植物脱毒快繁技术

依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利
用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进 行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低， 传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存 活，并加快分裂和生长。
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）温水浸渍处理
适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍 10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受 伤。
植物离体脱毒快繁技术
一、病毒危害
多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如， 草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移， 侵染病毒的种类越来越多。
植物病毒病原体可通过维管束传导。因此， 对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后， 就会代代相传越趋严重。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大 幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。
3、茎尖的培养方法
材料选择、消毒
微茎尖的剥取
接种
3、茎尖Βιβλιοθήκη Baidu培养方法
需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。 即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只 须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽， 如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表 面消毒10min。
除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响分
生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生
组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。
（2）培养条件
在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果
好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时，光
照强度便增加到4000lx。
（3）外植体的生理状态
茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。 取芽的时间也很重要，一般选萌动期较好。否则 采用适当的处理，打破休眠才能进行。
官的培养相同。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代 稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最
重要的一个途径。
4、影响微茎尖成活及脱毒的因素 （1）母体材料病毒侵染程度
被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。
（2）外植体大小
在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存 活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多。
几乎不含或含病毒很少。
茎尖分生组织不带病毒，可能有4方面的原因： 1、传导抑制。植物体病毒的移动主要靠2条途 径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成 维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒 移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分 裂和活跃的生长速度。 2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系， 存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。
不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。
（二）茎尖培养脱毒
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含
病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm
带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）
（2）热空气处理
热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生 长的盆栽植株移入温热治疗箱内，一般35-40℃。 处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数
月。
热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊
花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。 热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹
果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒
2、培养基
一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎 尖时，有些离子浓度过高应稀释。
在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中 合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给， 必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在 生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D， 宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对 某些植物茎尖培养有用。
一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀
片将带1-2个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。
将接种的茎尖置于22℃左右温度下。 2000-3000lx
16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能 进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。
微茎尖需数月才能成功。
茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器
• 3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制 时，病毒DNA随着复制。因此，植物细 胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。 在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很 高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无 法进行复制。
• 4、抑制因子存在。在植物体内存在有一 种“病毒钝化系统”（抑制因子假说）， 在分生组织中的活性最高，因而使分生 组织不受侵染。
目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒(豆类植物除外)，种子繁 殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采 取一些特殊方法脱除病毒。
脱毒快繁的一般过程
1、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类 2、茎尖培养脱毒或结合热处理
3、鉴定
4、繁殖 5、驯化移植
二、脱毒方法 (一) 热处理脱毒 1、热处理脱毒原理：
①病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起 复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的 活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止， 而失去病毒的侵染能力。 ②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞 分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优 势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因 此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植 株。
切取茎尖越小脱毒效果越好，但太小不易 成活，过大又不能保证完全除去病毒，所以茎 尖大小要合适。
离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响
茎尖长 叶原基数 小植株数 脱毒植株 （ｍｍ） 数 0.12 1 50 24 脱毒率 （％） 48
0.27 0.6
2 4
42 64
18 0
42.9 0
剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒。当