原核生物基因组DNA的制备

五、结果检测

紫外吸收法检测所提取基因组DNA的浓度与纯度； 取少量DNA溶液在琼脂糖凝胶上电泳分离并在核 酸紫外检测仪上观察。
六.思考题
（1）操作第（4）步骤的时候溶液是否变得清亮？ 如果没有，试分析原因及可能对实验结果产生的影响。 （2）试分析漂洗液PW的成分，在第10步骤中，如果 漂洗液没有充分晾干，会导致什么样后果？
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三、实验材料


沙门菌 细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）天根 DP302 水浴锅、离心机、移液器
四、注意事项

实验中所有的废弃物均要高压灭菌。
五、实验步骤



1. 取细菌培养液1.5 ml，10,000rpm，1 min，尽量 吸净上清。 2. 向菌体沉淀中加入200 μl缓冲液GA，振荡至菌体 彻底悬浮。 3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。 4. 加入220 μl缓冲液GB，振荡15 sec，70 ℃，10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的 水珠。




8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW，12,000 rpm， 30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。 9. 重复操作步骤9。 10. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm，2 min， 倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底 晾干吸附材料中残余的漂洗液。 11. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜 的中间部位悬空滴加50 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm ，2 min，将溶液收集到离心管中。



5. 加220 μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可 能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水 珠。 6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm ，30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD，12,000 rpm ，30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
实验一
原核生物 基因组DNA的制备
一、实验目的
掌握从细菌中提取基因组DNA的基本原理 熟悉利用试剂盒提取细菌DNA的技术流程 提取沙门菌基因组DNA

二、实验原理

①裂解细胞 ②除去蛋白质 ③析出DNA



试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独 特的缓冲液系统提取细菌基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为特有新型材料， 可高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及 细胞中其他有机化合物。 回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建等实验。