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聚凝胺交叉配血试验标准操作规程

1 目的建立聚凝胺交叉配血试验标准操作规程，确保聚凝胺交叉配血试验操作的准确性和规范性。

2职责血库工作人员负责执行

3.适用范围适用于聚凝胺交叉配血全过程。

4.操作规程

4.1原理

利用多聚季胺盐类—聚凝胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。无抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则不能解散。

4.2 试剂

4.2.1 LIM

4.2.2 RESUSPENDING

4.2.3 POLYBRENE

4.3 器材

4.3.1贝索血库专用离心机

4.3.2 10μl、1ml的移液器

4.4 方法

4.4.1制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本用标本离心机离心1000×g60sec，将红细胞吸出洗涤3遍后，用生理盐水盐水稀释成3～5%的溶液【5μl红细胞沉淀溶于1ml生理盐水中】备

用；

4.4.2取试管标主次侧，主侧试管加受血者血浆2滴，加供血者红细胞悬液1滴，次侧试管反之。

4.4.3 每个试管加LIM0.7ml，摇匀后，再加POLYBRENE溶液2滴，混匀；

4.4.4贝索离心机1000g离心力离心10秒，弃去上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体；

4.3.6 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做；

4.3.7 最后加入RESUSPENDING2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。

4.4 结果判定

4.4.1如果在30秒内凝集散开，代表是由POLYBRENE引起的非特异性凝集，配血结果相合

4.4.2如果在30秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

4.4.3如反应可疑可将血样倒在玻片上用显微镜观察。

4.4.4如试管内发生溶血则同样认为是阳性反应。

4.5 注意事项

4.5.1 离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

4.5.2 结果观察要在30秒内，否则凝集散开会判为假阴性。

5 参考依据

5.1 《全血成分血质量要求与血液标准化》

5.2 《输血技术学》（第二版）

ABO血型测定操作规程

1 目的建立ABO血型鉴定试验标准操作规程，确保血型鉴定试验操作的准确性和规范性。

2职责血库工作人员负责执行

3.适用范围适用于使用标准血型试剂进行血型鉴定试验

4.操作规程

4.1原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。

4.2. 标本采集

4.2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。

4.3 标本要求：

4.3.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。

4.3.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。

4.4. 试剂

4.4.1 试剂名称：ABO血型检测试剂

试剂生产厂家：长春博德生物技术有限公司

4.4.2 试剂名称：5％A、B及O型红细胞悬液。

试剂生产厂家：上海血液中心

4.5. 操作步骤

4.5.1 玻片法--正定型

4.5.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。

4.5.1.2 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。

4.5.2 玻片法—反定型

4.5.2.1取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

4.5.2.2用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。

4.5.3 试管法—正定型

4.5.3.1 取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。

4.5.3.2 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4.5.4试管法--反定型

4.5.4.1 另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B 和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。

4.5.4.2摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4.5. 结果判断

4.5.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。