牛蒡不同部位_牛蒡子不同产地中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比较及指纹汇总
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981331174
注:牛蒡苷元对照品加入量均为0180mg
结果表明本试验加样回收率试验符合有关规定。214样品的测定
精密吸取供试品溶液10L L ,注入高效液相色谱仪中,测定牛蒡苷和苷元的色谱峰面积,用外标法计算样品中牛蒡苷和苷元的含量。平行做2份。结果见表4,色谱图见图1~3。
表4全国34个产地牛蒡子中牛蒡苷和
1仪器与材料
111仪器
Ag ilent 1100高效液相色谱仪;四元泵;在线脱气机;柱温箱; KQ-250DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司;高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司。
112试药
牛蒡苷对照品、牛蒡苷元对照品(均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司。水为重蒸馏水。113样品
序号取样量
/g
样品中
量/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD /%
10124960155113397150
20126310158113596125
30125450156113598175
40124560154113297150
501245401541135101125
60124550154113398175
21311线性关系
2131111牛蒡苷线性范围考察精密吸取牛蒡苷对照品溶液4, 6, 8, 10, 12, 14L L分别注入液相色谱仪,测定牛蒡苷的色谱峰面积,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得牛蒡苷回归方程为Y = 540183X -937102, r =019999,牛蒡苷在41596~ 161086L g线性关系良好。
表7牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元含量测定/mg#g -1部位牛蒡苷含量牛蒡苷元含量
野生根0139-
栽培根--
二年生叶--
一年生叶--
二年生茎--
一年生叶柄--
绒毛31710145
精密称定干燥至恒重的牛蒡苷元对照品置10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成010519mg #mL -1的牛蒡苷元对照品溶液。
21112供试品溶液的制备将牛蒡子干燥并粉碎,过60目筛,取粉末015g ,精密称定,置50mL容量瓶中,加甲醇45mL ,在超声波发生器内提取20m i n (150W, 20kH z,取出放冷,加甲醇至刻度,摇匀。经微孔滤膜(0145L m过滤,即得。
72 21534个不同产地牛蒡子指纹图谱的测定
21511牛蒡子药材H PLC指纹图谱中共有指纹峰的标定与技术参数的设定将34批不同产地牛蒡子药材指纹图谱输入国家药典委员会指定的指纹图谱相似度测试软件中,进行图形匹配及其数据匹配后,建立了供试品指纹图谱的共有模式,共有10个色谱峰,其中5, 10号峰分别为牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰,结果见图4~5。将4号峰作为内参比峰,各峰相对保留时间、相对峰面积结果见表5。
本实验所采用的牛蒡子药材于2007年9月、10月采自于全国7个大区34个产地,经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定均为Arctiu m lappa L 1,牛蒡子编号及来源见表1。牛蒡不同部位采自沈阳苏家坨。2方法与结果211溶液配制
21111对照品溶液的制备精密称定干燥至恒重的
牛蒡苷对照品置10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成11149m g #mL -1的牛蒡苷对照品溶液。
21312精密度试验按样品测定方法对同一样品溶液连续进样6次,牛蒡苷、牛蒡苷元RSD分别为2117%、1182%,说明本试验精密度试验符合有关规定。
21313重现性试验按样品测定方法对牛蒡子样品进行5次平行实验,牛蒡苷、牛蒡苷元RSD分别为1137%、1119%,说明本试验重现性试验符合有关规定。
21314稳定性试验在室温条件下,精密吸取同一样品溶液。按样品测定方法在0, 2, 4, 6, 8h时间间隔内分别测定牛蒡苷和苷元的峰面积,结果牛蒡苷、牛蒡苷元的RSD分别为1172%、1170%,表明牛蒡苷和牛蒡苷元在8h内基本稳定。
表634个产地牛蒡子相似度评价结果
样品编号相似度样品编号相似度1019981801999 2019981901986 3019992011000 4019972101998 5019952201998 6019992301956 7019992401998 8019992501996 9110002601999 10110002701970 11019992801999 12110002911000 13019993001996 14110003101999 15110003201998 16110003301999 17019993401999
201263133135201035219797195
3012545321262015952189100119
401245631113221145310699105
501245431111221605310997126
601245531113221185215996175
971861158
2009年4月第11卷第4期中国现代中药M odern Chi nese M ed i c i ne A pr 12009V o l 111N o 14表3牛蒡苷元回收率试验
2131112牛蒡苷元线性范围考察精密吸取牛蒡苷元对照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12L L分别注入液相色谱仪,测定牛蒡苷元的色谱峰面积,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得牛蒡苷元回归方程为Y =381257X -241926, r =019998。牛蒡苷元在011038~016228L g线性关系良好。
21315加样回收率试验精称6份已知牛蒡苷和牛蒡苷元含量的样品0125g ,分别加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品。按供试品溶液制备项下方法处理,按上述色谱条件操作,计算回收率。结果见表2~3。
表2牛蒡苷回收率
序号
取样
量/g
样品中
量/mg
对照品
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD /% 101249631164211655214295198
v
康凯1,窦德强
1*
,康廷国1,许亮1,吕智1,常禹2,刘淼
2
(11辽宁中医药大学药学院,辽宁大连116600;
21中国科学院沈阳生态研究所,辽宁沈阳110016
[摘要]目的:应用HPLC同时测定采集于全国34份牛蒡子和牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量;建立牛蒡子药材H PLC指纹图谱。方法:采用A g il ent T C -C 18(416mm @250mm, 5L m色谱柱;流动相:甲醇-水
牛蒡苷元含量测定/%样品编号牛蒡苷含量RSD牛蒡苷元含量RSD 16152115001121172 25133113801241176 36132013401160187 46132014101130155 56154111301301166 68157110601131159 76156011501480115 85181112301350182 97107010101190137 105121014201320144 114179018101581109 127108115001160191 135112115101280126 148123114401131107 156110116401201176 166123115001230160 175190111001251114 186176111201270153 195176017101261164 205105114601911171 216146019701351103 225177113601511139 237108016501071102 242133013001590100 253137114301130100 264166116201161136 274171014401480159 284134113501951157 295159114401351140 304140019001241177 316141011801141151 327120010701250156 336107113601521178 3461470187014111
表1全国34个产地牛蒡子编号及来源
区域省或直辖市样品编号产地
东北黑龙江1佳木斯
2富锦
3五常
4牡丹江吉林5四平石岭6梅河口1延吉
辽宁12本溪县
13宽甸
14岫岩
15铁岭
16清原
17北镇
华东浙江18建德
江苏19徐州
山东20苍山
华南陕西21太白县
22宁陕(采西北甘肃23会川
24天水(采25岷县(采、绿26宕昌
(水:0m i n ,
55%;
10m i n ,
46%; 20m in , 30%线性梯度,检测波长为280n m。结果:牛蒡苷的线性方程为Y =
540183X -937102(r =019999,
n =6,平均回收率为97186%,
RSD =1158%;牛蒡苷元的线性方程为Y =381257X -241926(r =019998 , n =6,平均回收率为98133%,
等
[2]
。药理活性主要是抗菌、降血糖、利尿及泻下、抗肿瘤作用和免疫活性等。现代药理研究结果表明牛蒡子中的活性成分为牛蒡苷元。在口服条件下牛蒡苷在肠内菌作用下也很快转变为牛蒡苷元这一活性形式
[3-4]
。所以同时控制牛蒡子药材中牛蒡苷
和牛蒡苷元的含量,才能真正达到控制该药材质量的目的。目前牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量测定尚未见报道。为了对不同产地牛蒡子的质量和对牛蒡不同部位的开发与利用有更深入了解,本文对不同产地牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了研究,同时对牛蒡不同部位的牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了比较,并建立了牛蒡子药材H PLC指纹图谱。
[关键词] HPLC ;牛蒡子;牛蒡苷;牛蒡苷元;指纹图谱
牛蒡子为菊科植物牛蒡A rctium l a ppa L 1的干燥成熟果实。具疏散风热,宣肺透疹,解毒利咽的功能。用于风热感冒,咳嗽痰多,麻疹,风疹,咽喉肿痛,痄腮丹毒,痈肿疮毒[1]
。牛蒡子主要化学成
分为木脂素类化合物,主要为牛蒡苷、牛蒡苷元
表534个产地牛蒡子相对保留时间和相对峰面积峰号相对保留时间相对峰面积10136901183
20150301143
30168501403
S 1100011000
511103121080
61124401154
71128901186
81170201125
91174001298
101185601950
21512牛蒡子药材指纹图谱相似度检验利用指纹图谱相似度计算软件,以夹角余弦作为测度,计算样品与共有模式之间的相似度[4],结果见表6。
质量标准
v
[基金项目]国家/十一五0支撑计划课题(2006BA I09B02-6和辽宁省教育厅创新团队项目(2007T 115 [通讯作者]
*
窦德强, E -m a i:l doudeqiang2003@yahoo 1co m 1cn
牛蒡不同部位、牛蒡子不同产地
中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比较及指纹图谱分析
RSD =1174%。本实验建立的牛蒡子药材H PLC
指纹图谱相似度均在0190~1100。结论:本方法简便、准确、灵敏,可同时测定牛蒡苷和牛蒡苷元的含量,可用作牛蒡子药材的质量控制方法。本实验建立的H PLC指纹图谱分析方法可用于评价牛蒡子药材的内在质量。牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元考察结果表明,牛蒡绒毛、果皮、总苞、芽较其他部位含有较多牛蒡苷和牛蒡苷元。
216牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元的考察按211供试品溶液的制备方法分别对牛蒡野生根、栽培根、二年生叶、一年生叶、二年生茎、一年生叶柄、绒毛、总苞、果皮、芽进行制备,分别取10L L ,按212色谱条件进样,测定牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰面积,用外标法计算牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量,结果见表7。
华北河北27承德
华中河南28禹州(采29河南滦川西南四川30雅安
31松潘
华中湖北32恩施
33神农架34巴东212色谱条件
色谱柱为Ag ilent TC -C 18(416mm @250mm, 5L m ;流动相:甲醇-水(水:0m i n , 55%; 10m i n , 46%; 20m i n , 30%线性梯度;流速110mL #m i n -1;检测波长280n m;柱温25e ;检测时间20m in。213方法学考察
注:牛蒡苷元对照品加入量均为0180mg
结果表明本试验加样回收率试验符合有关规定。214样品的测定
精密吸取供试品溶液10L L ,注入高效液相色谱仪中,测定牛蒡苷和苷元的色谱峰面积,用外标法计算样品中牛蒡苷和苷元的含量。平行做2份。结果见表4,色谱图见图1~3。
表4全国34个产地牛蒡子中牛蒡苷和
1仪器与材料
111仪器
Ag ilent 1100高效液相色谱仪;四元泵;在线脱气机;柱温箱; KQ-250DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司;高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司。
112试药
牛蒡苷对照品、牛蒡苷元对照品(均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司。水为重蒸馏水。113样品
序号取样量
/g
样品中
量/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD /%
10124960155113397150
20126310158113596125
30125450156113598175
40124560154113297150
501245401541135101125
60124550154113398175
21311线性关系
2131111牛蒡苷线性范围考察精密吸取牛蒡苷对照品溶液4, 6, 8, 10, 12, 14L L分别注入液相色谱仪,测定牛蒡苷的色谱峰面积,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得牛蒡苷回归方程为Y = 540183X -937102, r =019999,牛蒡苷在41596~ 161086L g线性关系良好。
表7牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元含量测定/mg#g -1部位牛蒡苷含量牛蒡苷元含量
野生根0139-
栽培根--
二年生叶--
一年生叶--
二年生茎--
一年生叶柄--
绒毛31710145
精密称定干燥至恒重的牛蒡苷元对照品置10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成010519mg #mL -1的牛蒡苷元对照品溶液。
21112供试品溶液的制备将牛蒡子干燥并粉碎,过60目筛,取粉末015g ,精密称定,置50mL容量瓶中,加甲醇45mL ,在超声波发生器内提取20m i n (150W, 20kH z,取出放冷,加甲醇至刻度,摇匀。经微孔滤膜(0145L m过滤,即得。
72 21534个不同产地牛蒡子指纹图谱的测定
21511牛蒡子药材H PLC指纹图谱中共有指纹峰的标定与技术参数的设定将34批不同产地牛蒡子药材指纹图谱输入国家药典委员会指定的指纹图谱相似度测试软件中,进行图形匹配及其数据匹配后,建立了供试品指纹图谱的共有模式,共有10个色谱峰,其中5, 10号峰分别为牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰,结果见图4~5。将4号峰作为内参比峰,各峰相对保留时间、相对峰面积结果见表5。
本实验所采用的牛蒡子药材于2007年9月、10月采自于全国7个大区34个产地,经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定均为Arctiu m lappa L 1,牛蒡子编号及来源见表1。牛蒡不同部位采自沈阳苏家坨。2方法与结果211溶液配制
21111对照品溶液的制备精密称定干燥至恒重的
牛蒡苷对照品置10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成11149m g #mL -1的牛蒡苷对照品溶液。
21312精密度试验按样品测定方法对同一样品溶液连续进样6次,牛蒡苷、牛蒡苷元RSD分别为2117%、1182%,说明本试验精密度试验符合有关规定。
21313重现性试验按样品测定方法对牛蒡子样品进行5次平行实验,牛蒡苷、牛蒡苷元RSD分别为1137%、1119%,说明本试验重现性试验符合有关规定。
21314稳定性试验在室温条件下,精密吸取同一样品溶液。按样品测定方法在0, 2, 4, 6, 8h时间间隔内分别测定牛蒡苷和苷元的峰面积,结果牛蒡苷、牛蒡苷元的RSD分别为1172%、1170%,表明牛蒡苷和牛蒡苷元在8h内基本稳定。
表634个产地牛蒡子相似度评价结果
样品编号相似度样品编号相似度1019981801999 2019981901986 3019992011000 4019972101998 5019952201998 6019992301956 7019992401998 8019992501996 9110002601999 10110002701970 11019992801999 12110002911000 13019993001996 14110003101999 15110003201998 16110003301999 17019993401999
201263133135201035219797195
3012545321262015952189100119
401245631113221145310699105
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601245531113221185215996175
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2009年4月第11卷第4期中国现代中药M odern Chi nese M ed i c i ne A pr 12009V o l 111N o 14表3牛蒡苷元回收率试验
2131112牛蒡苷元线性范围考察精密吸取牛蒡苷元对照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12L L分别注入液相色谱仪,测定牛蒡苷元的色谱峰面积,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,得牛蒡苷元回归方程为Y =381257X -241926, r =019998。牛蒡苷元在011038~016228L g线性关系良好。
21315加样回收率试验精称6份已知牛蒡苷和牛蒡苷元含量的样品0125g ,分别加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品。按供试品溶液制备项下方法处理,按上述色谱条件操作,计算回收率。结果见表2~3。
表2牛蒡苷回收率
序号
取样
量/g
样品中
量/mg
对照品
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD /% 101249631164211655214295198
v
康凯1,窦德强
1*
,康廷国1,许亮1,吕智1,常禹2,刘淼
2
(11辽宁中医药大学药学院,辽宁大连116600;
21中国科学院沈阳生态研究所,辽宁沈阳110016
[摘要]目的:应用HPLC同时测定采集于全国34份牛蒡子和牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量;建立牛蒡子药材H PLC指纹图谱。方法:采用A g il ent T C -C 18(416mm @250mm, 5L m色谱柱;流动相:甲醇-水
牛蒡苷元含量测定/%样品编号牛蒡苷含量RSD牛蒡苷元含量RSD 16152115001121172 25133113801241176 36132013401160187 46132014101130155 56154111301301166 68157110601131159 76156011501480115 85181112301350182 97107010101190137 105121014201320144 114179018101581109 127108115001160191 135112115101280126 148123114401131107 156110116401201176 166123115001230160 175190111001251114 186176111201270153 195176017101261164 205105114601911171 216146019701351103 225177113601511139 237108016501071102 242133013001590100 253137114301130100 264166116201161136 274171014401480159 284134113501951157 295159114401351140 304140019001241177 316141011801141151 327120010701250156 336107113601521178 3461470187014111
表1全国34个产地牛蒡子编号及来源
区域省或直辖市样品编号产地
东北黑龙江1佳木斯
2富锦
3五常
4牡丹江吉林5四平石岭6梅河口1延吉
辽宁12本溪县
13宽甸
14岫岩
15铁岭
16清原
17北镇
华东浙江18建德
江苏19徐州
山东20苍山
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24天水(采25岷县(采、绿26宕昌
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55%;
10m i n ,
46%; 20m in , 30%线性梯度,检测波长为280n m。结果:牛蒡苷的线性方程为Y =
540183X -937102(r =019999,
n =6,平均回收率为97186%,
RSD =1158%;牛蒡苷元的线性方程为Y =381257X -241926(r =019998 , n =6,平均回收率为98133%,
等
[2]
。药理活性主要是抗菌、降血糖、利尿及泻下、抗肿瘤作用和免疫活性等。现代药理研究结果表明牛蒡子中的活性成分为牛蒡苷元。在口服条件下牛蒡苷在肠内菌作用下也很快转变为牛蒡苷元这一活性形式
[3-4]
。所以同时控制牛蒡子药材中牛蒡苷
和牛蒡苷元的含量,才能真正达到控制该药材质量的目的。目前牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量测定尚未见报道。为了对不同产地牛蒡子的质量和对牛蒡不同部位的开发与利用有更深入了解,本文对不同产地牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了研究,同时对牛蒡不同部位的牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了比较,并建立了牛蒡子药材H PLC指纹图谱。
[关键词] HPLC ;牛蒡子;牛蒡苷;牛蒡苷元;指纹图谱
牛蒡子为菊科植物牛蒡A rctium l a ppa L 1的干燥成熟果实。具疏散风热,宣肺透疹,解毒利咽的功能。用于风热感冒,咳嗽痰多,麻疹,风疹,咽喉肿痛,痄腮丹毒,痈肿疮毒[1]
。牛蒡子主要化学成
分为木脂素类化合物,主要为牛蒡苷、牛蒡苷元
表534个产地牛蒡子相对保留时间和相对峰面积峰号相对保留时间相对峰面积10136901183
20150301143
30168501403
S 1100011000
511103121080
61124401154
71128901186
81170201125
91174001298
101185601950
21512牛蒡子药材指纹图谱相似度检验利用指纹图谱相似度计算软件,以夹角余弦作为测度,计算样品与共有模式之间的相似度[4],结果见表6。
质量标准
v
[基金项目]国家/十一五0支撑计划课题(2006BA I09B02-6和辽宁省教育厅创新团队项目(2007T 115 [通讯作者]
*
窦德强, E -m a i:l doudeqiang2003@yahoo 1co m 1cn
牛蒡不同部位、牛蒡子不同产地
中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比较及指纹图谱分析
RSD =1174%。本实验建立的牛蒡子药材H PLC
指纹图谱相似度均在0190~1100。结论:本方法简便、准确、灵敏,可同时测定牛蒡苷和牛蒡苷元的含量,可用作牛蒡子药材的质量控制方法。本实验建立的H PLC指纹图谱分析方法可用于评价牛蒡子药材的内在质量。牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元考察结果表明,牛蒡绒毛、果皮、总苞、芽较其他部位含有较多牛蒡苷和牛蒡苷元。
216牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元的考察按211供试品溶液的制备方法分别对牛蒡野生根、栽培根、二年生叶、一年生叶、二年生茎、一年生叶柄、绒毛、总苞、果皮、芽进行制备,分别取10L L ,按212色谱条件进样,测定牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰面积,用外标法计算牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量,结果见表7。
华北河北27承德
华中河南28禹州(采29河南滦川西南四川30雅安
31松潘
华中湖北32恩施
33神农架34巴东212色谱条件
色谱柱为Ag ilent TC -C 18(416mm @250mm, 5L m ;流动相:甲醇-水(水:0m i n , 55%; 10m i n , 46%; 20m i n , 30%线性梯度;流速110mL #m i n -1;检测波长280n m;柱温25e ;检测时间20m in。213方法学考察