鱼类血液基因组DNA的提取

鱼类血液基因组DNA的提取

1.取0.3ml血液于1.5ml离心管中，加入1/6体积(0.05ml)ACD抗凝剂，再加入1ml 0.35 %

NaCl 淡水鱼生理盐溶液, 混匀,12 000 r/ min离心2 min (若上清仍带红色可加入0.35 % NaCl 再洗一次) 去上清;

2.沉淀加入100μl 0.35 %NaCl 摇匀, 加入400μl 无离子水作低渗处理15 min , 13 000 r/

min离心3 min , 去上清, 获乳白色沉淀( 细胞核) ;

3.向沉淀中加入100 μl0135 % NaCl , 混匀, 再加入400μl 裂解液缓缓混匀后, 加入蛋白酶

K (20mg/ml) 10μl , 温和混匀，置入50 ℃水浴5 h。

4.将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；

5.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），

旋涡振荡至充分混匀，12000rpm离心10min；

6.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中；并加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），充

分振荡混匀，12000rpm离心10min；

7.将上清液转移到另一无菌1.5ml离心管中；加入2倍体积的冰乙醇，1/10体积醋酸钠

(NaAc)水平摇动，直到可见絮状DNA析出；

8.将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15～20min，取出后再次12000rpm离心10min，

使DNA沉淀；

9.倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。用700μl 70%乙醇洗涤并晃动，以

洗出DNA的杂质；

10.倒出乙醇，将DNA用真空干燥或自然晾干，加入适量的TE缓冲液或无菌水回溶，-20℃

保存备用。