实验八姐妹染色单体交换试验

实验步骤）
chromatid Brdu First duplication chromasome
Brdu
Second duplication
chromasome Brdu Third duplication
chromasome
三、实验用品
1、器材：水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、培 养箱、离心机、离心管、培养瓶、显微镜、滴管 2、试剂：RPMI1640培养基、2×SSC缓冲液、 Giemsa染液、BrdU溶液(500μg/ml)、甲醇、冰醋酸、 0.075M KCl、秋水仙素溶液（12.5μg/ml）、PH6.8 PBS、 3、材料：人外周血
实验五姐妹染色单体交换试验
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一、实验原理 在分裂的细胞中，每条染色体由两条姐妹染色单体组成，每条染色单体则由 一个双链DNA分子构成。当细胞在加有5溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的培养 基中进行培养时，BrdU取代胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（TdR）掺入到新复制的 DNA核苷酸链中。细胞在BrdU中生长，第一个周期（DNA经过一次复制）后， 每条染色体的两条姐妹染色单体的DNA双链中各有一股链含有BrdU。经过第 二周期（经过两次复制）后，两条姐妹染色单体中，一条单体的DNA双链类 似第一周期，为单股链含BrdU，另一条单体两股链均含BrdU。两股都含有 BrdU的染色单体螺旋化程度较低，与某些染色剂的亲和力低，用Giemsa染 色时着色较浅，而仅有单股含BrdU的单体着色仍较深，两条姐妹染色单体显 出深浅不同的颜色，当姐妹染色单体间发生同源片段交换时，就可以根据每 条染色单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。 在正常情况下，第二周期细胞的每条染色体的两条单体一条被深染，另一 条为浅染，当发生姐妹染色单体互换时，可在同一条染色单体上看到深浅不 同的颜色。如果环境中有对染色体或DNA损伤的物质时，姐妹染色单体可发 生部分部分片段互换，有毒物质毒性越高，对DNA或染色体损伤越严重，则 互换的频率越高。通过与正常对照组的对比，就可对被测物质的毒性作出安 全性评价。
四、实验步骤
（一）外周血培养及染色体标本片制备
按常规方法采血、接种，置37℃恒温培养
24h后，各加入BrdU（终浓度为10ug／ml）， 继续避光培养48小时后，按外周血培养及染 色体标本片制备常规方法收获、制片。制好 片后，自然老化1～7天。
作业
完成此次实验报告(包含实验原理、实验药品、