姐妹染色单体互换ppt课件
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培养终止前2.5h加秋水仙素，秋水仙素终浓度为0.02μg/ml ↓
染色体制片
紫外灯照射：取标本玻片置于饭盒盖内，正面朝上，覆盖擦镜纸，加 入2×SSC缓冲液降纸浸湿，移入56℃水浴锅内，紫外灯距离10cm，
照射20min ↓
染色：取出照射后标本，缓流水冲洗，pH6.8 2%Giemsa染液染色 10min，自来水冲洗晾干
的亲和力降低，染色后BB型链比T/B型链着色浅而出现色差。
DNA双链
TT
复制第一周期
TB
TB
复制第二周期
TB
BB
未掺入BrdU的为白链，掺入的BrdU的为黄链
4
实验步骤
1、SCE染色体标本片制备
BrdU掺入：细胞培养24h后于培养液中加入BrdU，最终浓度10μg/ml， 避光条件下继续培养。 ↓
7
8
ห้องสมุดไป่ตู้ 9
10
11
实验报告要求
1、按常规书写实验报告（实验目的、姐妹染色单体色差染色原理、 实验试剂材料、实验操作步骤、实验结果）。 2、实验结果中观察计数20个分裂相（不能少于5个），并计算出该 染色体标本SCE频率。 3、在自己的制片中能看到三个不同周期的SCE图像吗？请对此现象 进行讨论。
TB型
BB型
未掺入BrdU的为白链，掺入的BrdU的为黄链
6
选择染色体分散良好、长度适中、轮廓清晰、数目完整、分化良好的的 第二周期的分裂相进行计数。人体姐妹染色单体交换（SCE）的计数方法： ①凡是在染色单体端部出现互换，记为1次交换； ②在染色单体中间出现互换，记为2次交换； ③如果在着丝粒处发生交换，需判明是否为扭转，不是扭转的为着丝粒部位交 换，记为1次交换。每一份标本至少需要计数20~50个细胞的染色体，计算 SCE平均交换频率。 SCE平均交换频率（次/细胞）= 交换总次数 / 细胞数
实验二 姐妹染色单体互换标本制备与分析
1
实验目的与要求
1、初步掌握姐妹染色单体差别染色技术 2、初步掌握SCE的观察及分析方法 3、了解SCE频率变化的意义
器材与试剂
1、材料 加BrdU的营养液培养的外周血淋巴细胞染色体标本片 2、器材用品 光学显微镜、恒温水浴箱、紫外灯、擦镜纸 3、试剂 2×SSC溶液、吉姆萨染液、BrdU、香柏油、二甲苯
2
实验原理
姐妹染色单体 （sister chromatid）：染色体在DNA复制之后产生的 一对连在一起的染色单体。
姐妹染色单体互换（sister chromatid exchange, SCE）：是指染 色体复制过程中，同一条染色体的两条姐妹染色单体在相同位置上发 生的等位对称的片段交换（同源片段的交换）。
SCE交换频率是反映DNA损伤程度的最敏感指标之一。由于SCE能 灵敏地检测染色体的变化，表现出剂量-效应关系，还可以将姐妹染色单 体互换频率列为检测致突变物、致癌物的常规指标之一。
3
SCE检测原理：在细胞培养过程中，加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷酸，当细胞 的DNA复制时，BrdU可取代胸腺嘧啶而被掺入到新合成DNA链中。半保留 复制的新链被BUdR掺入,当细胞处于第二周期时，同一染色体的两条姐妹 染色单体，一条由双股都含有BrdU的DNA链构成，而另一条为单股含有 BrdU的DNA链。B/B型链的DNA螺旋化程度降低，经紫外线照射后与Giemsa
12
5
2、SCE观察计数
镜下（油镜）观察中期分裂相时，注意区分各细胞周期分裂相的染色特点 ：①染色体的两个单体均为深染的细胞记为第一周期的细胞；②染色体的两个 单体染色一深一浅的细胞为第二周期细胞；③部分染色体的两个单体染色都为 浅色的细胞为第三周期的细胞。
DNA双链
TT型
复制第一周期
TB型
TB型
复制第二周期
染色体制片
紫外灯照射：取标本玻片置于饭盒盖内，正面朝上，覆盖擦镜纸，加 入2×SSC缓冲液降纸浸湿，移入56℃水浴锅内，紫外灯距离10cm，
照射20min ↓
染色：取出照射后标本，缓流水冲洗，pH6.8 2%Giemsa染液染色 10min，自来水冲洗晾干
的亲和力降低，染色后BB型链比T/B型链着色浅而出现色差。
DNA双链
TT
复制第一周期
TB
TB
复制第二周期
TB
BB
未掺入BrdU的为白链，掺入的BrdU的为黄链
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实验步骤
1、SCE染色体标本片制备
BrdU掺入：细胞培养24h后于培养液中加入BrdU，最终浓度10μg/ml， 避光条件下继续培养。 ↓
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ห้องสมุดไป่ตู้ 9
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实验报告要求
1、按常规书写实验报告（实验目的、姐妹染色单体色差染色原理、 实验试剂材料、实验操作步骤、实验结果）。 2、实验结果中观察计数20个分裂相（不能少于5个），并计算出该 染色体标本SCE频率。 3、在自己的制片中能看到三个不同周期的SCE图像吗？请对此现象 进行讨论。
TB型
BB型
未掺入BrdU的为白链，掺入的BrdU的为黄链
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选择染色体分散良好、长度适中、轮廓清晰、数目完整、分化良好的的 第二周期的分裂相进行计数。人体姐妹染色单体交换（SCE）的计数方法： ①凡是在染色单体端部出现互换，记为1次交换； ②在染色单体中间出现互换，记为2次交换； ③如果在着丝粒处发生交换，需判明是否为扭转，不是扭转的为着丝粒部位交 换，记为1次交换。每一份标本至少需要计数20~50个细胞的染色体，计算 SCE平均交换频率。 SCE平均交换频率（次/细胞）= 交换总次数 / 细胞数
实验二 姐妹染色单体互换标本制备与分析
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实验目的与要求
1、初步掌握姐妹染色单体差别染色技术 2、初步掌握SCE的观察及分析方法 3、了解SCE频率变化的意义
器材与试剂
1、材料 加BrdU的营养液培养的外周血淋巴细胞染色体标本片 2、器材用品 光学显微镜、恒温水浴箱、紫外灯、擦镜纸 3、试剂 2×SSC溶液、吉姆萨染液、BrdU、香柏油、二甲苯
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实验原理
姐妹染色单体 （sister chromatid）：染色体在DNA复制之后产生的 一对连在一起的染色单体。
姐妹染色单体互换（sister chromatid exchange, SCE）：是指染 色体复制过程中，同一条染色体的两条姐妹染色单体在相同位置上发 生的等位对称的片段交换（同源片段的交换）。
SCE交换频率是反映DNA损伤程度的最敏感指标之一。由于SCE能 灵敏地检测染色体的变化，表现出剂量-效应关系，还可以将姐妹染色单 体互换频率列为检测致突变物、致癌物的常规指标之一。
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SCE检测原理：在细胞培养过程中，加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷酸，当细胞 的DNA复制时，BrdU可取代胸腺嘧啶而被掺入到新合成DNA链中。半保留 复制的新链被BUdR掺入,当细胞处于第二周期时，同一染色体的两条姐妹 染色单体，一条由双股都含有BrdU的DNA链构成，而另一条为单股含有 BrdU的DNA链。B/B型链的DNA螺旋化程度降低，经紫外线照射后与Giemsa
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2、SCE观察计数
镜下（油镜）观察中期分裂相时，注意区分各细胞周期分裂相的染色特点 ：①染色体的两个单体均为深染的细胞记为第一周期的细胞；②染色体的两个 单体染色一深一浅的细胞为第二周期细胞；③部分染色体的两个单体染色都为 浅色的细胞为第三周期的细胞。
DNA双链
TT型
复制第一周期
TB型
TB型
复制第二周期