猪卵母细胞体外成熟的研究进展
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节 ，受 到 众 多 因素 的调 控 ，其 调 控机 制 非 常复 后 ，线粒体又移 向核周 围，形成幼稚 型线 粒体 。
杂。
随着卵母细胞 的成 熟 ，粗面 内质 网减少 ，滑面 内
尽 管猪 卵母细胞体外成 熟技术 至今 已经取得 质 网增多 ，到成 熟晚期 ，滑面 内质 网变得 很少 。
Ｐ Ｅ 的活性， 使卵母细胞 内的ｃ Ｍ 处 ＡＰ ｃ ｃ ５ 氨酸磷 酸酶 。此外 ，Ｃ ｃ ｉＢ ｄ ２酪 ｙ ｌ ｎ 在激活Ｍ Ｆ 磷酸二酯 酶 （Ｄ ） Ｐ 从而抑制卵母细胞成熟ｕ 。 的同时还激活 了ｐ ９ ｏ ，ｐ ９ ｏ 控制微 管组织 中 于高浓度状态， ３ｍ ｓ ３ｍ ｓ 心 的变化，影响纺锤体的形成ｕ 。
． 母 细胞胞质均 匀、形态完好 、裸卵较少 ，果好 。初情 期前 的青年 母猪 的卵巢 卵母细胞
生长 因子对 卵母细胞成 熟的作用是正 向的。
体外成熟后 可得到后代 ，但 是效率不如 成年母猪 发 育卵泡 中存在 多种促生长 因子及 其受体 ，它们 卵巢体外成 熟 的卵母细胞 ，即使是性成 熟后还没 同时影响卵膜细胞 和颗粒细胞 的增殖和分化 ，并
丘细 胞 的有无 和层 数 ，猪 卵丘 一 卵母 细胞 复合体 外 成 熟 培养 中 ，研 究较 多 的就 是 表 皮 生长 因子 分５ 级 。Ａ ：扩 展 且颜色 较 暗 ，卵丘细 胞有 ５ （Ｇ ） Ｇ 是一 种 卵母 细 胞成 熟 的诱 导 剂 ，能 级 Ｅ Ｆ 。Ｅ Ｆ
层 以上包 裹 的胞 质均 匀 的卵母 细胞 ；Ｂ ：卵丘 促 进Ｃ Ｃ 的体外 成熟 ，在Ｃ Ｃ 上 存在Ｅ Ｆ 级 Ｏｓ Ｏｓ Ｇ 受体 ， 细胞 颜色 较浅 且稀疏 的，卵丘 细胞 有５ 以上包 随着卵泡 的发育表达增 强 ，排 卵前达到 高峰 。 层
卵母细胞体外成熟 （ Ｍ 是随着动物 胚胎体外 程 中移 向皮质 ，皮质 颗 粒完 全 形 成后 ，高尔 基 Ｉ ） Ｖ
生产 （Ｖ ） Ｉ Ｐ 技术 的产 生和 发展而起来 的。ＩＭ Ｖ 是体 复合 体 在 皮质 中消 失 。发育 早 期 的线 粒 体为 圆
外 受精 、核移 植 、转 基 因等 生物 技术 的重要 环 形或椭 圆形 ，主要分布于皮质部 ，卵母细 胞成熟
ＭＦ Ｐ 是一种 蛋 白激 酶 ， 由调 解亚 基细 胞周 期
要考 虑 卵巢 保 存 的温 度 和 离 体 时 间对 卵母 细 胞 ２ ５ 卵母细胞成熟促进 因子 （ Ｆ ． Ｍ ） Ｐ 储 存 时间 的 比较 ，其 结 果表 明 ，牛 卵巢 在２ ℃ 蛋 白Ｃ ｃ ｉ Ｂ ｇ ４ ｙ １ ｎ ＊ 催化 亚基ｐ ４ｃ ｃ 两 种 蛋 白组 成 ３ ｄ ２
植 （Ｃ Ｔ 时经产 母猪 以及初情 期前母猪卵母 细胞 酸性 成 纤 维细 胞 生长 因子 （Ｆ Ｆ 、胰 岛素样 生 ＳＮ） ａＧ ）
对 发 育 影 响 不 大 。 ２ ２ 卵 母 细 胞 的分 级 ．
长 因子 （Ｇ ） Ｉ Ｆ 、血小板衍 生生 长 因子 （Ｄ Ｆ 、血 ＰＧ） 管 内皮生 长因子 （Ｅ Ｆ 、转化 生长 因子 （Ｇ ） ＶＧ） ＴＦ 、
了很大 的进步 ，并 已经建立 了比较 完善的体外成 胞质成熟 的特 点就 是积 累一些稳定 的ｍ Ｎ ，并在 ＲＡ 熟培养体系 ，但 卵母细胞体外成熟 的质 量还不够 卵母细胞成熟 的一 定阶段进行蛋 白质 的翻译 。并
高，达不到大量生 产体外胚胎 的要求 ，还 有待于 且 ，细 胞质 成 熟 与细 胞核 成 熟 中有 些 内容 也 是
进 一步完善提 高。 相 互 关 联 的 。有些 细 胞质 成 熟 过程 依赖 于 细胞
１ 卵母细胞 体外成熟的机理 下 ，经过一系列生长 发育最终形成有 受精 、胚胎
核成 熟 。因此 ，只 有 当体 外 成 熟和 体 内成 熟 非 核 、质 的成 熟与卵丘细胞 的成熟及其 卵丘 一
（ 吉林省农业科学院 畜牧科学 分院，吉林 公主岭 １６ ０ ） ３ １０
摘 要 ：综述 了猪 卵母 细胞 体外成熟的分子机理和影响 因素 ，以期为后续工作奠定基础。 关键词 ：猪 ；卵母 细胞 ；体 外成 熟 中图分类号 ：￥ ２ ． ８８ ３ 文献标识码 ：Ｂ 文章编 号 ：１０ — ７ ９ （０ ４ ０ ０ — ５ ０ ５ ２ ３ ２ １ ）０ — ０ ７ ０ １
２．％ ８ ８ …。Ｐ ｍ ｒ ｐ ｒ ｉ ｐ ａ ａ 比较 了把 猪 卵巢 分别 放 于 解造成Ｍ Ｆ Ｐ 复合体 的失活 。Ｍ Ｆ Ｐ 前体转 化 为Ｍ Ｆ Ｐ 需
一
８ —
Ｈ ｉ ｎｊ ｎ ｏ ｒａ ｏ ｎｍ ｌ ｅ ｒｄｃｉ Ｖ １ ９ Ｎ ． ２ １ ｅ ｏｇｉ ｇＪｕｎｌ ｆ ｉ ａ Ｒ ｐｏ ｕｔ ｎ ｏ． ｏ ０ ｌ ａ Ａ ｏ １ ４ １
有怀孕经历 。而且 ，发情 周期渐趋 正常的青年母 参 与 调 节 卵母 细 胞 的成 熟 。颗 粒 细 胞 一旦 开 始 猪其 卵母细 胞在支持后 期发育上 也 比初情期前 的 增 殖 分化 ，就分 泌大量 的细 胞 因子， 如表 皮 生长 青 年母猪 好 。但 是 ，Ｋ ｈ ｏ ｚ ｒ Ｊ ｕ ｈ ｌ ｅ 等体细 胞核 移 因子 （Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱性 成纤维 细胞 生长 因子 （Ｆ Ｆ 、 ｂ Ｇ ）
成 熟 率 的影 响 。Ｙ ｎ 等 系 统进 行 了运 输温 度 和 ａｇ
程 中蛋 白质 的合 成 ，提 高卵 母 细胞 质 的成 熟质 量 ，添￣ Ｅ Ｆ 养成 熟 的卵母细胞 受精 后 的发育 ＭＧ 培
能力更 强 ｕ 。另有研 究报道 ，Ｅ Ｆ 猪雌 性原核 Ｇ对
形成 有促 进作用 ，Ｅ Ｆ Ｇ 不但 能促进 卵 母细胞 减数 分裂 ，也 间接调节卵母细胞浆 的成 熟。
ｐ ４ ｄ ２ 磷 酸 化 。而 Ｃ ｃ ｉ Ｂ 仅 是Ｍ Ｆ 调 节 的抑制作用 ，与卵母细胞 内的ｃ Ｍ 的水平有 关 。 ３ ｃｃ 去 ｙ １ｎ 不 Ｐ的 ＡＰ
亚 基 ，而 且 还 可 以直 接 激 活 与Ｍ Ｆ 活 有 关 的 已￣ ｃ Ｍ 可 以抑制卵母细胞 成熟 ，而Ｈ 可 以抑 制 Ｐ激 ＨＡ Ｐ ｘ
猪 不 同 品种 之 间 ，其 卵母 细胞 质 量 也存 在 差异 ，如 瘦 肉型猪与非瘦 肉型猪 ，野猪 与家猪 ， 外 国品种 与 国内品种 。即便 是国 内不 同省份 的品 种 ，也可 能因遗传背景 、特 定营养环境 、气候条 件 的不 同，导致卵母细胞质量和 体外成 熟培养 的
当回收温 度为３ ～３ ６ ９ｏ Ｃ、２ ～２ ５ ８ｏ Ｃ、１ ～ １ ４ ７℃ 地产 生 ，在 分 裂 问 期这 种 周 期 蛋 白不 断积 蓄 ， 时， 体外 受精 的卵裂率 分别 为５ ． ％ ９ ８ 和 超过激 活Ｍ Ｆ 猪 ２ ３ 、４ ． ％ Ｐ 的临界值 ，在 分裂后 期这 种 蛋 白降
卵 母 细胞 体 外 成 熟是 指 在体 外 特 定 的条 件 常接 近 的生 活 环境 ，才 能获 得较 高 的成 熟 率 。
发 育能力 的过程 。卵母 细胞 的成熟包括细胞 核的 卵母细胞复合体的发育成熟之 间也存在着复杂 的相
成 熟和细胞质 的成 熟，核成熟先于质成 熟。细胞 互促进和相互抑制作用 。体外培养实验证 明，从腔 核 成 熟 包括 ：卵母 细 胞恢 复 减数 分 裂 、细 胞 核 前 卵泡 来的卵母细胞剥去 颗粒细胞或与散在 的颗 膜破裂 、核仁发生致密化 、生发泡破裂 （Ｖ Ｄ 并 粒细胞共 同培养 ，都不 能进行 明显 的生长 ｕ。这 ＧＢ ） 发 育到第 １ 次减数 分裂 中期 ； 同时 ，卵母 细胞进 是 由于卵母细胞 的生长依赖 于与它周 围的颗粒细
保存２ 后 收集 的卵母细胞 体外 受精后不 影响其 的复合体 ，它 以非激 活的前体物 质存在于成 熟前 ４ ｈ
后 期发育 。与其他 哺 乳动 物相 比， 卵母 细胞 的卵母细 胞 中 。Ｃ ｃ ＊ Ｃ ｃ Ｂ 猪 ｄ ２ Ｈ ｙ ｌ ｎ 的变化 直接 影响 ｉ 对温度特别敏 感， 卵巢 的回收温度 较高或较低 ， 卵 到Ｍ Ｆ Ｐ 的活性 。ｐ ４ ｄ ２ 无分裂能力 的卵 母细胞 ３ｃｃ在
皮质颗粒在胞 质合成后 ，逐渐 迁移到质膜下 的皮 致 。 质 区。高尔基 复合体最初位 于核的周 围，成熟过 ２ 影 响卵母细胞体外成 熟的因素 ２ １ 动 物的种类 、年 龄及健康状况 ．
收稿 日期 ：０ 卜０— ６ ２ １ ２ １
基金项 目： 吉林省科技发展计划项 目 《 利用体细胞核 移植技术生产转基因猪的研究》（０ ８５６ ２ ００６ ）
一
步跨越 第１ 次减 数分裂 中期 ，排 出第ｌ 极体 ，并 胞之 间的缝隙连接所介 导的通讯 ，其生长速度与
停 止于第 ２ 次减数 分裂 的 中期 ，直 到受精 、激 活 它周 围的颗粒细胞 有关 。这些虽然被 人们所 了
后才完成第 ２ 次减 数分裂并排 出第 ２ 极体 。细胞质 解 ，但机 理还不是非常清 楚，有待于进一步 的探 的成 熟包括 ：细胞器 的变化和 细胞基质 的变化 。 索 ，以使 体外成熟效果与 体 内成熟的效果趋于一
同一猪种 在不 同年龄 、个体其卵母细胞 体外 ９ 后 ＩＭ Ｖ ，发现在 ２ ￣３ ｈ Ｖ 、Ｉ Ｆ ５ ５ｏ Ｃ保存６ｈ 仍可 以
成 熟的情况也有所 不 同。成年 期 的健康猪体 其卵 有 效维 持猪 卵 的发育 能 力 ，但 是 发育 率 比３ ５℃ 巢 表 面直径 ３ ６ ｍ＇泡 比例 较 高 ，所抽 取 的卵 保存３ 的低 。 ～ ￣ ｍ Ｂ ｈ
包 裹 在 卵母 细 胞 周 围 的 卵丘 细 胞 的层 数 也 白细 胞 介 素 （ Ｌ 、 神经 生长 因子 （Ｇ ） 干扰 Ｉ） ＮＦ、 影 响着 卵 母细 胞 的体外 成 熟 。不 同 的研 究者 对 素一 （Ｆ — ） ｒ Ｉ Ｎ ｒ 、抑制素 和活化 素等 ，这些 因子对 卵母 细 胞 的分 类 不 尽 一致 。根据 卵母 细胞 外 卵 卵母 细胞 的生长起 决定作用 。在猪 的卵母细胞 体
Ｈ ｉ ｎｊ ｎ ｏｒａ ｏ Ａ ｉ ａ Ｒ ｐｏｕ ｔｎ Ｖ １ ９ Ｎ ． ２ １ ｅｌ ｇ ａｇＪｕｎｌ ｆ ｎｍ ｌ ｅ ｒｄ ｃｏ ｏ． ｏ ０ ｏ ｉ ｉ １ ４ １
猪 卵母 细胞 体 外 成 熟 的研 究进 展
刘 晓辉， 郎洪彦， 金海 国， 罗晓彤 ， 刘 铮， 王晓阳
７ 一
作者简 介 ： 晓辉 （９ ４ ） 男，助理研 究员，硕士 。 刘 １ ７一 ，
通 讯作者 ： 王晓阳 （ ５一 ，男，副研究员。 １ ６） ９
一
黑龙江动物繁殖
第 １卷 ９
第 ４期
２ １ 年 ０１
差异 。
４℃、１ ５℃ 、２ ５℃和 ３ ５℃保存 ０ｈ 、６ｈ 、３ｈ 和
母 细胞 体 外 成 熟培 养 效 果极 差 甚至 是 退 化 。较 中含量很低 ，体外 成熟后含量 则 明显提 高，这表
合适 的回收温 度 是３ ～ ３ ２ ５℃ 。当卵巢 回收温 度 明卵母细胞 成熟分裂 能力 的恢复与ｐ ４ｃ ｃ 的浓 ３ ｄ ２
低于２ ５℃， 的卵母细胞 将受到 冷休克 的打击 。 度 有关 。Ｃ ｃ ｉ Ｂ 猪 ｙ ｌ ｎ 随着 细胞 周期 的变化 而周 期性
裹 的胞质 均匀 的卵母 细胞 ；Ｃ ：有３ 层 卵丘 Ｅ Ｆ ￣ 诱 导猪 、牛ｕ。 级 ～５ Ｇ Ｏ够 。 体外培 养卵 子 的卵丘扩
细胞 紧密 包裹 的均 匀胞 质卵母 细胞 ；Ｄ ：卵丘 散 ，并促进 核成 熟 。Ｅ Ｆ 级 Ｇ 能促 进 卵母 细胞成 熟过 细胞稀 少 ，胞质不 均匀 ；Ｅ ：裸卵 、黑卵 。Ａ 级 、 Ｂ 可 以用 于体 外成 熟培 养 ，一般成 熟率 较高 ， 级 而ｃ 级则效 果较 差，Ｅ 、Ｄ 级不 能用于体外培养 。 ２ ３ 卵巢运输 ． 卵巢一般 都从离 实验 室较 远 的屠 宰场 获得 ，
杂。
随着卵母细胞 的成 熟 ，粗面 内质 网减少 ，滑面 内
尽 管猪 卵母细胞体外成 熟技术 至今 已经取得 质 网增多 ，到成 熟晚期 ，滑面 内质 网变得 很少 。
Ｐ Ｅ 的活性， 使卵母细胞 内的ｃ Ｍ 处 ＡＰ ｃ ｃ ５ 氨酸磷 酸酶 。此外 ，Ｃ ｃ ｉＢ ｄ ２酪 ｙ ｌ ｎ 在激活Ｍ Ｆ 磷酸二酯 酶 （Ｄ ） Ｐ 从而抑制卵母细胞成熟ｕ 。 的同时还激活 了ｐ ９ ｏ ，ｐ ９ ｏ 控制微 管组织 中 于高浓度状态， ３ｍ ｓ ３ｍ ｓ 心 的变化，影响纺锤体的形成ｕ 。
． 母 细胞胞质均 匀、形态完好 、裸卵较少 ，果好 。初情 期前 的青年 母猪 的卵巢 卵母细胞
生长 因子对 卵母细胞成 熟的作用是正 向的。
体外成熟后 可得到后代 ，但 是效率不如 成年母猪 发 育卵泡 中存在 多种促生长 因子及 其受体 ，它们 卵巢体外成 熟 的卵母细胞 ，即使是性成 熟后还没 同时影响卵膜细胞 和颗粒细胞 的增殖和分化 ，并
丘细 胞 的有无 和层 数 ，猪 卵丘 一 卵母 细胞 复合体 外 成 熟 培养 中 ，研 究较 多 的就 是 表 皮 生长 因子 分５ 级 。Ａ ：扩 展 且颜色 较 暗 ，卵丘细 胞有 ５ （Ｇ ） Ｇ 是一 种 卵母 细 胞成 熟 的诱 导 剂 ，能 级 Ｅ Ｆ 。Ｅ Ｆ
层 以上包 裹 的胞 质均 匀 的卵母 细胞 ；Ｂ ：卵丘 促 进Ｃ Ｃ 的体外 成熟 ，在Ｃ Ｃ 上 存在Ｅ Ｆ 级 Ｏｓ Ｏｓ Ｇ 受体 ， 细胞 颜色 较浅 且稀疏 的，卵丘 细胞 有５ 以上包 随着卵泡 的发育表达增 强 ，排 卵前达到 高峰 。 层
卵母细胞体外成熟 （ Ｍ 是随着动物 胚胎体外 程 中移 向皮质 ，皮质 颗 粒完 全 形 成后 ，高尔 基 Ｉ ） Ｖ
生产 （Ｖ ） Ｉ Ｐ 技术 的产 生和 发展而起来 的。ＩＭ Ｖ 是体 复合 体 在 皮质 中消 失 。发育 早 期 的线 粒 体为 圆
外 受精 、核移 植 、转 基 因等 生物 技术 的重要 环 形或椭 圆形 ，主要分布于皮质部 ，卵母细 胞成熟
ＭＦ Ｐ 是一种 蛋 白激 酶 ， 由调 解亚 基细 胞周 期
要考 虑 卵巢 保 存 的温 度 和 离 体 时 间对 卵母 细 胞 ２ ５ 卵母细胞成熟促进 因子 （ Ｆ ． Ｍ ） Ｐ 储 存 时间 的 比较 ，其 结 果表 明 ，牛 卵巢 在２ ℃ 蛋 白Ｃ ｃ ｉ Ｂ ｇ ４ ｙ １ ｎ ＊ 催化 亚基ｐ ４ｃ ｃ 两 种 蛋 白组 成 ３ ｄ ２
植 （Ｃ Ｔ 时经产 母猪 以及初情 期前母猪卵母 细胞 酸性 成 纤 维细 胞 生长 因子 （Ｆ Ｆ 、胰 岛素样 生 ＳＮ） ａＧ ）
对 发 育 影 响 不 大 。 ２ ２ 卵 母 细 胞 的分 级 ．
长 因子 （Ｇ ） Ｉ Ｆ 、血小板衍 生生 长 因子 （Ｄ Ｆ 、血 ＰＧ） 管 内皮生 长因子 （Ｅ Ｆ 、转化 生长 因子 （Ｇ ） ＶＧ） ＴＦ 、
了很大 的进步 ，并 已经建立 了比较 完善的体外成 胞质成熟 的特 点就 是积 累一些稳定 的ｍ Ｎ ，并在 ＲＡ 熟培养体系 ，但 卵母细胞体外成熟 的质 量还不够 卵母细胞成熟 的一 定阶段进行蛋 白质 的翻译 。并
高，达不到大量生 产体外胚胎 的要求 ，还 有待于 且 ，细 胞质 成 熟 与细 胞核 成 熟 中有 些 内容 也 是
进 一步完善提 高。 相 互 关 联 的 。有些 细 胞质 成 熟 过程 依赖 于 细胞
１ 卵母细胞 体外成熟的机理 下 ，经过一系列生长 发育最终形成有 受精 、胚胎
核成 熟 。因此 ，只 有 当体 外 成 熟和 体 内成 熟 非 核 、质 的成 熟与卵丘细胞 的成熟及其 卵丘 一
（ 吉林省农业科学院 畜牧科学 分院，吉林 公主岭 １６ ０ ） ３ １０
摘 要 ：综述 了猪 卵母 细胞 体外成熟的分子机理和影响 因素 ，以期为后续工作奠定基础。 关键词 ：猪 ；卵母 细胞 ；体 外成 熟 中图分类号 ：￥ ２ ． ８８ ３ 文献标识码 ：Ｂ 文章编 号 ：１０ — ７ ９ （０ ４ ０ ０ — ５ ０ ５ ２ ３ ２ １ ）０ — ０ ７ ０ １
２．％ ８ ８ …。Ｐ ｍ ｒ ｐ ｒ ｉ ｐ ａ ａ 比较 了把 猪 卵巢 分别 放 于 解造成Ｍ Ｆ Ｐ 复合体 的失活 。Ｍ Ｆ Ｐ 前体转 化 为Ｍ Ｆ Ｐ 需
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８ —
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有怀孕经历 。而且 ，发情 周期渐趋 正常的青年母 参 与 调 节 卵母 细 胞 的成 熟 。颗 粒 细 胞 一旦 开 始 猪其 卵母细 胞在支持后 期发育上 也 比初情期前 的 增 殖 分化 ，就分 泌大量 的细 胞 因子， 如表 皮 生长 青 年母猪 好 。但 是 ，Ｋ ｈ ｏ ｚ ｒ Ｊ ｕ ｈ ｌ ｅ 等体细 胞核 移 因子 （Ｇ ） Ｅ Ｆ 、碱性 成纤维 细胞 生长 因子 （Ｆ Ｆ 、 ｂ Ｇ ）
成 熟 率 的影 响 。Ｙ ｎ 等 系 统进 行 了运 输温 度 和 ａｇ
程 中蛋 白质 的合 成 ，提 高卵 母 细胞 质 的成 熟质 量 ，添￣ Ｅ Ｆ 养成 熟 的卵母细胞 受精 后 的发育 ＭＧ 培
能力更 强 ｕ 。另有研 究报道 ，Ｅ Ｆ 猪雌 性原核 Ｇ对
形成 有促 进作用 ，Ｅ Ｆ Ｇ 不但 能促进 卵 母细胞 减数 分裂 ，也 间接调节卵母细胞浆 的成 熟。
ｐ ４ ｄ ２ 磷 酸 化 。而 Ｃ ｃ ｉ Ｂ 仅 是Ｍ Ｆ 调 节 的抑制作用 ，与卵母细胞 内的ｃ Ｍ 的水平有 关 。 ３ ｃｃ 去 ｙ １ｎ 不 Ｐ的 ＡＰ
亚 基 ，而 且 还 可 以直 接 激 活 与Ｍ Ｆ 活 有 关 的 已￣ ｃ Ｍ 可 以抑制卵母细胞 成熟 ，而Ｈ 可 以抑 制 Ｐ激 ＨＡ Ｐ ｘ
猪 不 同 品种 之 间 ，其 卵母 细胞 质 量 也存 在 差异 ，如 瘦 肉型猪与非瘦 肉型猪 ，野猪 与家猪 ， 外 国品种 与 国内品种 。即便 是国 内不 同省份 的品 种 ，也可 能因遗传背景 、特 定营养环境 、气候条 件 的不 同，导致卵母细胞质量和 体外成 熟培养 的
当回收温 度为３ ～３ ６ ９ｏ Ｃ、２ ～２ ５ ８ｏ Ｃ、１ ～ １ ４ ７℃ 地产 生 ，在 分 裂 问 期这 种 周 期 蛋 白不 断积 蓄 ， 时， 体外 受精 的卵裂率 分别 为５ ． ％ ９ ８ 和 超过激 活Ｍ Ｆ 猪 ２ ３ 、４ ． ％ Ｐ 的临界值 ，在 分裂后 期这 种 蛋 白降
卵 母 细胞 体 外 成 熟是 指 在体 外 特 定 的条 件 常接 近 的生 活 环境 ，才 能获 得较 高 的成 熟 率 。
发 育能力 的过程 。卵母 细胞 的成熟包括细胞 核的 卵母细胞复合体的发育成熟之 间也存在着复杂 的相
成 熟和细胞质 的成 熟，核成熟先于质成 熟。细胞 互促进和相互抑制作用 。体外培养实验证 明，从腔 核 成 熟 包括 ：卵母 细 胞恢 复 减数 分 裂 、细 胞 核 前 卵泡 来的卵母细胞剥去 颗粒细胞或与散在 的颗 膜破裂 、核仁发生致密化 、生发泡破裂 （Ｖ Ｄ 并 粒细胞共 同培养 ，都不 能进行 明显 的生长 ｕ。这 ＧＢ ） 发 育到第 １ 次减数 分裂 中期 ； 同时 ，卵母 细胞进 是 由于卵母细胞 的生长依赖 于与它周 围的颗粒细
保存２ 后 收集 的卵母细胞 体外 受精后不 影响其 的复合体 ，它 以非激 活的前体物 质存在于成 熟前 ４ ｈ
后 期发育 。与其他 哺 乳动 物相 比， 卵母 细胞 的卵母细 胞 中 。Ｃ ｃ ＊ Ｃ ｃ Ｂ 猪 ｄ ２ Ｈ ｙ ｌ ｎ 的变化 直接 影响 ｉ 对温度特别敏 感， 卵巢 的回收温度 较高或较低 ， 卵 到Ｍ Ｆ Ｐ 的活性 。ｐ ４ ｄ ２ 无分裂能力 的卵 母细胞 ３ｃｃ在
皮质颗粒在胞 质合成后 ，逐渐 迁移到质膜下 的皮 致 。 质 区。高尔基 复合体最初位 于核的周 围，成熟过 ２ 影 响卵母细胞体外成 熟的因素 ２ １ 动 物的种类 、年 龄及健康状况 ．
收稿 日期 ：０ 卜０— ６ ２ １ ２ １
基金项 目： 吉林省科技发展计划项 目 《 利用体细胞核 移植技术生产转基因猪的研究》（０ ８５６ ２ ００６ ）
一
步跨越 第１ 次减 数分裂 中期 ，排 出第ｌ 极体 ，并 胞之 间的缝隙连接所介 导的通讯 ，其生长速度与
停 止于第 ２ 次减数 分裂 的 中期 ，直 到受精 、激 活 它周 围的颗粒细胞 有关 。这些虽然被 人们所 了
后才完成第 ２ 次减 数分裂并排 出第 ２ 极体 。细胞质 解 ，但机 理还不是非常清 楚，有待于进一步 的探 的成 熟包括 ：细胞器 的变化和 细胞基质 的变化 。 索 ，以使 体外成熟效果与 体 内成熟的效果趋于一
同一猪种 在不 同年龄 、个体其卵母细胞 体外 ９ 后 ＩＭ Ｖ ，发现在 ２ ￣３ ｈ Ｖ 、Ｉ Ｆ ５ ５ｏ Ｃ保存６ｈ 仍可 以
成 熟的情况也有所 不 同。成年 期 的健康猪体 其卵 有 效维 持猪 卵 的发育 能 力 ，但 是 发育 率 比３ ５℃ 巢 表 面直径 ３ ６ ｍ＇泡 比例 较 高 ，所抽 取 的卵 保存３ 的低 。 ～ ￣ ｍ Ｂ ｈ
包 裹 在 卵母 细 胞 周 围 的 卵丘 细 胞 的层 数 也 白细 胞 介 素 （ Ｌ 、 神经 生长 因子 （Ｇ ） 干扰 Ｉ） ＮＦ、 影 响着 卵 母细 胞 的体外 成 熟 。不 同 的研 究者 对 素一 （Ｆ — ） ｒ Ｉ Ｎ ｒ 、抑制素 和活化 素等 ，这些 因子对 卵母 细 胞 的分 类 不 尽 一致 。根据 卵母 细胞 外 卵 卵母 细胞 的生长起 决定作用 。在猪 的卵母细胞 体
Ｈ ｉ ｎｊ ｎ ｏｒａ ｏ Ａ ｉ ａ Ｒ ｐｏｕ ｔｎ Ｖ １ ９ Ｎ ． ２ １ ｅｌ ｇ ａｇＪｕｎｌ ｆ ｎｍ ｌ ｅ ｒｄ ｃｏ ｏ． ｏ ０ ｏ ｉ ｉ １ ４ １
猪 卵母 细胞 体 外 成 熟 的研 究进 展
刘 晓辉， 郎洪彦， 金海 国， 罗晓彤 ， 刘 铮， 王晓阳
７ 一
作者简 介 ： 晓辉 （９ ４ ） 男，助理研 究员，硕士 。 刘 １ ７一 ，
通 讯作者 ： 王晓阳 （ ５一 ，男，副研究员。 １ ６） ９
一
黑龙江动物繁殖
第 １卷 ９
第 ４期
２ １ 年 ０１
差异 。
４℃、１ ５℃ 、２ ５℃和 ３ ５℃保存 ０ｈ 、６ｈ 、３ｈ 和
母 细胞 体 外 成 熟培 养 效 果极 差 甚至 是 退 化 。较 中含量很低 ，体外 成熟后含量 则 明显提 高，这表
合适 的回收温 度 是３ ～ ３ ２ ５℃ 。当卵巢 回收温 度 明卵母细胞 成熟分裂 能力 的恢复与ｐ ４ｃ ｃ 的浓 ３ ｄ ２
低于２ ５℃， 的卵母细胞 将受到 冷休克 的打击 。 度 有关 。Ｃ ｃ ｉ Ｂ 猪 ｙ ｌ ｎ 随着 细胞 周期 的变化 而周 期性
裹 的胞质 均匀 的卵母 细胞 ；Ｃ ：有３ 层 卵丘 Ｅ Ｆ ￣ 诱 导猪 、牛ｕ。 级 ～５ Ｇ Ｏ够 。 体外培 养卵 子 的卵丘扩
细胞 紧密 包裹 的均 匀胞 质卵母 细胞 ；Ｄ ：卵丘 散 ，并促进 核成 熟 。Ｅ Ｆ 级 Ｇ 能促 进 卵母 细胞成 熟过 细胞稀 少 ，胞质不 均匀 ；Ｅ ：裸卵 、黑卵 。Ａ 级 、 Ｂ 可 以用 于体 外成 熟培 养 ，一般成 熟率 较高 ， 级 而ｃ 级则效 果较 差，Ｅ 、Ｄ 级不 能用于体外培养 。 ２ ３ 卵巢运输 ． 卵巢一般 都从离 实验 室较 远 的屠 宰场 获得 ，