Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit 膜联蛋白V细胞凋亡检测试剂盒中文说明书

膜联蛋白V的结合细胞凋亡检测试剂盒

绿色荧光优化流式细胞仪

Cat.No ：BS7127

包装：1套

一、描述

膜联蛋白是一类钙依赖性磷脂结合蛋白。它们大量存在于真核生物中，是参与信号转导的广泛的细胞质蛋白家族。膜联蛋白V的优先结合伴侣是磷脂酰丝氨酸（PS），它通常保持在细胞膜的内表面（胞质一侧）。在细胞凋亡时，PS转移到质膜的外表面。细胞表面上的磷脂酰丝氨酸是细胞凋亡起始/中间阶段的一个通用指标，可以在观察形态变化之前被检测出。我们的细胞仪表™检测试剂盒是通过检测磷脂酰丝氨酸（PS）的易位来监测细胞凋亡的。

该试剂盒采用我们专有的绿色荧光膜联蛋白V- iFluor 488 PS传感器，它能够特异性结合PS 。染色具有光谱特性，几乎与更高光稳定性的FITC相同，从而使其方便用于配备光源和滤波器的共同荧光仪器。该试剂盒提供了所有与流式细胞仪的应用优化的协议的必需成分。

二、试剂盒成分

A组分：膜联蛋白V- iFluor 488 （100X原液）1瓶（200微升/瓶）

B组份：缓冲液50毫升

C 组分：100X碘化丙啶1瓶（100微升）

三、保存

4℃，避光

四、步骤

注意：

对贴壁细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析不是常规检测，因为在细胞脱落或收获时，可能会出现特定的膜损伤。但是，此前已报道Casiola -罗森等人对贴壁细胞类型利用Annexin V的流式细胞仪的方法。

1、用试验化合物处理细胞（喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）来诱导细胞凋亡。

2、离心细胞，得到1-5 × 105个细胞/管。

3、将细胞悬浮于200μL的缓冲液（B组分）中。

4、添加2μL膜联蛋白V- iFluor™ 488（A组分）到细胞中。

可选：加入2 μL 100X碘化丙啶（C组分）到坏死细胞中。

5、在室温下孵育30 〜60分钟，避光。

6、可选：加200-300μL缓冲液（B组分），以增加体积在细胞仪分析细胞（见步骤7）。之前。

7、使用FL1通道显示膜联蛋白V- iFluor ™ 488的荧光强度（EX / EM =490/525nm），并使用FL2通道和碘化丙啶检测细胞活力。

五、数据分析

对于活的非凋亡细胞，膜联蛋白V- iFluor ™ 488能够检测非诱导细胞的先天性凋亡，

它通常占所有细胞的2-6 ％。对于凋亡细胞，膜联蛋白V- iFluor ™ 488能够结合到磷脂酰丝氨酸（位于细胞膜的外表面）上，因此增加了染色强度。

图1. Jurkat细胞中，膜联蛋白V- iFluor ™ 488结合到磷脂酰丝氨酸上的活性检测。未被处理的Jurkat细胞（蓝色）或用20 μM喜树碱（红色）在37 ℃、5％CO2培养箱中培养4-5小时，然后经过膜联蛋白V- iFluor ™ 488 染色30分钟。使用FACSCalibur （Becton Dickinson公司，圣何塞，加利福尼亚州）的流式细胞仪和FL1通道测定膜联蛋白V- iFluor 488的荧光强度。

六、警告！

使用前，请仔细阅读本协议。为了您的安全，请使用手套，护目镜或其他防护措施。本试剂盒的研发只能使用，不能用于药物，家庭或其他用途。