丹参酮IIa磺酸钠注射液抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用及机制研究
四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究_邵佳亮
收稿日期:2011-05-18 基金项目:国家自然科学基金(30760230) 作者简介:邵佳亮(1980-),男,硕士,住院医师,主要从事肝纤维化的研究。 通信作者:胡国信,副教授,E -mail:hug uo x in8228@sina.co m 。 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究 邵佳亮,万赞燕,胡国信 (南昌大学第一附属医院感染科,南昌330006) 摘要:目的 构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl 4)复制模型方法进行适当改进。方法 取Sprague -Daw ley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A 组10只、B 组14只和C 组16只。B 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液2mL kg -1,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A 组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液5mL kg -1,2次 周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(A L T 、AST 、A L B 、T P 、A/G)水平;H E 及M asson 染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果 实验第8周B 、C 组均可见明显肝功能损害表现。B 组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C 组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论 低剂量CCl 4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。 关键词:四氯化碳;肝纤维化模型;改良;动物,实验;大鼠 中图分类号:R-332 文献标志码:A 文章编号:1000-2294(2011)07-0040-03 Improved Rat Model of Liver Fibrosis induced by CCl 4 SHAO Jia -liang,WAN Zan -yan,HU Guo -xin (Dep ar tment of I nf ectious Diseases ,the First A f f iliated H osp ital of N anchang Univ ersity , N anchang 330006,China) ABSTRACT:Objective To establish a rat m odel of liver fibrosis,and to improv e the classical CCl 4induction method.Methods Forty SD r ats (20female and 20male)w ere r ando mly divided into three gro ups.Gro up B (n =14)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of 40%CCl 4solution (a mix ture of CCl 4and peanut oil)tw ice a w eek and the feeding of no rmal complete diet.Gro up A (n =10)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of peanut oil tw ice a w eek and the feeding of nor mal com plete diet.Gro up C (n =16)w as given intr aper ito neal injec -tion of 5mL kg -1of 40%CCl 4solution tw ice a w eek and the feeding of diet containing 10%lar d and 2%cholesterol.Rats w ere killed at the end of 8w eeks,and the levels o f ser um ALT ,AST ,Alb,T P and A/G w ere determined by ELISA.The patho logical changes in liver tissue w ere ob -served by H E and M asso n staining.Results Liv er function w as damag ed apparently by CCl 4in -jectio n.Some specimens in g roup B pro duced false flo cculus and achieved the ear ly stage of liver fibro sis,w ith fatty deg ener ation in a few liver cells.A ll specimens in gr oup C had cirrhosis w ith diffuse hepatic steato sis.The m ortality w as 28.6%and 43.7%in gro up B and g roup C,respec -tively.Conclusion Liv er fibrosis can be induced by injection o f low do ses of CCl 4and feeding of norm al co mplete diet in rats.In addition,the improved m ethod can reduce the mortality and im -40南昌大学学报(医学版)2011年第51卷第7期 Jou rnal of Nanch ang University(M edical Science)2011,Vol.51No.7
黑升麻提取物对去势大鼠血清性激素及相关靶器官ER表达水平的影响
目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1 材料与方法 (3) 1.1.1 实验动物与实验药物 (3) 1.1.2 实验动物处理方法、分组及所需实验试剂和器材 (3) 1.1.3 标本收集 (4) 1.1.4 放射免疫实验所需主要试剂、仪器及实验方法 (5) 1.1.5 免疫组化实验所需主要试剂、仪器及实验步骤 (5) 1.2 结果 (8) 1.2.1 三组大鼠在不同给药周期血清E2水平的比较 (8) 1.2.2三组大鼠在不同给药周期血清FSH水平的比较 (9) 1.2.3三组大鼠在不同给药周期血清LH水平的比较 (10) 1.2.4 各组大鼠子宫组织中ER表达强度的比较 (11) 1.2.5 各组大鼠阴道壁组织中ER表达强度的比较 (14) 1.3 讨论 (15) 1.3.1 围绝经期性激素的改变 (15) 1.3.2 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的疗效 (16) 1.3.3 黑升麻提取物的非激素样作用 (17) 1.3.4 黑升麻提取物的作用机制假说 (18) 1.3.5 黑升麻提取物的用药周期 (20) 1.3.6 展望 (21) 参考文献 (21) 第2章综述 (26) 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的作用机制 (26) 2.1 摘要 (26) 2.2 概述 (27) 2.2.1 黑升麻提取物来自欧洲 (27) 2.2.2 引进中国 (28) - V -
华北理工大学硕士学位论文 2.3 黑升麻提取物作用机制假说 (29) 2.3.1 神经内分泌作用假说 (29) 2.3.2 选择性雌激素受体调节剂(SERM)作用机制假说 (30) 2.3.3 抗氧化作用和炎症反应作用机制假说 (30) 2.4 黑升麻提取物临床疗效的评价 (30) 2.5 黑升麻提取物在临床应用时的不良反应 (31) 2.6 黑升麻提取物临床应用的前景 (32) 参考文献 (33) 结论 (36) 致谢 (37) 导师简介 (38) 作者简介 (39) 学位论文数据集 (40) - VI -
丹参酮的提取及应用进展
丹参酮的提取及应用进展 摘要:丹参是一种中国传统草药, 丹参酮IIA是丹参的主要活性成分之一,是发挥药理活性的基础。该文章就近5年来有关丹参酮的提取、含量测定和生物活性的研究成果和药理研究现状及其在临床上的应用进行综述，为全面开发利用丹参提供参考。 关键词: 丹参酮IIA；提取及测定；临床应用；药理作用 Abstract：Salvia is a traditional Chinese herbal medicine, Tan IIA is one of the main active ingredient in Salvia, is to play a fundamental pharmacological activity. This article summarize about the extract of Tan、content determination、the research results of biological activities and pharmacological status quo for clinical application related to the nearest five years, To provide a reference for the comprehensive development and utilization of Salvia. Keywords: Tan; extract measurement; clinical application; pharmacologic action 丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrh iza Bge。的干燥根及根茎,主产于河北、安徽、江苏、四川等地。其化学成分分为脂溶性和水溶性两部分,前者以丹参酮型的二萜类化合物为主,主要有丹参酮I、丹参酮IIA ( tan IIA )、丹参酮IIB、隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参羟甲酯、二氢丹参酮I,以及异丹参酮I、异丹参酮II、异隐丹参酮、二氢异丹参酮I;后者主要为酚酸类化合物, 包括丹参素 (丹参酸甲 ), 原儿茶醛, 丹参酸乙、丹参酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等[ 1 ]。其中丹参酮IIA是脂溶性成分的代表, 集中分布在丹参根的皮部, 木质部的分布甚微或没有, 通过韧皮部纵向运输, 不能横向运输到木质部中去[ 2,]。本文就近年来国内外对丹参酮IIA的研究现状及药理作用以及临床应用作一综述,为丹参的进一步开发利用提供理论依据。 1、丹参酮 IIA 的提取 参酮IIA 的充分浸出提取是含量准确测定的前提,因此提取方法的研究对于丹参酮IIA的含量测定非常重要, 但是有关提取方法的系统研究报道尚不多见。现将主要的提取方法概括如下。 1.1 醇提法： 由于丹参酮IIA不溶于水,多用乙醇提取,包括乙醇渗滤法和回流法。①渗滤法: 黄琳
1碘的萃取
1．蒸馏法分离的实验探究 （1）实验原理：由于I2和CCl4沸点不同，加热其混合物，沸点低的CCl4先被蒸馏出来，从而达到分离的目的（从资料查得I2熔点：114℃，沸点184℃，而CCl4沸点77℃，沸点相差107℃，可以通过蒸馏的方法把CCl4蒸馏出去，从而与碘分离。不过蒸馏时，需要水浴加热，以便及时控制温度）。 （3）实验现象：80℃水浴片刻，烧瓶中出现紫色蒸汽，锥形瓶中也开始收集到浅紫红色溶液，最终烧瓶中残留少量的碘。 1）用NaOH浓溶液反萃取法，使I2转化成碘盐进行富集。I2和CCl4的溶液中的碘在碱性条件下会发生歧化反应，所以可以用较浓氢氧化钠溶液对I2和CCl4的溶液进行反萃取，使CCl4得到回收，I2与NaOH反应后，能以盐的形式富集。这一萃取进行得十分完全。反应为：3I2＋6NaOH==5NaI＋NaIO3＋3H2O；当NaI和NaIO3富集到相当量时，使体系变成酸性介质（如加入足量的H2SO4），使其中碘元素转变成I2单质得以回收。反应为：5NaI＋NaIO3＋3H2SO4==3Na2SO4＋3I2＋3H2O。 用固体NaOH代替NaOH溶液进行反萃取，在理论上和实践上都是可行的。查得NaOH 固体的密度为2.1g/cm3，它与I2反应的产物NaI的密度为3.7g/cm3，NaIO3的密度为4.3 g/cm3，都大于CCl4的密度。而CCl4的密度为1.59g/cm3，也远远大于I－及I2的密度。这样就构成一个三相体系，即固体NaOH（及反应生成的NaI、NaIO3）在最下层，CCl4在中层，最上层为含I2的水层。当上面的水层中含有的I2时，两步萃取可以同时进行。即水层的I2进入中层的CCl4层，中层的CCl4层里的I2又与下层的NaOH反应。I2在水层和CCl4层中不再有分配平衡，加快了萃取的进度，自发生成的I2最终会转移到固体中去。将上层的水和中层的CCl4倾倒在分液漏斗中进行分液，得以回收CCl4；而下层的固体放入蒸发皿中，并滴入适量的稀H2SO4利用图2的装置进行加热处理即可得到碘。 （2）过氧化氢法。从资料上查得，碘可与过氧化氢和碳酸氢钠混合液发生反应： I2＋H2O2＋2NaHCO3 = 2NaI＋CO2↑＋O2↑ 实验1：取10mL学生实验后的碘的CCl4萃取液于大试管中，先加入20滴饱和NaHCO3，后加入30%的H2O2溶液，液体只是分层，没有其他现象。振荡后紫色逐渐变浅，并有大量气体产生，静置后CCl4仍有气泡产生。弃去上层清液，继续加入10滴饱和NaHCO3和10滴H2O2溶液振荡，颜色全部褪去。移入分液漏斗进行分液，得到纯净的CCl4，而碘转化为NaI富集。 三结果讨论 1．采用常压蒸馏方法不能很好分离碘和四氯化碳 80℃水浴片刻，烧瓶中出现紫色蒸汽，锥形瓶中也开始收集到紫色的液体。最终烧瓶中残留少量的碘，大部分的碘和四氯化碳一同被蒸出。通过对比实验，证明将碘置于烧瓶中，水浴加热到50℃时，烧瓶中已有少量的紫色蒸汽，当水浴加热到77℃时，烧瓶中已有很多紫色蒸汽。由此说明碘在77℃时较多地升华，所以在四氯化碳的沸点时，大部分的碘随着四氯化碳一起蒸出，说明常压蒸馏不能分离碘和四氯化碳。 2．减压蒸馏可以分离碘和四氯化碳 将碘和四氯化碳的混合液（2g碘溶于30mL四氯化碳中），在室温下，压力在10～15mmHg，进行减压蒸馏，约8分钟就将碘和四氯化碳分离开来。 综上所述，用蒸馏的方法来提取碘是不可采用的方法，常压蒸馏不能分离，减压蒸馏可以分离，但通常在实验室不方便操作。因此，采用化学方法（NaOH浓溶液反萃取法；过氧化氢法）来分离碘和四氯化碳具有一定的可行性。 参考文献 ［1］唐敏.碘和四氯化碳的分离实验探究［J］.化学教学，2010
四氯化碳
四氯化碳 无色、易挥发、不易燃的液体。具氯仿的微甜气味。分子量153.84，密度1.595g/cm3(20/4℃)，沸点76.8℃，蒸气压15.26kPa(25℃)，蒸气密度5.3g/L。微溶于水，可与乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。遇火或炽热物可分解为二氧化碳、氯化氢、光气和氯气等。 目录 1理化性质 物理性质 化学性质 2作用与用途 3使用注意事项 危险性概述 急救措施 消防措施 泄漏应急处理 操作处置与储存 毒理学资料 4制备 5上游原料 6安全信息 危险品标志 安全术语 风险术语 7物质毒性 数据分析 1理化性质 物理性质 外观与性状：无色透明挥发液体，具有特殊的芳香气味。味甜。 CAS号： 56-23-5[1] 熔点(℃)：-22.6 相对密度（水=1）：1.60 沸点(℃)：76.8 相对蒸气密度（空气=1）：5.3 分子式：CCl4 分子量：153.84 饱和蒸气压(kPa)：13.33(23℃) 燃烧热(kJ/mol)：364.9 折射率 1.459-1.46 临界温度(℃)：283.2 临界压力(MPa)：4.558 水溶性： 0.8g/L (20℃)[2] 辛醇/水分配系数的对数值：2.6 20℃时与水的界面张力(mN/m)：45.0 溶解性：微溶于水，易溶于多数有机溶剂。[3] 化学性质
化学性质稳定。有愉快的气味。有毒。不燃烧。高温下可水解生成光气；还原可得氯仿。[4] 2作用与用途 曾广泛用作溶剂、灭火剂、有机物的氯化剂、香料的浸出剂、纤维的脱脂剂、粮食的蒸煮剂、药物的萃取剂、有机溶剂、织物的干洗剂，但是由于毒性的关系现在甚少使用并被限制生产[5]，很多用途也被二氯甲烷等所替代。也可用来合成氟里昂、尼龙7、尼龙9的单体；还可制三氯甲烷和药物；金属切削中用作润滑剂。[6] 3使用注意事项 危险性概述 健康危害：高浓度该品蒸气对粘膜有轻度刺激作用，对中枢神经系统有麻醉作用，对肝、肾有严重损害。急性中毒：吸入较高浓度该品蒸气，最初出现眼及上呼吸道刺激症状。随后可出现中枢神经系统抑制和胃肠道症状。较严重病例数小时或数天后出现中毒性肝肾损伤。重者甚至发生肝坏死、肝昏迷或急性肾功能衰竭。吸入极高浓度可迅速出现昏迷、抽搐，可因室颤和呼吸中枢麻痹而猝死。口服中毒肝肾损害明显。少数病例发生周围神经炎、眼球后视神经炎。皮肤直接接触可致损害。慢性中毒：神经衰弱综合征、肝肾损害、皮炎。 燃爆危险：该品不燃，有毒。[3] 急救措施 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。就医。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。洗胃。就医。[3] 消防措施 危险特性：该品不会燃烧，但遇明火或高温易产生剧毒的光气和氯化氢烟雾。在潮湿的空气中逐渐分解成光气和氯化氢。 有害燃烧产物：光气、氯化物。 灭火方法：消防人员必须佩戴过滤式防毒面具（全面罩）或隔离式呼吸器、穿全身防火防毒服，在上风向灭火。 灭火剂：雾状水、二氧化碳、砂土。[3] 泄漏应急处理 应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防毒服。不要直接接触泄漏物。尽可能切断泄漏源。 小量泄漏：用活性炭或其它惰性材料吸收。 大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。喷雾状水冷却和稀释蒸汽，保护现场人员，但不要对泄漏点直接喷水。用泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。[3] 操作处置与储存 操作注意事项：密闭操作，加强通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴直接式防毒面具（半面罩），戴安全护目境，穿防毒物渗透工作服，戴防化学品手套。防止蒸气泄漏到工作场所空气中。避免与氧化剂、活性金属粉末接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 储存注意事项：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不超过30℃，相对湿度不超过80%。保持容器密封。应与氧化剂、活性金属粉末、食用化学品分开存放，切忌混储。储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。[3] 毒理学资料 急性毒性：LD502350mg/kg（大鼠经口）；5070mg/kg（大鼠经皮）；LC5050400mg/m?，4小时
肝纤维化机制
一：我的建议是在肝纤维化的检测和发展过程中引入星状细胞作为一个评价标准。 1..现在研究肝纤维化的中心很多都是放在肝星状细胞这一块。它是引起肝纤维化的主要细胞，它激活变成纤维母细胞然后分泌细胞外基质，促使纤维化发生。 2.星状细胞的激活标志是视黄醇(维生素A）的有无（有：未激活；无：激活）。 3.我们本来就打算做切片，所以不会增加额外的费用。还是HE染色？正常情况下能看到视黄醇的脂滴吗要确定切片需要观察的内容，以及可能出现的现象 4.假如松弛素有去纤维化的作用那么可以使含有视黄醇的星状细胞数目增多。（对比每周制成的切片，希望可以建立一个动态的视黄醇含量的分析过程）具体方法可以在完善以下文献资料： 肝纤维化是病毒性肝炎等各种慢性肝病向肝硬化乃至肝癌发展的必经途径和必然阶段，而肝星状细胞（HSC）的激活则是肝纤维化形成的中心环节，但其分子机制及其调控基因尚不十分清楚。就此，朱丽影教授开展了血小板衍生生长因子调节人肝星状细胞基因的研究，应用抑制性消减杂交和基因芯片两项分子生物学技术，筛选PDGF刺激人HSC前后表达有变化的基因，旨在从基因水平深入探讨肝纤维化形成的分子生物学“奥秘”，为临床确立抗肝纤维化新的治疗靶点提供新认识。 课题组利用抑制性消减杂交技术，成功筛选出13个上调表达的HSC基因，同时利用基因芯片技术，筛选出2个上调和11个下调表达的HSC基因。这些差异表达基因，涉及细胞分化、细胞信号传导、细胞结构、细胞成分、细胞周期、细胞凋亡、免疫调节、能量代谢等生物过程，揭示了PDGF参与肝纤维化的发生机制是以上多因素、多水平调控的结果。研究结果显示，在上调基因中，最具代表性的蛋白是层粘连蛋白B1。在下调基因中，最重要的蛋白是激酶MEKK。 肝星状细胞激活的分子机制与抗肝纤维化治疗 肝纤维化发生机制的研究进展陈乃玲贾克明2004-8-2 17:15:32 中华内科杂志1999年2月第38卷第2期 作者单位：100700北京军区总医院、解放军肝病研究所 一、肝纤维化时肝内的三个基本现象 肝炎后肝纤维化的病因一般认为是肝细胞坏死及凋亡所引起的，是组织坏死、凋亡时血流中血小板释放对纤维化有促进作用的因子———血小板衍生生长因子（platetetderivedgrowthfactor，pDGF）所致。然而在其他组织损伤时血流中也出现pDGF，却未见肝发生纤维化，说明pDGF可能不是肝纤维化的主要原因。肝脏发生纤维化时有三个基本现象值得重视：（1）肝细胞外基质的增加；（2）星状细胞转变为肌纤维母细胞；（3）
丹参酮IIA的研究进展
丹参酮IIA的研究进展 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：李玉萍，顾兵，刘建涛，熊向源，周春丽，吴光杰【摘要】丹参是一种中国传统草药，丹参酮IIA是丹参的主要活性成分之一，是发挥药理活性的基础。该文章就近5年来国内外有关丹参酮IIA的提取、含量测定和生物活性的研究成果进行综述，为全面开发利用丹参提供参考。 【关键词】丹参酮IIA; 提取; 测定; 药理作用 丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，主产于河北、安徽、江苏、四川等地。其化学成分分为脂溶性和水溶性两部分，前者以丹参酮型的二萜类化合物为主，主要有丹参酮I、丹参酮IIA(tanshinone IIA )、丹参酮IIB、隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参羟甲酯、二氢丹参酮I，以及异丹参酮I、异丹参酮II、异隐丹参酮、二氢异丹参酮I;后者主要为酚酸类化合物，包括丹参素(丹参酸甲)，原儿茶醛，丹参酸乙、丹参酸丙、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等[1]。其中丹参酮IIA是脂溶性成分的代表，集中分布在丹参根的皮部，木质部的分布甚微或没有，通过韧皮部纵向运输，不能横向运输到木质部中去[2,3]。本文就近年来国内外对丹参酮IIA
的研究现状作一综述，为丹参的进一步开发利用提供理论依据。 1 丹参酮IIA的理化性质 丹参酮IIA又称丹参醌II, 丹参醌IIA，为一种樱红色针状结晶，mp 209～210℃;不溶或微溶于水，易溶于二甲基亚砜 (25 mg/ml)、乙醇 (5 mg/ml) 、丙酮、乙醚和苯等有机溶剂;丹参酮IIA乙醇溶液和水溶液随温度升高稳定性下降，其标准品稳定易得[4];丹参酮IIA 含有醌型结构，电子行为活跃，易被氧化还原，可参与机体的多种生化反应而有多种生物活性。其结构式见图1。图1 丹参酮IIA化学结构 2 丹参酮IIA的提取 丹参酮IIA的充分浸出提取是含量准确测定的前提，因此提取方法的研究对于丹参酮IIA的含量测定非常重要，但是有关提取方法的系统研究报道尚不多见。现将主要的提取方法概括如下。 2.1 醇提法由于丹参酮IIA不溶于水，多用乙醇提取，包括乙醇渗滤法和回流法。①渗滤法：黄琳等[5]采用正交实验考察了4因素(乙醇浓度、浸泡时间、提取时间和温度)对丹参酮IIA提取率的影响，提取温度、浸泡时间、提取时间、醇浓度(70%～90%)和乙醇用量对提取率均有影响。使用高浓度(90%)的醇溶剂、加温(80～87℃)、浸泡时间延长(6 h)可相应缩短提取时间(2 h)，可获得丹参酮IIA 4.451 0 mg/g。但因丹参脂溶性成分对热不稳定，醇提后处理工序(贮放、回收乙醇、浓缩、干燥)是丹参酮IIA热降解损失的主要工序，因此加热时间范围内应控制在2～4 h[6]。②回流法：于纯淼等[7]采用
碘在水和四氯化碳中分配系数的测定
实验9 碘和碘离子反应平衡常数的测定 一、实验目的及要求 1、测定碘和碘离子反应的平衡常数。 2、测定碘在四氯化碳和水中的分配系数。 3、了解温度对分配系数及平衡常数的影响 二、实验原理 碘溶于碘化物（如KI ）溶液中，主要生成I3-，形成下列平衡： KI +I 2 KI3 即 I2 +I - I-3 （7－1） 其平衡常数K （7－2） 式中a 、 (7－3) 由于在一定温度下达到平衡时，碘在四氯化碳层中的浓度和在水溶液中的浓度炎比为一常数Kd ，称为分 配系数。 （7－4） 因此，当测定了碘在四氯化碳层中的浓 度后，可通过预先测定的分配系数求出I2在KI 溶液中的浓度。即 （7－5） 而分配系数Kd 可借助于I2在CCl4和纯水中的分配来测定。 （7－6） 再分析测定KI 溶液中的总碘量 由于形成一个I3-要消耗一个I-，所以平衡时I-的浓度为： 三、仪器和药品 恒温水浴 1套 量筒100ml 、25ml 各1个 碱式滴定管25ml 1个 微量滴定管1个 移液管25ml 1支 5ml 2支 锥形瓶250ml 4支； 碘量瓶 2个 0.04mol·l-1 I2（CCl4）溶液； 0.02% I2 的水溶液； 0.0250 mol·l-1 Na2S2O3标准液； 0.5%淀粉指示剂，KI 固体。 四、实验步骤 1、控制恒温水温度约比室温高10℃，槽温误差为±0.05℃。 ()() - -+3 232I I I I c KI C c KI C 即得溶液减去溶液-- --=30I I I c c c
3、将配好的系统均匀振荡，然后置于恒温槽中恒温1小时，恒温期间应经常振荡，每个样品至少要振荡五次，如要取出水槽外振荡，每次不要超过半分钟，以免温度改变，影响结果。最后一次振荡后，须将附在水层表面的CCl4振荡下去，得两液层充分分离后，才能吸取样品进行分析。 4、在各号样品瓶中，准确吸取258ml 水溶液层样品二份，用标准Na2S2O3溶液滴定（其中1号水层用微量滴定管，2号水层用25ml 碱式滴定管），滴至淡黄色时加数滴淀粉指示剂，此时溶液呈蓝色， 继续用Na2S2O3溶液滴至蓝色刚消失. 在各号样品瓶中准确吸取5ml CCl4层样品二份（为了不让水层样品进入移液管，必须用一指头塞紧移液管上端口，直插入CCl4层中或者边向移液管吹气边通过水层插入CCl4层），放入盛有10ml 蒸馏水的锥形瓶中，加入少许固体KI ，以保证CCl4层中的I2完全提取到水层中，（充分振荡）同样用Na2S2O3标准液滴定，（1是CCl4层样品用25ml 滴定管，2号用微量滴定管）。 五、数据记录及处理 1、数据记录 将消耗Na2S2O3溶液的量列表： (1)由1号样品的数据按（7－6）式计算分配系数Kd 。 (2)由2号样品的数据计算CI2、CI3-、CI-及K 。 六、实验注意事项 1、本实验玻璃仪器要洁净干燥，移液要准确，尤其CCl4溶液较重，更要严格掌握，以免影响结果。 2、摇动锥形瓶加速平衡时，勿将溶液荡出瓶外，摇后可开塞放气，再盖严。 3、滴定终点的掌握是分析准确的关键之一，在分析水层时，用Na2S2O3滴至溶液呈淡黄色。再加入淀粉指示剂，至浅蓝色刚刚消退至无色即为终点。在分析CCl4层时，由于I2在CCl4层中不易进行H2O 层，须充分摇动且不能过早加入淀粉指示剂，终点必须以CCl4层不再有浅蓝色为准。 七、讨论 (1)由1号样品计算分配系数，实际上可按下式直接计算 式中V(CCl4)、V(H2O)分别为滴定5mlCCl4层样品及25ml (2)碘溶于碘化物溶液中时，还形成少量的I7-等离子，但因量少，实验可忽略不计。 (3)测分配系数Kd 时，为了使系统较快达到平衡，水中预先溶入超过平衡时的碘量（约0.02%），使水中的碘向CCl4层移动，达到平衡。
四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型_叶春华
·论著·四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型 叶春华 刘浔阳 (中南大学湘雅三医院普外科,湖南 长沙 410013) [摘要]【目的】探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加以评价,为下一步探索肝硬化门脉 高压症治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。【方法】90只雄性SD大鼠随机分为两组:实验组(70只)采用四 氯化碳(CCl4)+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导,诱导期间CCl4浓度在一定范围内逐步增加,并用食用白酒 替代医用乙醇溶液;对照组(20只)给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。同时采用一系列的检查方 法加以评估。【结果】实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡率12.86%。实验结束时,按照成模标准, 造模成功大鼠共61只,均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成,成模率87.14%。实验组门静脉压力比对 照组明显增高(P<0.05);血清总胆红素、谷丙转氨酶及谷草转氨酶较正常对照组明显升高(P<0.05),而 血清白蛋白较之正常对照组明显降低(P<0.05)。对照组20只全部存活。【结论】该方法可形成稳定的肝 硬化门脉高压症模型,可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。此模型制作周期短(仅需9周),成模率高, 死亡率低,具有简便、快捷、高效的优点,适于大批量制作。 [关键词] 肝硬化,实验性; 疾病模型,动物; 大鼠; 四氯化碳 Study on Method of Inducing Hepatic Cirrhosis Model in Rats by Carbon Tetrachloride Y E Chun-hua, LIU X un-yang(Department o f General Surgery,the T hird X iangy a Hosp ital,Central South University,Changsha,410013,China) [Abstract]【Objective】T o dev elo p and evalua te an ideal means to induce cir rhotic model in rats for nex t study o n live r cir rhosis with po r tal hypertension trea tment.【M ethods】N inety male SD rats we re randomly di- vided into two gr oups,T he e xperiment g roup(n=70)wa s treated with CCl4,PBS and ea table alcoho l and the co ncentra tion of CCl4and eatable alcohol were increased stage by stag e in a ce rtain range during the ex peri- ment.T he co nt rol g roup(n=20)wa s trea ted w ith common drinking w ater and animal feeds,the f requency and do se w ere the same a s the experime nt g ro up,meanwhile evalua ted by a se ries of check methods.【Results】 Af te r being induced w ith above means,the ra t mor tality of the ex periment gr oup w as12.86%,and the fo rma- tion rate of liver cir rhosis false lobe was87.14%.T he po rtal v eno us pressure of the e xperiment g roup w as higher than the co ntrol g ro up(<0.05),ST B,G PT,G O T we re higher than the co ntro l g roup,but SA B de- crea sed(P<0.05).T he contro l g r oup w as all surv iv al.【Co nclusio n】T he pro cedure is fair ly stable and relia- ble,the model is useful for resea rch in liv er cir rhosis w ith po rtal hy pe rtension.T he cy cle time of inducing cir- rhosis model is shor t the mor ta lity is low. [Key words] liver cir rho sis,ex pe rimental; disesase models,animal; rats; carbon tetr achloride [中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7171(2005)05-0619-04 由于病毒性肝炎、酒精性肝病等原因造成的慢性肝病和肝硬化患者有增多的趋势,近十年来有关门脉高压症的研究成为消化学界的热点。本实验通 [作者简介] 叶春华(1967-),男,湖南安乡人,博士,主治医师,主要从事肝胆外科临床工作。 [收稿日期] 2005-04-01过腹腔内注射四氯化碳(CCl4)加饮用苯巴比妥钠和食用酒精,探讨建立一种理想的肝硬化模型的方法。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 90只Sprag ue-Daw ley鼠(简称SD大鼠),全部雄性,体重180～220g,普通大鼠饲
实验室常见废弃物的处理.
实验室常见废弃物的处理 尽管实验室废物数量不大,但种类较多且很复杂,仍须经过必要的处理方能排放。目前我国仅有少数实验有“三废”处理设施。随着人们环境意识的增强,今后实验室必须加强对实验室“三废”的处理。以下收集和介绍一些实验室常见废弃物的处理方法,供大家在实际工作中的参考。 1 实验室废弃物处理的一般原则 根据实验室废弃物的特点,应做到分类收集、存放,集中处理。处理方法应简单易操作,处理效率高,不需要很多投资。 少量的有毒气可通过通风设备排出室外,通风管道应有一定高度,使排出的气体空气稀释。产生的毒气量大时必须经过吸收处理,然后才能排出,如氮、硫、磷等酸性氧化物气体,可用导管通入碱液中,使其被吸收后排出。 对于某些数量较少,浓度较高的有毒有机物可于燃烧炉中供给充分的氧气使其完全燃烧,生成二氧化碳和水。对高浓度废酸、废碱液要经中和至近中性时排放。对于含有少量被测物和其它试剂的高浓度有机溶剂废液应回收再用。 用于回收的废液应分别用洁净的容器盛装,同类废液中浓度高的应集中贮存,以便于回收某些组分,浓度低的经适当处理达标即可排出。 根据废弃物的性质选择合适的容器和存放点。废液应 用密闭容器贮存,禁止混合贮存,以免发生剧烈化学反应而造成事故。容器应防渗漏,防止挥发性气体逸出而污染实验室环境。 剧毒、易燃、易爆药品的废液,其贮存应按相应规定执行。废液应避光,远离热源,以免加速废液的化学反应。贮存容器必须贴上标签,标明种类,贮存时间等,贮存时间不宜太长。 2 实验室废弃物处理方法
实验室含汞、铬、铅、镉、砷、酚、氰废液必须经处理达标才能排放,对实验室内少量废液的处理可参照以下方法进行。 2.1 含汞废弃物的处理 如不小心将汞散失在实验室里,如打碎压力计、温度表或极谱分析操作失误,将汞撒落在实验室地面、工作台上等,必须及时清除,如用滴管,毛笔或用在硝酸汞的酸性溶液中浸过的薄铜片、粗铜丝收集于烧杯中,用水覆盖。落于地面等难以收集的微小汞珠,应尽快撒上硫磺粉,使其化合成毒性较小的硫化汞后清除干净;或喷上用盐酸酸化过的1%高锰酸钾溶液(每升高锰酸钾溶液中加5ml浓盐酸,过1—2小时后再清除;或喷上20%三氯化铁的水溶液,干后再清除干净。特别应当撒出的是三氯化铁水溶液是对汞具有乳化性能并同时可将汞转化为不溶性化合物的一种非常好的去汞剂。 但金属器件(铅除外不能用三氯化铁除汞,因金属本身会受三氯化铁溶液的作用而损坏。 如果室内汞蒸汽浓度超过0.01mg/m3,可用碘净化,即将碘加热或自然升华,碘蒸汽与空气中的汞及吸附在墙壁上、地面上、天花板上及器物上的汞作用生成不易挥发的碘化汞,然后彻底清扫干净。实验中产生的含汞废气可用导管通入高锰酸钾吸收液内,经吸收后排出。 含汞废液可先调pH值至8—10,加入过量硫化钠,使其生成硫化汞沉淀,再加入硫酸亚铁作为共沉淀剂,生成的硫化铁沉淀将悬浮在水中被难以沉降的硫化汞微粒吸附而共沉淀,然后静置,分离或经离心过滤,、清液可排放,残渣可用焙烧法回收汞或制成汞盐。汞及其无机化合物最高允许排放浓度:0.05mg/L。 2.2 含铅、镉废液的处理 镉在pH高的溶液中能沉淀下来。对含铅废液的处理通常也采用混凝沉淀法、中和沉淀法。因此可向废液中加碱或石灰乳,将废液的pH值调到8~10,使废液中的
单质碘在不同溶剂中为什么颜色不同
1.单质碘在不同溶剂中为什么颜色不同？ 碘在不同溶剂中所形成溶液的颜色随相剂不同而有区别。 碘仅微溶于水，得到黄色到棕色溶液。碘易溶于有机溶剂中。如不饱和烃、液态二氧化硫、醇、酮、醚、酯和苯等溶剂中为棕色或棕红色；碘在链烃、二硫化碳、四氯化碳溶剂中呈紫色。 碘在试管中加热，得到碘蒸气是紫色的。说明碘以分子状态存在为紫色。碘在不同溶剂中显不同的颜色是由于碘的溶剂化不同。碘在非极性溶剂中，如四氯化碳中碘不发生溶剂化，溶解的碘以分子状态存在，故溶液颜色与碘蒸气颜色相同。用光谱仪试验碘溶液的颜色，紫色溶液的可见光谱在5200～5400×10－10米区域内、这是跟碘蒸气中碘分子的光谱是一致的。也说明在紫色溶液中，碘以碘分子状态存在。碘在乙醇、乙醚、水等溶剂中呈黄色、棕色或红棕色。这是因为乙醇、乙醚等溶剂能够给出电子，通常叫供体溶剂。当碘溶解时，跟这类溶剂结合，通常形成的是1：1的电荷迁移配合物，即I2……S(S代表溶 剂），这个名字是来自其相互作用的本质，即这种相互作用是电荷迁移形式，这种配合物的光谱接近于可见光，电子跃迁过程相应于一个电子由溶剂分子配（体）迁移到I2上去，它的频率随配体溶剂分子的电离能的降低而降低，因此所显的颜色随溶剂的不同而不同。(back to top) 2.卤素与水反应的情况有什么不同？ 卤素单质较难溶于水，卤素与水可能发生以下两类反应： （1）X2 + H2O = 2HX + 1/2 O2↑ （2）X2 + H2O = HX + HXO↑（X= F、Cl、Br、I） 在反应（1）中卤素作为氧化剂，水作为还原剂组成了一个氧化还原反应。该反应是由下面两个半反应组成的： X2 + 2e = 2X ① O2 + 4H + 4e = 2H2O ② 卤素与水反应的pH电势图：
肝纤维化形成机制的研究进展
肝纤维化形成机制的研究进展 丁 宁 (沈阳市传染病院,辽宁沈阳110006) 收稿日期:2008-05-12 修订日期:2008-06-03 作者简介:丁宁(1976-),女,主治医师,硕士,从事感染科工作。 【中图分类号】R57512 【文献标识码】A 【文章编号】1001-5256(2009)01-0073-05 肝纤维化(Hepatic fibr osis )是指肝脏纤维结缔 组织的过度沉积,是细胞外基质合成和降解不平衡的结果,是各种慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径。目前认为肝纤维化的形成是由于各种损肝因子引起肝细胞损伤、坏死、凋亡及肝组织炎症反应,激活枯否细胞分泌多种细胞因子,与肝细胞、血小板及窦内皮细胞分泌的细胞因子、脂质过氧化物等化学递质,共同作用于肝星状细胞(HSC ),并激活转变为肌成纤维细胞发生表型及功能改变,通过旁分泌或自分泌机制,使肌成纤维细胞增殖,合成大量的胶原和蛋白多糖等细胞外基质(EC M )。在这一过程中细胞—细胞因子—基质之间相互作用,构成了复杂的网络系统,参与肝纤维化的发生及发展。1 细胞外基质111 正常肝脏的细胞外基质 正常肝内细胞外基质占肝湿重的015%。EC M 的组成包括胶原、非胶原性糖蛋白、蛋白多糖即细胞—基质黏附分子。11111 胶原 是细胞外基质最重要成分,目前已发 现人体共有19种基因序列不同的胶原蛋白,占人体蛋白总量的1/3。在肝脏含量较高的仅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型胶原,Ⅰ、Ⅲ型胶原各占33%,Ⅰ/Ⅲ型约为1,Ⅳ型胶原占1%。Ⅴ型占1%,Ⅵ型占011%-1%。 11112 非胶原糖蛋白 为EC M 的另一重要组分。 其分子中有多个功能区,可与其他EC M 及多种细胞膜的跨膜蛋白的受体结合,从而影响细胞的生长、分化、代谢等各种生物学行为。包括纤维连接蛋白、层连蛋白、Entactin (nidogen )、Tenascin (Hexabra 2chi on )、富含半胱氨酸的分泌性蛋白(SP ARC,Secre 2ted p r otein,acidic and rich in cysteine )血栓粘合素(Thr ombos pondin,TS -P )、玻璃体连接蛋白(V itr on 2ectin )。 11113 蛋白多糖(Pr oteoglycan,PG ) 由蛋白质作 为骨架,侧链为糖胺多糖(Glycosa m ino glycan, G AG ),依侧链不同可分为硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、透明质酸、无蛋白核心也属这一类,PG 中的G AG 是肝脏EC M 中的重要成分。正常肝脏每克去脂干重含水量(100-200)μg,其中HS 占(60-80)%,CS 占(1-15)%,PS 占(2-30)%,HA 占(115-15)%。11114 细胞-基质黏附分子 广义的EC M 还包括细胞-基质黏附分子,细胞和细胞外基质成分之间的分子相互作用就是通过特定的质膜蛋白(即各种黏附分子)来实现的。黏附分子主要包括整合素家族和CD 44蛋白家族。112 肝纤维化时细胞外基质 肝纤维化时,EC M 的量和质均发生显著改变。量的改变表现为肝内过量胶原形成及沉着,是3个因素综合作用的结果:11新的胶原合成增加,是由于单个细胞胶原合成能力增加或者合成胶原的数量增加;21已经形成的纤维凝集增加;31胶原降解减少,缘于基质金属蛋白酶(MMP )以及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TI M P )表达改变。肝损伤早期MMP 一过性增加,且主要为MMP -2增加,降解基底膜,破坏正常基底膜结构,进一步促进HSC 活化,但随纤维化的进展MMP 下降,伴随TI M Ps 的表达上调,致TI M Ps/MMP 比值增加,胶原降解减少,结果总体EC M 增加(3-8)倍。 EC M 质的改变主要表现为EC M 在局部重建或 重新分布。早期主要沉积在D isse 腔内皮下,纤维 连接蛋白超过Ⅰ、Ⅳ型胶原及层粘蛋白,随后内皮下形成连续的基底膜,内皮窗孔消失,即肝窦毛细血管化,至晚期正常含非纤维形成胶原的低密度基底膜胶原(Ⅳ、Ⅵ型)转化为富含纤维形成胶原的高密度间质胶原(Ⅰ、Ⅲ型),E MC 亚群比例失调,不溶性Ⅰ型胶原显著增加取代Ⅲ型胶原而成为肝内主要胶原。 EC M 质和量的改变反过来又可激活静止状态 的HSC,进一步加重EC M 沉积,形成恶性循环。2 肝星状细胞是肝纤维化中EC M 的主要细胞来源 肝星状细胞位于肝细胞与肝窦内皮细胞(SEC )