过敏原检测

低
中 高 很高（+） 特高（++） 特高（+++）
过敏原体外检测常见问题及解答
Q1:
为何患者sIgE结果阳性与临床表现不符
结果解释：交叉反应与CCD
CCD（Crossreactive Carbohydrate Determinants）存在 于多种植物性或动物源性的过敏原中。由于结构的相似性导致
过敏原与膜结合IgE交联 释放介质 （组织胺） B细胞释放IgE，产生 特异性IgE抗体
过敏常见症状
湿疹、荨麻疹、紫癜
鼻痒
打喷嚏 咳嗽
鼻塞
支气管哮喘
清水样鼻涕
过敏性疾病发病率速增
卫生学推测
• 世界变态反应组织（WAO）统计，过敏性疾病总患病率高达22%
•
中国有五亿多人患过敏性疾病，约37.4%
过敏原 II
相关过敏原 ~5%
无关成分 ~95%
过敏原 III
过敏原 (~5% 相关)
• 蛋白或糖蛋白
• 低分子量，15 – 20 kDa • 多价
过敏原提取物
过敏原 (~5 % 相关) 提取
包被 过敏原提取物与固相结合
体内及体外试验均会受到抗原提取物质量的影响
过敏的诊断
过敏？
既往史 体内试验 体外诊断 激发试验
过敏原的实验室检测
死亡之吻
一位20岁的年轻女性被送至Mayo诊所附属医院急诊科，该患者临床表现为： 口唇血管神经性水肿、咽喉肿痛、荨麻疹、腹部绞痛、恶心、哮喘、严重呼吸困 难和低血压（80/50mm Hg）。 这一系列的症状发生在该患者亲吻其男友之后。
超敏反应及过敏原
超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原 刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤 为主的特异性免疫应答。
结果解释：共同过敏
建议避免单一过敏原检测，尽可能多种常见的过敏原
同时检测，以免漏检！
Q4: 食物不耐受IgG检测与食物过敏原sIgE检测
过敏原检测应注意的地方
食物不耐受是机体产生特异性IgG抗体，IgG抗体与食物颗粒形 成免疫复合物（Ⅲ型变态反应），沉淀于血管等部位，导致相 应的临床反应。属迟发性反应,多在进食2小时或数天后发生。
过敏性疾病发病率速增
“过敏进行曲” 描述过敏疾病一生中 的发展进程。（湿疹，
鼻窦炎，哮喘等等）
1
过敏原 I
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原 空气中的吸入过敏原 (例如. 植物花粉, 动物毛发, 室内灰尘或虫螨等)
协和医院变态反应科王瑞琪在2011年全国变态反应大会中关于《二十万项次过敏 原特异性IgE检测结果分析》的报告中提示：吸入过敏比食物过敏原更加常见， 几乎为其的8倍。
生活方式的改变
• • 身体运动量的全面降低 (relation with obesity: Firincielli et al: Paeds Pulm 2005) 相应而生的营养学的改变 (Hark et al: Annals 2005)
接触的过敏原的增多
• 在乡村，环境中存在大量的过敏原 (如屋尘螨，蟑螂和链格孢霉)，因此 过敏的流行程度和IgE抗体的滴度均偏高
总IgE高不等于过敏，相反过敏者不一定出现总 IgE高。高 IgE提示 过敏的可能性大，这在患者皮试阴性时决定是否进行进一步检测时有 意义。
（宋志强，郝 飞.变应原检测的再认识.临床皮肤科杂志 2006年 35卷第 5期.）
Q3: 未温育膜条为何出现浅色条带
血清温育前
血清温育前，在膜条特定过敏原区域出现浅色条带
类别
0
浓度[kU/l]
<0.35
sIgE水平
未检出
临床意义
不过敏 较敏感， 一般没有临床症状 较敏感，大量接触后 通常会有临床症状 通常具有临床症状 通常具有临床症状 非常高的抗体滴度 非常高的抗体滴度
1
2 3 4 5 6
0.35-0.7
0.7-3.5 3.5-17.5 17.5-50 50-100 >100
过敏原 I
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原 通过胃肠道吸收 (例如. 鱼、肉、蛋、 坚果和蔬菜等)
过敏原 I
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原 皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）
过敏原 I
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原 直接输入体内 (例如：昆虫或动物的毒液, 注射类药品等)
60 min 结合液
清洗：step 3 x 5min
10 min 底物温育 自动化判读或肉眼观察
反应膜
采样要求
• 样本：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。
• 采血量：>300ul(血清或血浆最少100ul)
• 样本不受药物、食物等因素的影响。
检测项目
结果报告
结果解释：EAST分级
• 结果报告采用EAST分级，根据特异性IgE的浓度用0-6表示
形成免疫复合物 持续的IgG/IgM 免疫复合物 r 几小时至数天 农民肺
细胞免疫反应 T细胞介导的 免疫反应 12小时至数周 接触性皮炎(Ni)
by Coombs and Gell (1963)
I 型超敏反应
致敏—激发—效应阶段
T细胞和B细胞接触过敏 原后活化
IgE与肥大细胞上 的IgE受体结合
对于食物特异性IgG检测的作用，临床上争议非常大，美国和欧
洲的相关学术组织的主流观点并不支持用检测食物特异性IgG来 替代检测特异性IgE
1. IgG不是致病性的，有的观点反而认为IgG4是保护性抗体。 2. 一些研究数据显示相比IgE检测，IgG与临床符合性不高，临床检测
意义不大。
澳大利亚临床免疫和过敏学会
均有SFDA注册证
SIgE(EUROLINE)
•采用先进的EUROBLOT®国际专利技术。 •独家包被有CCD指示带 •包被中国常见的过敏原，一次可以检测8-20项。 •采血量少，最少可达100l，尤其适合儿童。 •三种温育方案可供选择，操作仅需4个步骤，2.5小时完成实验，可同时 处理30-44份标本。 •配套自动化的操作仪器、汉化操作软件可与LIS系统连接。 •通过欧盟CE质量认证，并通过UK NEQAS, INSTAND国际质控。 •既可用于血清也可用于血浆，并有效检测一定浓度内的脂血、溶血。 •相同订货号相同颜色瓶盖试剂可以通用，最大程度节省试剂。 •显色步骤无需暗室操作。
呈逐年增加趋势。且单个过敏原过敏患者逐渐减少，患者对多种过敏原呈阳
性，有的更是多达6种以上，而且过敏程度增加。 二、[李立明，李金玉等.赣州地区620例慢性荨麻疹患者过敏原检测结果分析. 赣南医学院学报, 2008,6:28,3.]
杨玲，许以平等.2475例过敏患者过敏原分析.标记免疫分析与临床.2007,14（3）：141-143.
关于CCD的研究
目前仅有欧蒙免疫印迹法独家包被CCD检测！
在何种情况下应排除抗CCD IgE 的干扰?
• 当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下。
• 当某一患者出现多个特异性IgE结果阳性时。
举例: • 花生: 特异性 IgE 阳性但并不表现出临床症状。
• 出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现。
过敏性疾病的四种诊断方法 Ps：体内和体外检测结果与过敏原提取物具有一定的相关性！
体内和体外检测方法比较
类别
体内
方法
皮肤针刺试验 （皮内试验点、刺试验或刺 痕试验） 斑贴试验 鼻粘膜激发试验（SNPT）
特点
强烈反应时容易互相混淆结果 价格便宜、快速。 患者痛苦，无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性 检测前需要停抗组胺等治疗药 斑贴试验主要是检测Ⅳ型变态反应，敏感程度不太高 患者试验过程较痛苦 无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题 操作等较繁琐 食物过敏检测金标准 对于食物过敏反应严重的患者较危险 操作麻烦，需要病床观察 患者试验过程较痛苦 对患者来说使用安全，适合儿童，可避免强烈的皮肤反应 避免其它皮肤病造成的误判 使用方面，少量血清一次即可完成数十种过敏原的检测 适用于对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤 适用于用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者 该技术对诊断的科学性及意义等还有待证实 容易受到人为信号的干扰，难以建立严格的标准， 价格昂贵，不便于推广
敏原过敏。
• 自然界中存在交叉反应，交叉反应不一定都有临床症状。在结 果解释时需注意多重过敏以及CCD对结果的影响
欧蒙(中国)过敏原产品概要
TIgE(ELISA)
• • • • • •
R
简单和快捷的实验操作 低检出限 (1IU/ml) 高重复性 (批内实验CV<5%) 通过4份标准品计算定量结果 标准品采用WHO标准 通过ELISA工作站实现自动分析
1. 食物IgG抗体在健康成人及儿童中通常能够检测到，不依赖于与食物相关症状 的存在。
2. 现在还没有可靠的证据来证明IgG抗体的检测对于食物过敏或食物不耐受的有
效性及IgG抗体可以引起一些症状。 3. 事实上，IgG抗体反映的是过敏原的暴露，而不是疾病的存在。 4. 不适当的食物过敏检测方法的应用或结果的不正确解读，都会导致不合理和 不必要的饮食限制。
一些独特的交叉反应出现。 典型含CCD结构的过敏原:
• • 植物花粉 植物性食物
• •
植物乳胶 昆虫毒液
CCD通常不会导致临床症状的出现
大部分糖蛋白仅含有一个IgE结合的多聚糖，因此无法促进结合 有IgE抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化，进而无法活化肥 大细胞发生脱核及释放组胺的作用，因此对于仅为抗CCD IgE抗 体阳性的患者而言往往无临床症状的表现。
• 植物乳胶: 针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性，但无相关接触史。 • 昆虫毒液: 针对蜜蜂和马蜂特异性IgE阳性的患者可能存在交叉反应。
CCD阳性时的结果解释
检测的过敏原
临床症状 有临床症状
解释 此阳性结果为致敏的过敏原 此阳性结果是由CCD引起的，不 一定是致敏物 根据临床症状，如果有和临床不 符的阳性可能是CCD引起的 这些阳性是由CCD引起的
导致超敏反应的物质被叫做过敏原或变应原。
天然过敏原种类很多，但大多是蛋白成份
超敏反应类型
Type I Type II Type III Type IV
早期反应 IgE介导的肥大细胞脱 颗粒 Platzhalter 数分钟 花粉热
细胞毒反应 IgG/IgM介导的红 细胞（主要）破坏 几小时至数天 药物过敏
血清温育后
血清温育后，浅色条带消失
结果解释： 1、温育前浅色条带是由于过敏原天然提取物含少量色素； 2、温育后，浅色条带即可消失 3、浅色条带不会影响实验检测结果
Q4: 如何解释同一患者出现多种过敏原阳性？
结果解释：共同过敏
一、[杨玲，许以平等.2475例过敏患者过敏原分析.标记免疫分析与临 床.2007,14（3）：141-143.] 除了鸡蛋和牛奶，由乳胶、猫、狗上皮、虾和杂草类所引起的过敏疾病大多
食物激发试验 （DBPCFC）
体外
血清学检验
生物共振 生物芯片
特异性IgE：检测原理
60 min 未稀释 1ml 血清 AP-酶结合物 AP 酶反应物 sIgE 过敏原提取物 显色反应
过夜孵育 1:11 稀释 100µl 血清
Hale Waihona Puke Baidu
摇摆60 min 未稀释 400µl 血清
清洗：step 3 x 5min
南非变态反应学会立场声明
1. 还没有证据证明双盲安慰剂对照食物试验（DBPCFC）与食物特异性IgG有相
关性，疾病组和对照组没有差异性。
2. 食物特异性IgG及其他非-IgE的免疫球蛋白亚型只是反映了个体对食物的摄入， 因此，可能是一个正常和无害的指标。
3. 强的IgG反映的是正常生理对特殊的蛋白的反应，而且是在正常环境下经常摄
只有1个过敏原显示阳性 无临床症状
CCD 阳性
有临床症状 1个以上阳性 无临床症状
全部阴性
有临床症状
无临床症状
检测产品中不含致敏的过敏原
无过敏
Q2:
如何解释总IgE结果与sIgE结果不符
对总IgE和sIgE的检测意义的观点
总IgE测定虽然不能说明对何种物质过敏，但在鉴别过敏与非过敏的 问题上有一定价值。资料显示，在变态反应性疾病中， 78%的患者 总 IgE高于 110kU/L，而非变态反应性疾病中 84%低于 25kU/L，约 有20%～30%的变态反应性疾病患者特异性 IgE高而总 IgE正常。 IgE升高也可见于寄生虫感染，其他一些疾病如选择性 IgA总缺乏症 、骨髓瘤、霍奇金病、肾病综合征、肝脏疾病等。
入的食物，通常能在健康成人、患者和儿童中可以检测到，而且不依赖于食物相 关症状的存在。
小结
• 过敏性发病率逐年增加，过敏原检测对于辅助诊断非常重要。
血清学检测过敏原是一种安全、便捷的方法
• 过敏性皮肤病伴随着总IgE的升高，所以定量检测总IgE也是有
意义的。
• 随着生活节奏加快及环境因素，越来越多的个体可能对多种过