 倍量柱体积。
４３ ．６１９
５
４ ．６０１
５ ．９６５
Ｄ３０１
６５ ．３８８
７３ ．４４３
３９．３６４
３８ ．９７６
５
５ ．２０５
６ ．８９３
Ｄ１０１
６５ ．３８８
７３ ．４４３
２８．８６７
３５ ．８０２
５
７ ．３０４
７ ．５２８
表 ２ 树脂解吸率测定结果
树脂型号
芍药内酯苷吸 附量（ ｍｇ）
芍药苷吸附量 （ ｍｇ）
芍药苷初始量 （ ｍｇ）
芍药内酯苷剩 余量（ ｍｇ）
芍药苷剩余量 （ ｍｇ）
树脂量 （ ｇ）
芍药内酯苷吸 附率（ ｍｇ ／ｇ）
芍药内酯苷吸 附率（ ｍｇ ／ｇ）
ＡＢ －８
６５ ．３８８
７３ ．４４３
１９．２３８
２５ ．０４９
５
９ ．２３０
９ ．６７９
ＮＫＡ －９
６５ ．３８８
７３ ．４４３
４２．３８４
种大孔吸附树脂预处理，每种取 ５ｇ 分别放入具塞三角 芍中的芍药内酯苷及芍药苷 ２ 种成分的吸附率最高；
烧瓶中，加入白芍提取液 １００ｍＬ，盖塞，置摇床上，每隔 且该树脂对两种成分的解吸率也 ９０％以上，无论吸附
２ｈ 晃动 １０ｍｉｎ，放置 １２ｈ，充分吸附后，滤过，测定滤液 率还是解吸率，在筛选的树脂中，ＡＢ －８ 型大孔吸附树
１７ ．２３３
２４ ．８１９
６６．２２
７２ ．０１
Ｄ１０１
３Hale Waihona Puke Baidu ．５２１
３７．６４１
２７ ．４７７
３６ ．３４０
７３．９２
９６ ．５４
２．５ 动态吸附曲线的考察 取 ＡＢ －８ 型 大 孔 树 脂 １００ｍＬ， 预 处 理 后 装 柱
（２畅４ｃｍ ×２０．０ｃｍ），按上述确定的吸附条件，将白芍醇 提物样品液（比重为 １．２０，４０℃热测） 通过树脂柱，进 行动 态 吸 附 考 察。 流 出 液 每 ５ｍＬ 收 集 １ 份， 采 用 ＨＰＬＣ 法测定每份流出液中芍药内酯苷及芍药苷的峰 面积（进样体积 １０μＬ），以流出液体积为 Ｘ 和芍药内 酯苷 及 芍 药 苷 的 峰 面 积 为 Ｙ 绘 制 泄 漏 曲 线， 见 图 １ ～２。
从表 ４ 可以看出，三次验证试验结果均较稳定，芍 药内酯苷及芍药苷含量均超过精制部位的 ５０％，且转 移率也都在 ９０％以上，工艺稳定，重现性好，且操作简 单，在生产中完全可以利用 ＡＢ －８ 型大孔吸附树脂对 白芍中芍药内酯苷及芍药苷进行精制。
表 ４ 验证试验结果
树脂使用 次数（ 次）
芍药内酯苷 芍药苷含量