传染病实验：实验室诊断

传染病实验报告

一、实验材料：病鸭、镊子、剪刀、托盘、普通平板、麦康凯平板、血平皿、接种环、酒精灯、药敏纸片、生化管、注射器、小白鼠

二、实验方法：病理解剖观察、病料接种培养、特殊平板培养、生化实验、药敏试验、动物实验、玻板凝集实验（演示）

三、实验内容及步骤:

(一)病理解剖观察：

1、观察鸭子的天然孔道，是否有异常黏液分泌

2、打开病鸭腹腔，采用“三刀法”打开腹腔（两只鸭腿与腹部交接的地方各剪一刀，腹部中间再剪一刀）。同时注意观察皮下及胸、腿部肌肉有无异常（如出血、皮下水肿等）。

3、检查皮下及肌肉：观察皮下与肌肉是否有出血坏死，皮下是否有渗出物等。

4、检查体腔与内脏：注意体腔内、气囊是否有异物，是否增厚、有绿斑、出血等现象，内脏器官的体积、颜色、性质是否异常。

（1）呼吸系统：主要检查鼻腔内是否有异常分泌物；气管是否有出血环，有异常黏液分泌；肺脏颜色形状是否正常，是否有出血坏死肿大等现象。

（2）消化系统：口腔是否有黏液；食道是否有出血，坏死灶溃疡；肌胃腺胃是否出血有坏死灶，乳头是否肿胀；肠道是否有充血出

血坏死灶；肝脏是否发坏生变性，肿大，有无出血点，出血斑，坏死等异常；胰脏是否有出血，坏死。

（3）泌尿系统：主要检查肾脏，是否肿大，有出血坏死尿酸盐沉积。

（4）心血管系统：心脏的颜色，是否有心包积液；各处血管是否有充血现象。

（5）淋巴系统：检查胸腺、法氏囊是否肿大出血；肠道淋巴结及盲肠扁桃体是否异常。

（6）神经系统：检查颅腔脑是否肿大，积液，脑膜有无异常；神经粗细颜色。

（二）病料接种培养

1、选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种，并将血平皿划分成相应的几部分做好标记。

2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“Z”形划线接种法划线接种。每蘸取一个部位后都要进行酒精灯燃烧灭菌，接种时应在酒精灯周围进行。

3、将接种好的血平皿放置在37℃恒温下培养24小时后取出观察菌落生长情况。

（三）特殊平板培养

1、选取病变明显典型的部位接种，大鸭子选取脑、肝、脾、肺接种，小鸭子选取接种，并将麦康凯平板划分成相应的几部分做好标记。

2、将接种环酒精灯灭菌，蘸取相应部位，使用“Z”形划线接种法划线接种。

3、将接种好的麦康凯平板放置在37℃恒温下培养24小时后取出观察其生长情况。

（四）生化实验

1、选取（二）.3中培养好的细菌，大鸭子选取接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌。

2、将接种环灭菌蘸取相应细菌至生化管，37℃恒温，24小时后拿出观察。

（五）药敏试验

1取适量培养的细菌与一定生理盐水混合均匀，用棉签蘸取后涂布于普通平板上；

2待平板上的菌液晾干后，将带有卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼考、头孢曲松、多西霉素、恩诺沙星、磺胺甲基异恶唑的药敏纸片贴于平板上；

3将贴好药敏纸片的平板放于37℃恒温箱中培养24小时后观察结果。

（六）动物试验

1、在EP管中加入适量的生理盐水，选取（二）.3中培养好的细菌，大鸭子选取接种的细菌，小鸭子选取两种不同菌落形态的细菌，用灭菌后的接种环分别蘸取至EP管中，混匀制成菌液。

2、分别用一次性注射器将三种菌液分别注入三只小鼠体内

（皮下注射，注射时要缓慢推进以防局部积液），并将小鼠做好标记。24小时后观察小鼠病理特征。

（七）玻板凝集实验（演示实验）

1、分别编号1号，2号，3号。再分别往1号，2号，3号玻片中加入40ul抗原,40ul抗原,40ul生理盐水。其中3号作为对照。

2、分别往1号，2号加入10ul血清,5ul血清,3号不加血清。一段时间后观察现象。

四、实验结果

（一）病理解剖观察

1、大鸭子：

呼吸系统：气管出血；肺脏有出血点。

消化系统: 食道充血；胃浆膜面出血；，肠道表面充血出血，肠系膜出血；肝脏肿胀，质脆易碎，表面斑驳有针尖大小的坏死灶；胰脏有透明样坏死灶；气囊广泛出血。

泌尿系统: 肾脏质脆易碎，花斑肾。

心血管系统：心包黄色积液，有出血点，心冠脂肪出血。

淋巴系统：胸腺肿大；法氏囊有出血斑；脾脏肿大，呈大理石样变。

神经系统：脑充血，神经无明显症状。

2、小鸭子：

呼吸系统：气管出血；肺脏出血；气囊均有出血斑。

消化系统: 食道充血；腺胃肌胃出血；肝脏肿大，有针尖大小坏

死灶，颜色布局不均匀，质脆；肠道黏膜充血出血，肠系膜出血；泄殖腔出血，胰腺有针尖大小坏死灶，透明样坏死。

泌尿系统: 肾脏质脆，花斑肾。

心血管系统：心脏心包积液，心冠脂肪出血，心脏有出血点，充血严重。

淋巴系统：胸腺肿大；脾脏肿大有坏死灶，成大理石样；法氏囊有出血点。

神经系统：神经无明显症状。

（二）病料接种培养（血平皿培养）

1、大鸭子平板：菌落均呈乳白色，光滑，圆形菌落，无溶血现象。

2、小鸭子平板；有两种形态菌落，一种呈光滑透明圆形菌落，一种呈光滑灰白菌落有溶血现象。

（三）特殊平板培养

麦康凯培养基培养：大鸭子接种菌生长较好，呈红色；小鸭子接种菌白色菌呈灰白色生长。

（四）生化实验

实验中接种的三套可疑菌落生化管为如下结果：

试剂/菌种甘露醇鼠李糖蔗糖半乳糖果糖葡萄糖大鸭○，+ ○，+ ○，+ ○，+ ○，+ -

小鸭（白色菌落）○，+ ○，+ ○，+ ○，+ ○，+ -

小鸭（透明菌落）○，+ ○，+ ○，+ ○，+ ○，+ -

注：+ 阳性或产酸；○+ 产酸又产气；- 阴性或不发酵。

大肠杆菌：能发酵多种碳水化合物产酸产气，大多数菌种可迅速发酵

乳糖和山梨醇，仅极少数迟发酵或不发酵；约半数菌株不

分解蔗糖。 沙门氏菌：发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气；不发酵乳糖、

蔗糖

链球菌：能发酵简单的糖类，产酸不产气。

巴氏杆菌：可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，产酸不产

气；一般发酵乳糖、鼠李糖、水杨苷、肌醇、菊糖。

（五）药敏试验

二、实验结果

（1）大鸭 抑菌圈直径

（mm ） 判定标准 耐药 中介 敏感