多糖的提取

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单糖为多羟基衍生物,易溶于水,难溶于低极性有机溶剂。低聚糖与单

糖的物理性质类似。苷类化合物随着分子中糖基的增多极性增大,极性低的

苷元如萜醇、甾醇等单糖苷往往可溶于低极性有机溶剂,随着糖基的增多,

苷元所占比例相应变小,亲水性随之增加。

通常提取单糖、低聚糖及苷类化合物常用水或稀醇、醇作为提取溶剂,

回收溶剂后依次用不同极性有机溶剂进行萃取,在石油醚提取物中往往是极

性小的化合物,在氯仿、乙醚提取物中为苷元,在乙酸乙酯提取物中可获得

单糖苷,在正丁醇提取物中则可获得低聚糖苷。由于植物体内有水解酶共

存,为了获得原生苷,必须采用适当的方法杀酶或抑制酶的活性。如采集新

鲜材料,迅速加热干燥、冷冻保存、用沸水或醇提取、先用碳酸钙拌和后再

用沸水提取等。

多糖随着聚合度的增加,性质和单糖相差越来越大,一般为非晶形,无

甜味,难溶于冷水,或溶于热水成胶体溶液。粘液质、树胶、木聚糖、菊

糖、肝糖原等可溶于热水而不溶于乙醇。酸性多糖、半纤维素可溶于稀碱,

碱性多糖(如含有氨基的多糖)可溶于稀酸,而纤维素类则在各种溶剂中均

不溶。

提取多糖常用的溶剂是冷水、热水、热或冷的0.1mol/L-1mol/L NaOH或KOH,热或冷的HAc 或苯酚等。通常是先用甲醇或1:1 的乙醇、乙醚混

合液脱脂,然后用水加热提取3 ~4 次,每次4~6 小时,最后再用0.5mol/L NaOH水溶液提取2 次,将多糖分为水溶和碱溶两部分。提取液经浓缩后以

等量或数倍量的甲醇或乙醇、丙酮等沉淀,所获的粗多糖经反复溶解与醇

沉。从不同材料中提取多糖,究竟以何种溶剂提取为宜,需根据具体情况,

先以小量样品摸索,观察提取效率,并应注意用不同溶剂提取有何特点,即

可先用水、稀酸或稀碱、稀盐提取,也可分别先用水、稀酸、稀碱提取,方

法不同所得产物往往不同。为防止糖的降解,用稀酸提取时时间宜短,温度

最好不超过5度;用碱提取时,最好通入氮气或加入硼氢化钾,提取结束后!

要迅速中和或透析除去碱。

采用醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖,常混有较多的蛋白质,脱去蛋

白质的方法有多种:如选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲

烷、鞣质等试剂来处理,但用酸性试剂宜短,温度宜低,以免多糖降解。

1,sevag法:将氯仿按多糖水溶液1/5 体积加入,然后加入氯仿体积1/5的丁醇,剧烈振摇20min,离心,分去水层与溶液层交界处的变性蛋白。此法较温和,但需重复5 次左右才能除去大部分蛋白。

2,酶解法:在样品溶液中加入蛋白质水解酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等,使样品中的蛋白质降解。通常上述两个方法综合使用除蛋白质效果较好

3. 三氟三氯乙烷法:将1份三氟三氯乙烷加入到1份多糖溶液中搅拌10 分钟,离心

得水层,水层再用上述溶剂处理2 次可得无蛋白多糖

4.三氯醋酸法:在多糖水溶液中滴加3%三氯醋酸,直到不再继续浑浊为止,5~10℃(放置过夜,离心除去胶状沉淀即可。某些多糖,因含有酸、碱性基团,易与蛋白质相互作用,虽不是糖蛋白,也较难去除。对碱稳定的糖蛋白,在硼氢化钾存在下,用稀碱温和处理可以把这种结合蛋白分开

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