消毒灭菌、噬菌体

2、电离辐射： （1）原理：x射线、γ射线、高速电子等 产生游离基，破坏DNA。 （2）应用：用于不耐热塑料、橡胶制品、 中草药及食品的灭菌。 3．微波 波长为1~1000mm的电磁波。 可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质，但 不能穿透金属表面。主要用于食品、非 金属器械、检验室用品、无菌室和病室 中食品用具、药杯及其他用品的消毒。
常用消毒剂的种类、浓度和用途－2
类 卤 浓 度 用 途 100～1000ppm 饮水、游泳池 自由氯/L 碘化物 30～50ppm 皮肤消毒 烷 基 环氧乙烷 450～1200mg/L 手术器械敷料 双氯苯双胍 0.5％～4％ 皮肤粘膜 己烷洗必泰 表 面 新洁尔灭 0.05％～0.1％ 皮肤粘膜器械 活性剂 杜灭酚 0.05％～0.1％ 皮肤创口器械 型 名 称 素 氯化合物
a.吸附于宿主菌
c.核酸注入菌体
b.尾板扩张，尾鞘收缩
噬菌体吸附宿主细菌模式图
第三节 温和噬菌体
温和噬菌体 感染细菌后，噬菌体的基因组能与 宿主菌基因组整合，并随细菌分裂传至子代细菌 的基因组中，不引起细菌分裂。
溶原性细菌 前噬菌体：整合在细菌
基因组中的噬菌体基因组
溶菌性周期
溶原性周期
溶原性细菌的溶原性周期和溶菌性周期
固体二氧化氯消毒剂
第二节
消毒灭菌的运用
一、医疗器械物品的消毒灭菌 （一）高危器械物品 用时需进入无菌组织的物 品。所有这些物品都应该灭菌。 （二）中危器械物品 用时不进入无菌组织但接 触黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接触未损伤皮肤但不进 入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用后清 洗、消毒即可。 （四）快速周转的医疗器械
4、清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃 和一切污秽以减少微生物数量的过程。 5、无菌（asepsis）和无菌操作：无菌是 无活的M存在，多是灭菌的结果。防止细 菌进入人体或其它物品的操作技术，称 为无菌操作。
第二节 消毒灭菌的方法
一、物理消毒灭菌法 （一）热力灭菌法 高温对细菌有明显的致死作用：蛋白质变 性；核酸断裂。 1、干热灭菌法 杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。 （1）焚烧 废弃物品或动物尸体等。 （2）烧灼 接种环、试管口等的灭菌。
（二）化学消毒按杀菌能力剂分三类： 1、高效消毒剂（high-level disinfectants） （1）含氯消毒剂；（2）过氧化物消毒剂； （3）醛类消毒剂；（4）环氧乙烷 2、中效消毒剂（intermediate-level disinfectants） （1）含碘消毒剂；（2）醇类消毒剂 3、低效消毒剂（low-level disinfectants） （1）季铵盐类；（2）氯已定；（3）高锰酸钾
1、高压蒸汽灭 菌法： 103.42Kpa 经121.3℃， 维持15—30 分钟，适用于 耐高压和湿热 的物品，如培 养基、手术衣、 手术器械等。
高压蒸汽灭菌器
2、巴氏消毒法：61.1—62.8℃持续30分 钟或71.7℃持续30秒，用于酒类和乳制 品的消毒。 3、流通蒸汽消毒法：利用一个大气压下 100℃的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体 15~30min可被杀灭。
第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病 的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。
二、病原微生物实验室的分级
级别 处理对象
一级 对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成 人、动植物致病的致病因子。 对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危 二级 险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造 成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。 对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过 三级 气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或 对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有 预防治疗措施。 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶 四级 胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因 子。没有预防治疗措施。
思 考 题
1.噬菌体的概念及其特征。 2.毒性噬菌体、温和噬菌体、前噬菌体、溶 原性细菌概念。 3.溶菌性周期与溶原性周期的区别。

第4章 噬菌体
噬菌体的概念及特点 ★噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体 等微生物的病毒； ★个体微小，可以通过细菌滤器； ★无细胞结构，主要由衣壳（蛋白质）和核酸 组成； ★只能在活的微生物细胞内复制增殖，是一种 专性胞内寄生的微生物。 ★噬菌体分布极广。

第一节
噬菌体的生物学性状
1.形态与结构 噬菌体有三 种基本形态，即 蝌蚪形、微球形 和细杆形。大多 数噬菌体呈蝌蚪 形。
（五）干燥和低温抑菌法 低温：保存菌种。 1、冰箱 2、液氮罐 3、冷冻真空干燥法：为目前最好的保存 菌种的方法，可保存数年至数十年。
二、化学消毒灭菌法 （一）常用消毒剂的杀菌机制： 1、促进菌体蛋白质变性或凝固。 2、使微生物细胞成分氧化、水解。 3、干扰和破坏细菌酶的活性。 4、损伤细菌的细胞膜 。
常用消毒剂的种类、浓度和用途－1
类 型 消毒剂 氧化剂 名 称 浓 度 用 途
醇 酚 醛
类 类 类
高锰酸钾 过氧化氢 过氧乙酸 乙醇 石炭酸 来苏 甲醛 戊二醛
0.1％~0.5% 3％～25％ 0.1％～2％ 70%～80％ 2％～5％ 2％～5％ 3％～8％ 2％
皮肤粘膜消毒 创口皮肤消毒 塑料玻璃器材 皮肤消毒 地面器械 表面 室内空气熏蒸 内镜消毒
空 斑 试 验

噬斑：在固体培养基上，将适量噬菌 体和宿主菌液混合接种培养后，培养 基表面可出现透亮的溶菌空斑，每个 空斑系由一个噬菌体复制增殖并裂解 宿主菌后形成的。 噬斑形成单位：不同噬菌体噬斑的形 态与大小不尽相同。通过噬斑计数， 可测知一定体积内的噬菌体数量。

毒性噬菌体的复制周期
毒性噬菌体在宿主菌内的增殖 过程（制周期或溶菌周期）包括 吸附、穿入、生物合成、成熟与释 放等四个阶段。
第3章 消毒灭菌与 病原微生物实验室生物安全
目的要求
掌握：消毒、灭菌、抑菌、无菌、防腐、 无菌操作的概念； 熟悉：高压灭菌、紫外线及滤过除菌法 的应用范围。

第一节
消毒灭菌常用术语
1、灭菌（sterilization）：杀死物体上 所有微生物（包括芽胞）的方法。 2、消毒（disinfection）：杀死物体上或 环境中的病原微生物的方法。 消毒剂：用于消毒的化学药品。常用浓 度下，只对细菌繁殖体有效。 3、防腐（antisepsis）：防止或抑制微生 物的生长的方法。 防腐剂：用于防腐的化学药品。
一、二级实验室不得从事高致病性病原 微生物实验活动。三级、四级实验室从事高 致病性病原微生物实验活动。 从事高致病性病原微生物相关实验活动 应当有２名以上的工作人员共同进行。在同 一个实验室的同一个独立安全区域内，只能 同时从事一种高致病性病原微生物的相关实 验活动。应有健全安全保卫制度 。
实验室工作人员应掌握实验室技术规范、 操作规程、生物安全防护知识和实际操作技 能。应有符合要求的防护用品，应建立健康 档案；进行预防接种。
病原微生物所致的安全问题，如病原微生 物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、 重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面 临的最现实的生物安全问题。 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩 散和防感染。 关于病原微生物实验室生物安全，我国法 令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的 分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律 责任等。


结构：由头部和尾部 组成； 化学组成：蛋白质与 核酸； 核酸类型：为DNA或 RNA，大多数DNA噬菌 体的DNA为线状双链； 噬菌体具有抗原性； 抵抗力：比一般细菌 繁殖体强。
第二节 毒性噬菌体
毒性噬菌体（virulent phage） 能在 宿主细胞内增殖，产生许多子代噬菌体， 并最终裂解细菌。 液体培养基：透明澄清 固体培养基：噬斑
监督的主要内容是监督病原微 生物实验室执行国家有关法律、行 政法规、国家标准和要求的记录、 档案及报告的情况。 法律责任的核心是承担造成传 染病传播、流行或者其他严重后果 的法律责任。
思 考 题
名词解释：灭菌、消毒、防腐、无菌、 无菌操作。 试述高压蒸汽灭菌法、紫外线杀菌法的 原理、适用、特点？ 滤过除菌法的应用范围。 影响消毒剂消毒灭菌效果的因素有哪些？
（三）滤过除菌法 用物理阻流的方法除去液体或空气中的 细菌，达到无菌的目的。 所用的器具是滤菌器（薄膜滤菌器、玻 璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌 器）。 主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒 素、抗生素以及空气等的除菌。
滤器和生物洁净室
（四）超声波消毒法 不被人耳感受的高于20kHz/s的声波， 称为超声波。超声波可裂解多数细菌， 尤其是G-菌。 主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或 制备抗原等。如超声振荡仪
（3） 干烤 利用干烤箱灭菌 （160~170º C，2h），适用于高温下 不变质、不损坏、不蒸发的物品 （4） 红外线 是一种0.77~1000μm波 长的电磁波，尤以1~10μm波长的热效 应最强。热效应只能在照射到的表面产 生。与干烤相似，多用于医疗器械的灭 菌。
2、湿热灭菌法 最常用，效果优于干热灭菌法。 同样条件下湿热效果强于干热的原因： 湿热的穿透力强 热蒸汽有潜能 蛋白质含水量越多越容易变性
实验室应有科学、严格的管理制度，定 期对实验室设施设备、材料等进行检查、维 护和更新，应对废水、废气以及其他废物进 行合理处置，防止环境污染。
生 物 安 全
三、实验室感染的控制以及监督和法律责任
实验室感染控制工作包括定期检查实验室的 生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本 保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和 废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时， 预防、控制措施包括：①封闭被病原微生物污 染的实验室或可能造成病原微生物扩散的场所； ②开展流行病学调查；③对病人进行隔离治疗， 对相关人员进行医学检查；④对密切接触者进 行医学观察；⑤进行现场消毒；⑥对染疫或者 疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。