枯草杆菌生物兴趣小组描述

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1号培养基: 3g木屑, 0.4 g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 2号培养基: 3g稻草, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 3号培养基: 3g玉米芯, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。 4号培养基: 3g糠壳, 0.4g葡萄糖, 0.2g蛋白胨, 0.2g酵母膏, 0.2g CaCO3 ,0.1g KH2PO4 ,16mL水。
2.枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中 的游离氧,造成肠道低氧,促 进有益厌氧菌生长,并产生乳 酸等有机酸类,降低肠道PH值, 间接抑制其它致病菌生长
研究证明,枯草芽孢杆菌的活菌制剂可以作为口服液用 于治疗肠炎、支气管炎和腹泻等多种疾病,也用来预防 和治疗烧伤面的感染。最近,科学家发现从枯草芽孢杆 菌提取到的淀粉酶、纤维素酶能够补充体内消化酶的不 足,恢复正常消化机能;蛋白酶能够分解发炎部位纤维 蛋白的凝结物,消除伤口周围的坏疽、腐肉和碎屑。日 本人日常生活中食用的纳豆就是利用枯草芽孢杆菌生产 的,研究表明,纳豆中含有的溶栓酶(纳豆激酶)对心血管 疾病有很好的预防和治疗作用;而同样由枯草芽孢杆菌 合成的聚谷氨酸可用作药物缓释材料和医用高分子纤维 材料等。
含有两种活菌—枯草杆菌和肠球菌, 可直接补充正常生理菌丛,抑制致 病菌,促进营养物质的消化、吸收, 抑制肠源性毒素的产生和吸收,达 到调整肠道内菌群失调的目的。本 品还有婴幼儿生长发育所必须的多 种维生素、微量元素及矿物质钙, 可补充因消化不良或腹泻所致的缺 乏。
3.刺激动物免疫器官的生 长发育,激活T、B淋巴细 胞,提高免疫球蛋白和抗 体水平,增强细胞免疫和 体液免疫功能,提高群体 免疫力
英文名称:Combined Bacillus Subtilis and EnteroFra Baidu bibliotekoccus Faecium Granules with Multivitamines,Live 是否处方药:非处方药 剂型:颗粒 药品类型:生物制品 通用名称:枯草杆菌二联活菌颗粒 化学成分 :每袋(1克)含活菌冻干粉37.5毫克, 内有活菌1.5亿个。
枯草杆菌
——对消化有重要作用的细菌
高一(10)班
李阳、李佩烨、项洁莹、郑铭琳
目录
1、认识枯草杆菌
2、革兰氏染色法
3、枯草杆菌的培养
4、枯草杆菌的培养
认识枯草杆菌
枯草芽孢杆菌
(枯草杆菌一般指枯草芽孢杆菌)

枯草芽孢杆菌,是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7~0.8×2~3微米,着色均匀。无荚膜,周生鞭 毛,能运动。革兰氏阳性菌,芽孢0.6~0.9×1.0~ 1.5微米,椭圆到柱状,位于菌体中央或稍偏,芽孢 形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明,污白色 或微黄色,在液体培养基中生长时,常形成皱醭。 需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉,分解色氨 酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛,对此菌的 嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。 广泛分布在土壤及腐败的有机物中,易在枯草浸汁 中繁殖,故名。
1.2.3含水量对枯草芽孢杆菌生长的影响 麦麸与稻草的比例确定以后,即可得其含水量为67%,分别以 75%,71%,63%,59%,55%代替其含水量作为发酵培养基, 在其它成分和条件不变的情况下培养48h,检测各处理后的活菌数 和芽孢率,计算得其单位质量的干重的发酵培养基的芽孢数,以 确定最佳的含水量。
1.2.4稻草粗细程度对枯草芽孢杆菌生长的影响 分别以稻草粗细程度为<0.5mm,0.5~1.0mm,1.0~ 1.5mm,>1.5mm,混合样作为发酵培养基,其它组分不变,相 同发酵条件下培养48h,检测各的活菌数和芽孢率,以确定稻草 的最佳粗细程度。
1.2.5氮源对枯草芽孢杆菌生长的影响 在相等的N含量的条件下,分别用蛋白胨,酵母膏,豆饼粉,尿素,(NH) SO及不同组合作为N源,其它成分不变,相同条件下培养48h,检测活菌数和 芽孢率,以确定最佳N源。
水上形态 在枯草杆菌丰富的水体里,水的表面张 力比较大,可以在吹出来的泡泡的小圈 上形成一层膜。
枯草杆菌培养基
电镜图片 形态特征
革兰氏染色法
细菌介绍
芽孢具有厚而致密的壁,透性差,含水量低,折光性强,不易着色。在加 热条件下加入着色力强的染料,让芽孢、菌体与染料作用较长时间,使 芽孢染上颜色,再使菌体的颜色脱去;然后再用另一种与前者颜色不同 的对比度强的染料对菌体复染,使芽孢和菌体分别呈现出不同的颜色, 因而能更明显地衬托出芽孢,以便观察。 荚膜是一层覆盖在某些细菌细胞壁表面的粘性物质,主要成分是多糖 类。荚膜与染料的亲合力较差,不易着色。荚膜的通透性好,某些染 料可透过荚膜而使菌体着色。因此,常采用负染色法将菌体和背景着 色而荚膜不着色,因而荚膜在菌体周围呈一透明无色圈。
1.2.5碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响 确定N源后,在保持C含量不变的情况下,分别用葡萄糖,蔗糖,玉米粉, 玉米淀粉,大米粉作为C源制作发酵培养基,其它组分不变,相同条件下培 养48h,测定活菌数和芽孢率,确定最佳C源。 1.2.7碳氮比对枯草芽孢杆菌生长的影响 确定好碳源和氮源之后,改变碳源和氮源的比例,分别采用 0:1,1:3,1:2,1:1,2:1,3:1,4:1,5:1,7:1,1:0的C/N比(原 料质量比)配制发酵培养基,其它成分不变,在相同的条件下 培养48h, 检测发酵料中和活菌数和芽孢率,以确定最佳的C/N比。 1.2.8 pH对枯草芽孢杆菌生长的影响 改变发酵培养基中的pH值,分别以pH值为5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0, 8.5作为发酵培养基,其它成分不变,在相同的发酵条件下培养48h,检测 活菌数和芽孢率,得最佳pH。
4.枯草芽孢杆菌菌 体自身合成α-淀粉酶、 蛋白酶、脂肪酶、纤 维素酶等酶类,在消 化道中与动物体内的 消化酶类一同发挥作 用。
枯草芽孢杆菌在工业酶生产中的应用
枯草芽孢杆菌生境多样,可利用的营养物质种类十分丰富,这 决定了其自身含有丰富的产酶系统,具备生产多种酶的应用潜 力。研究资料表明,枯草芽孢杆菌能够产生蛋白酶、淀粉酶、 纤维素酶、葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶和木聚糖酶等十几种酶。 在过去的10年,利用基因工程技术,枯草芽孢杆菌几乎可以 在短期内大量生产任何种源的新酶,从而省略了大量的原始菌 种改造、驯化、毒理学实验等工作;利用蛋白质工程技术, 能够在生产新酶之前对该酶的性质进行改良和调整,从而改善 酶的活性或者赋予酶新的所需性质。这些新技术的应用使新酶 种的开发周期大大缩短,难度和成本降低,产品更加稳定有 效。
5.能合成维生素B1、 B2、B6、烟酸等多种B 族维生素,提高动物体 内干扰素和巨噬细胞的 活性。
枯草芽孢杆菌在水产养殖领域中的应用
枯草芽孢杆菌在水产养殖中的应用起步较晚,由于它能分泌蛋白酶等多 种酶类和抗生素,使池底积累的大量残余饵料、排泄废物、动植物残体 以及有害气体(氨、硫化氢等),使之先分解为小分子(多肽、高级脂肪酸 等),后分解为更小分子的有机物(氨基酸、低级脂肪酸、单糖、环烃等), 最终分解为二氧化碳、硝酸盐和硫酸盐等,从而有效地改善水质,同时 还能为以单细胞藻类为主的浮游植物提供营养物质,促进繁殖。这些浮 游植物的光合作用,又为池内底栖水产动物的呼吸、有机物的分解提供 氧气,从而使养殖水体形成一个良性的生态循环;另外,它们分泌的多 种酶类和抗生素可以抑制其他细菌的生长,进而减少甚至消灭水产养殖 动物的病原体。
芽孢率的检测方法:称量大概5g 发酵48h后的培养基溶解在50mL 无菌水中,200r/min,20min摇散 得10,再用5mL无菌吸管吸取 5mL到45mL无菌水中,摇匀得10, 依次这样稀释到10,取0.02mL滴 到载玻片上,涂匀,用酒精灯烘 干,然后用酚酞染色1min,用清 水冲洗,再用酒精灯烘干,镜检, 找几个清晰的画面,数画面中的 芽孢数和杆数,取其平均值,即 可得到其芽孢率。
细菌先经碱性染料结晶染 色,而经碘液媒染,在媒染 处理时,媒染剂与染料形 成不溶性化合物,可增加 染料和细菌的亲和力。
实验过程
1、 取载玻片用纱布擦干, 载玻片的一面用marker笔 画一个小圈(用来大致确 定菌液滴的位置)。涂菌 的部位在火焰上烤一下, 除去油脂。
2、 涂片: 液体培养基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰 附近5cm左右打开管盖;右手持接种环在火焰 中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环, 在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜, 最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水,再 用接种环取少量菌体,涂在载玻片上,使其薄 而均匀。 4、 固定:让菌 3、 晾干:让涂片 膜朝上,通过火 在空气中自然干燥。 焰2-3次固定 (以不烫手为 宜)。
1.2.1培养方法 先用接种环接种1环试 管菌种到牛肉膏蛋白胨 液体培养基中, 200r/min,37℃培养 24h,进行扩大培养和 活化,然后再取1mL液 体种接种到发酵培养基 中,37℃培养48h。
1.2.2检测方法
活菌的检测方法:称量大概5g 发酵48h后的培养基溶解在 50mL无菌水中,200r/min, 20min摇散得10,再用5mL无菌 吸管吸取5mL到45mL无菌水中, 摇匀得10,依次这样稀释到一 个适当的稀释度,取0.1mL稀释 液到无菌牛肉膏蛋白胨固体培 养基中并涂匀,37℃培养24h, 然后数培养皿上的菌落数[7]。
为了更好地探究枯 草杆菌繁殖的适宜 条件,对培养基进 行优化:
1.2培养基的优化 1.2.1培养方法 1.2.2检测方法 1.2.3含水量对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.4稻草粗细程度对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.5氮源对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.6碳源对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.7碳氮比对枯草芽孢杆菌生长的影响 1.2.8pH对枯草芽孢杆菌生长的影响
5、 染色:将固定过的涂 片放报纸上,滴加草酸铵 结晶紫液,染1min。
6、 水洗:用水 缓慢冲洗涂片上 的染色液,用吸 水纸吸干。简单 染色结束可观察 细胞形态。
8、 脱色:吸去残留水,连续滴加 95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫 色,立即水洗。
9、 复染:滴加蕃红复染35min,水洗。
至此,革兰氏染色结束。
枯草杆菌的应用
在生活中的应用
……
1.枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生 的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、 短杆菌肽等活性物质,这些活性物质 对致病菌或内源性感染的条件致病菌 有明显的抑制作用
枯草芽孢杆菌在生物防治领域中的应用
枯草芽孢杆菌作为植物病害生防细菌之一,具 有较强的防病作用。美国用枯草芽孢杆菌 QST713菌株开发出活菌制剂杀菌剂 SerenadeTM,用于防治多种作物的白粉病、 霜露病、疫病、灰霉病等病害,用于防治叶部 病害(灰霉病、白粉病)和根部病害(枯萎病、根 腐病、黑斑病等),用于防治番茄晚疫病、灰 霉病和小麦白粉病,还可作为增产促进剂。澳 大利亚开发的B.subtilis A-B对麦类和胡萝卜立 枯病等具有很好的防治和增产作用。
细菌鞭毛非常纤细,直径10-20nm,只能在电子显微镜下才能观察到。但采 用特殊的染色法在光学显微镜下也能见到。其原理是:在染色前先用媒染剂 处理,使媒染剂沉积在鞭毛上,将鞭毛加粗,然后再进行染色,便能在油镜 下看见鞭毛的形状和着生方式。
原理


基本原理 革兰氏染色法是一种鉴别性的染色方法。结果细胞保留 初染剂篮紫色的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞为复染剂的 颜色(红色),则为革兰氏阴性菌。其机理是由于细菌细胞 壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。 细菌的革兰氏染色受菌龄、培养基pH值和染色技术等因 素的影响,并非固定不变。
三、器具材料
1.器材:显微镜、擦镜纸、二甲苯、香柏油、接种环、酒
精灯、火柴、吸水纸、载破片、盖玻片。 2.染色液及试剂: 结晶紫染色液、路戈氏碘液、 95%的酒 精、番红染 色液、蒸馏水。 碱性复红染色液、5%孔雀绿染色液。 3.菌种;培养18小时至20小时的枯草芽孢杆菌、苏云金杆 菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种。 培养24小时至36小时的枯草杆菌或苏云金杆菌、 巨大芽孢杆菌。
观察荚膜和鞭毛标本片
荚膜 周生
一端生一束
1.1培养基

牛肉膏蛋白胨液体培养基:5g牛肉膏,10g蛋白胨,5gNaCl,1000mL 蒸馏水,pH 7.2—7.5 。 牛肉膏蛋白胨固体培养基:5g牛肉膏,10g蛋白胨,5g NaCl,20g琼脂, 1000mL蒸馏水,pH 7.2—7.5 。
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