口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)抗体检测试验

口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体检测试验

一、介绍：

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性、热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，一旦发病，将会引起严重的经济损失。口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，目前已知共有7种血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲1型。

口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）特异性抗体的存在，通常用来证明宿主体内口蹄疫病毒已经感染或正在感染，非结构蛋白与结构蛋白不一样，没有血清型区分。国际兽医局（OIE）规定的非结构蛋白血清学检测方法为EITB和ELISA。

韩国金诺VDPro FMDV 非结构蛋白（NSP）抗体检测试剂盒，是用阻断ELISA，重组FMDV NSP蛋白包被，过氧化物酶标记的单克隆抗体，来检测血清中非结构蛋白抗体是否存在。适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。

二、试剂盒组成：

三、注意事项：

1、使用之前请仔细阅读操作说明；

2、试剂盒储存条件：2-8℃；

四、实验前准备：

1、洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。

2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。

五、操作步骤：

1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温（25±3℃），取出抗原包被板；

2、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80μl，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20μl后进行震荡混匀；

3、室温孵育60分钟；

4、洗板：每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；

5、每孔加入100μl酶标抗体，室温孵育60分钟；

6、重复步骤4，洗涤3次；

7、每孔加入TMB底物反应液100μl，室温暗处放置15分钟。

六、读数：

每孔加入50μl终止液，在酶标仪450nm波长处读数。

七、结果判定：

1、实验有效性判定

阴性对照OD值≥0.6

阳性对照OD值≤0.3

2、计算方法

3、判定标准

SN值＞0.60 判为阴性；

SN值≤0.60 判为阳性。

注：如果检测结果可疑，对样品进行再次检测。