高效液相色谱仪校验方案

方案审批：
江苏阿尔法药业有限公司
Jiangsu Alpha Pharmaceutical Co., Ltd.
目录
1. 目的
2. 确认人员及职责
3. 确认前确认
4. 确认依据及判定标准
5. 确认内容
6. 再确认要求
7. 确认结果汇总
8. 结果评价
1. 目的
明确稳定性试验箱的校验项目、校验条件、校验方法、接受标准、校验周期等，便于检验人员按规程进行稳定性试验箱的校验操作。

保证实验室使用的称量点称量的准确性。

2．确认人员及职责
QC分析人员：负责起草确认方案和报告、组织协调开展确认；QC主管：审核确认报告和报告；
质量部长：批准确认报告和报告。

3. 确认前确认
检测人：日期：年月日
复核人：日期：年月日
4. 确认依据及判断标准
4.1 确认依据
4.1.1《LC-2040C型高效液相色谱仪安装使用说明》
4.1.2《液相色谱仪校验规程》JJG 705-2014
4.1.3《中国药典》2010年版二部附录
4.1.4《药品GMP指南》2010年版
4.2 评判标准
4.2.1性能确认(PQ)
5. 确认内容
5.1性能确认(PQ)
5.1.1 输液系统确认
5.1.1.1泵耐压：
仪器连接完好后，以100%甲醇为流动相，流速0.2ml/min.启动仪器，待压力平稳后，观察10分钟，应无漏液现象。

卸下色谱柱，堵住泵出口（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保存5分钟，应无漏液现象。

5.1.1.2泵流量设定值误差S S、稳定性误差S R：
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算S S、S R
Fm=(W 2-W 1)/(ρ•t)
S s =(—
F m -F s )/F s ×100% 式（1）
S R =(F max -F min )/ —
F m ×100% 式（2）
式中：Fm —— 实测流速；
W 2 —— 容量瓶+流动相的质量，g ； W 1 —— 容量瓶的质量，g ；
ρ—— 试验温度下流动相的密度，g/mL ； t —— 收集流动相的时间，min ； —
Fm —— 同一组测量的算术平均值，mL/min ； FS —— 流量设定值，mL/min ；
Fmax — 同一组测量中流量最大值，mL/min ； Fmin — 同一组测量中流量最小值，mL/min 。

5.1.1.3 梯度误差G i ：
色谱条件：
色谱柱：限流阻尼管 流速：2.0ml/min 检测波长：265nm 流动相A ：纯化水 流动相B ：0.1%丙酮水溶液
以流动相A 平衡系统，按表2梯度程序测试2次，记录色谱图。

画出B 溶剂经5段阶梯从0%到100%B 梯度变化曲线（如图1），求出由B 溶剂变化所产生的每一段阶梯对应的响应信号的变化值L i ；按下列公式（1）计算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均值i L ；按下列公式（2）计算五段阶梯对应的响应信号值的总平均值i L ；按下列公式（3）计算每一段阶梯的误差G i ，取G i 的最大值作为仪器梯度误差报告。

表2 梯度程序
图1 梯度组成准确度示意图
i L =
2
)
()()1(22)1(11---+-i i i i L L L L 公式（1）
i L =
n
L
n
i i
∑=1
公式（2）
3）
式中：
i L ————第i 段阶梯响应信号值的平均值； L 1i ————第i 段阶梯第1组响应信号值；
L 1（i-1）—— 第（i-1）段阶梯第1组响应信号值； L 2i ————第i 段阶梯第2组响应信号值；
L 2（i-1）—— 第（i-1）段阶梯第2组响应信号值； i L ———— 5段阶梯响应信号值的总平均值； G i ————第i 段阶梯的梯度误差
表3
5.1.2 柱温箱系统确
认
依次设定柱温箱温度为25℃，35℃，45℃值进行校验，这些温度应覆盖实验室使用的柱温范围,当使用柱温超出该范围时，需要增加该温度点校验。

设定待校验温度，待测温仪显示的温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟记录一次，每个温度点记录7次。

求出平均值，设定值与平均值之差为设定值误差△T ，7次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc 。

表4
5.1.3 检测器系统确认
5.1.3.1基线漂移和基线噪声：
色谱条件：
色谱柱：C18柱流速：1.0ml/min 检测波长：254nm 流动相：甲醇
在分析界面中点击基线检查，设置参数后，点击运行，工作站会自动记录30分钟，运行完毕后，机器自动计算出结果，给出是否通过的结论。

将运行界面复制到Word文档中，打印出来即可。

其他型号站基线漂移和基线噪声的测试方法：按不同的仪器配置，设定检测器的灵敏度为最强灵敏度。

待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。

以图谱显示的刻度值，计算基线噪音和基线漂移值。

基线漂移：________________ < 5×10-4AU 基线噪声：________________ < 5×10-3AU/30min
5.1.3.2最小检测限：
按上述色谱条件，平衡系统。

取20µl 的1×10-7g/ml 萘/甲醇溶液进样，记录色谱图。

按下列公式计算最小检测限：
C L =H
cV N d 202
注：N d 与H 的单位应一致；分母中的20为进样体积，单位为µl 。

式中：
C L —— 最小检测浓度,g/ml ； N d —— 基线噪音高度；
c —— 标准溶液浓度,g/ml ； V —— 进样体积，µl ； H —— 标准溶液的峰高。

最小检测限（C L ）=H cV
N d 202=_______________________________
5.1.4整机性能确认
5.1.4.1定性与定量重复性：
色谱条件：
色谱柱：C18柱 流速：1.0ml/min 检测波长：254nm 流动相：甲醇
取1×10-4g/ml 萘/甲醇标准溶液连续进样6次，记录色谱图，以萘峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD ，即为整机性能的定性与定量重复性。

表5
5.1.4.2进样针性能线性：
取1×10-4g/ml 萘/甲醇标准溶液，分别以5μl 、10μl 、15μl 、20μl 、30μl 的体积进样，记
录色谱图。

重复测定
3次。

以进样体积V i 为横坐标，以3次萘峰平均面积A i 为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R 。

5.1.4.3线性：
配置萘/甲醇标准溶液，使浓度分别为0.2×10-4g/ml、0.4×10-4g/ml、0.6×10-4g/ml、
0.8×10-4g/ml、1.0×10-4g/ml、1.2×10-4g/ml以20μl的体积进样，重复测定3次，记录
色谱图。

以进样体积V i为横坐标，以3次萘峰平均面积A i为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。

6.再确认要求
6.1再验证周期
6.1.1 设备大修后需再校验。

6.1.2 由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。

6.1.3 高效液相色谱仪的验证周期为12个月，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。

6.2 再验证内容
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

7. 确认结果汇总
7.1性能确认(PQ)
8. 结果评价
起草人/日期：
QC审核人/日期：
QA审核人/日期：。