常见植物的脱毒与快速繁殖技术
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常见植物的脱毒与快速繁殖技术
甘蔗脱毒
甘蔗脱毒是指通过一定的技术手段去除甘蔗植株体内病毒 的过程，使其恢复健康生长。常用的脱毒方法包括热处理、 化学处理和微茎尖培养等。
快速繁殖
脱毒后的甘蔗植株可以通过组织培养技术进行快速繁殖， 在人工控制的条件下，利用幼嫩的茎尖或根尖培养出大量 的无病毒植株。
案例效果
通过甘蔗脱毒与快速繁殖技术，可以快速获得大量无病毒 的甘蔗种苗，提高甘蔗产量和品质，增加农民收入。
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
目录
• 植物脱毒技术 • 植物快速繁殖技术 • 植物脱毒与快速繁殖的应用 • 植物脱毒与快速繁殖的前景与挑战 • 案例分析
01 植物脱毒技术
热处理脱毒
总结词
通过加热植物组织，使病毒粒子失活或抑制其复制，从而达到脱毒目的。
详细描述
热处理脱毒通常是将植物组织暴露在高温下，如热水或热蒸汽，使病毒粒子失 去活性。这种方法适用于多种植物，尤其是难以通过其他方法脱毒的植物。
在园艺上的应用
花卉产业的发展
01
通过植物脱毒与快速繁殖技术，可以快速大量繁殖各类花卉苗
木，满足市场需求，促进花卉产业的发展。
园林绿化的优化
02
无病毒种苗生长健壮，抗性强，能够改善城市绿化效果，提高
园林景观品质。
切花和盆栽植物的生产
03
利用植物脱毒与快速繁殖技术，可以大量生产优质切花和盆栽
植物，丰富人们的家居生活。
马铃薯脱毒与快速繁殖案例
01 02
马铃薯脱毒
马铃薯脱毒是指通过一定的技术手段去除马铃薯植株体内病毒的过程， 使其恢复健康生长。常用的脱毒方法包括热处理、化学处理和微茎尖培 养等。
快速繁殖
脱毒后的马铃薯植株可以通过组织培养技术进行快速繁殖，在人工控制 的条件下，利用幼嫩的茎尖或根尖培养出大量的无病毒植株。
植物的离体快繁
4、褐变现象
概念 褐变：指在组织培养过程中，由培养材料 向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐 渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而 死亡的现象。
褐变原因
由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，将酚 类化合物氧化成醌类物质，会抑制其它酶 的活性，从而影响所接种外植体的培养。
减轻褐变现象发生的方法：
三个选择：
在培养基中表现的症状
外植体接触培养基部位长菌 外植体损伤部位长菌 外植体生长不良或表现出缺绿
防治措施
接种前的工作： 1、 接种室的灭菌 2、超净工作台的灭菌 3、 接种器皿、用具的灭菌 4、工作人员接种前应做的准备工作 5、 材料的灭菌
1、接种室的灭菌
• 接种室的地面，墙壁要擦洗干净灯灭菌
3、玻璃化现象
定义：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些 培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这 种现象通常称为玻璃化。 特点：外观形态有明显异常；体内含水量、矿质 元素、糖类、纤维、蛋白质等基本成分含量有变 化，一些酶活和内源激素含量有变化。
影响玻璃化苗发生的因素
1.培养材料：材料种类和外植体不同都有影响。
兰花的萌发
兰花的启动
兰花的增殖
兰花的分化
培养的兰花
五种器官发生方式优点、缺点比较：
（1）不定芽型：容易成苗，对培养基要求不 高，后代遗传性较为稳定，但取材受到一 定限制，仅限于具有明显顶端分生组织和 次生分生组织的物种。
（2）器官型和类胚体发生型：对培养基要求 高，器官发生条件苛刻。繁殖数量不如不 定芽型和器官发生型多，但遗传性稳定。
错
误
2、遗传稳定性
影响遗传稳定性的因素有： 1、基因型 2、继代次数 3、发生方式 4、激素浓度
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
《常见植物的脱毒与快速繁殖技术》一、常见植物培养方式：1、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
2、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。
3、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。
4、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。
5、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
6、菊花生根能力比较强，有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。
7、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。
8、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。
二、提问：对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。
影响脱毒效果的因素：外植体大小；茎尖所处部位；病毒种类及复合感染。
简述苹果花粉培养的过程。
①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。
苹果的栽培管理过程中应注意哪几个问题？①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。
草莓无毒苗的繁殖程序分哪几步？草莓无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。
蝴蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?蝴蝶兰脱毒：花梗侧芽的消毒与培养——茎尖培养——原球茎诱导——继代培养——原球茎增殖——生根炼苗。
通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术：一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm 大小的茎尖培养。
说明甘薯脱毒快繁技术的工艺流程。
（1）脱毒：优良品种母株选择；材料消毒；茎尖剥离；茎尖培养；茎尖苗的初级快繁；脱毒鉴定。
（2）快繁：脱毒苗的快繁；原原种的繁育；原种的繁育；种薯的繁育三、甘薯脱毒试管苗栽培管理注意哪些问题？培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。
植物快速繁殖和脱毒
浸蘸法是在网架薄膜上加1滴重蒸馏水，将 病株叶片或幼芽的新鲜切口在水滴中 浸几秒钟，吸去多余水分，再进行染 色，然后放到电镜下观察。
7.4.5 分子检测法
如RT-PCR（反转录PCR）法：将待测样 品的总RNA与cDNA合成的试剂盒进行反 应，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有 的序列设计引物进行PCR反应，即可知道 在寄主中是否有病毒基因的存在及表达。
本章内容主要掌握以下几点问题： 1.掌握植物快速繁殖的途径和方法。 2.掌握植物快速繁殖中茎尖培养脱毒原理和步骤。 3.知道茎尖以外其他途径脱毒的优缺点。 4.理解脱毒苗的常用鉴定方法原理及优缺点，并
学会操作技能。 5.熟悉脱毒后防病毒再感染措施。
作业题
1、植物快速无性繁殖的概念、特点和程序？ 2、茎尖分生组织培养的目的是什么？ 3、简述茎尖分生组织培养的方法。 4、脱毒苗的鉴定方法有哪些？各有何优缺点？
7.4.3 抗血清鉴定法
serologic test
原理：
抗原
当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时
一种特异性丙种球蛋白称为免疫球蛋白
抗体
抗体在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。 这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。
方法:
如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管 滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量对照血清。 然后各加滴被检植物压榨出的原汁液两滴。用玻璃 棒搅匀，在常温下静置20－50min，然后在40－ 60倍显微镜下观察。带病毒的叶绿体发生典型的凝 集现象。
③ 茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低
茎尖越小，茎尖内营养、水分越难长时间 维持。因此对培养基营养组成，渗透压、酸碱 度、激素种类及浓度要求也就越高。茎尖越小， 剥离技术要求越高。
7.4.5 分子检测法
如RT-PCR（反转录PCR）法：将待测样 品的总RNA与cDNA合成的试剂盒进行反 应，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有 的序列设计引物进行PCR反应，即可知道 在寄主中是否有病毒基因的存在及表达。
本章内容主要掌握以下几点问题： 1.掌握植物快速繁殖的途径和方法。 2.掌握植物快速繁殖中茎尖培养脱毒原理和步骤。 3.知道茎尖以外其他途径脱毒的优缺点。 4.理解脱毒苗的常用鉴定方法原理及优缺点，并
学会操作技能。 5.熟悉脱毒后防病毒再感染措施。
作业题
1、植物快速无性繁殖的概念、特点和程序？ 2、茎尖分生组织培养的目的是什么？ 3、简述茎尖分生组织培养的方法。 4、脱毒苗的鉴定方法有哪些？各有何优缺点？
7.4.3 抗血清鉴定法
serologic test
原理：
抗原
当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时
一种特异性丙种球蛋白称为免疫球蛋白
抗体
抗体在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。 这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。
方法:
如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管 滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量对照血清。 然后各加滴被检植物压榨出的原汁液两滴。用玻璃 棒搅匀，在常温下静置20－50min，然后在40－ 60倍显微镜下观察。带病毒的叶绿体发生典型的凝 集现象。
③ 茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低
茎尖越小，茎尖内营养、水分越难长时间 维持。因此对培养基营养组成，渗透压、酸碱 度、激素种类及浓度要求也就越高。茎尖越小， 剥离技术要求越高。
植物脱毒和快速繁殖技术
农业领域：提高农作物产量和品质，解决种质退化问题
园艺领域：促进花卉、蔬菜、水果等园艺作物的健康生长，提高其观赏价值和食用安全性
生物技术领域：为植物基因工程和细胞工程提供高质量的实验材料，推动植物生物技术的进一步 发展
生态恢复领域：用于治理荒漠化、盐碱化等生态退化地区，促进生态系统的恢复和重建
技术特点比较
植物脱毒技术：消除植物体内病毒，提高产量和品质 快速繁殖技术：通过组织培养等方法快速繁殖植物，缩短繁殖周期 脱毒技术更适用于大规模生产，快速繁殖技术更适用于珍稀植物保护 脱毒技术对环境条件要求较高，快速繁殖技术对设备要求较高
应用范围比较
植物脱毒技术： 适用于各种植物， 特别是多年生植 物和花卉
激光处理法：利 用激光照射植物 表面，使病毒失 活
脱毒效果评估
生长状况：脱毒苗生长旺盛， 根系发达，无明显生长缺陷
病毒检测：通过生物学和分 子生物学方法检测脱毒苗是 否携带病毒
生理生化指标：脱毒苗的生 理生化指标正常，无异常代
谢产物
抗病性：脱毒苗抗病性强， 不易感染病毒病和其他病害
脱毒技术的应用
快速繁殖技术：通过植物组织培养 或微型繁殖等方法，在短时间内大 量繁殖优质种苗的技术
添加标题
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微型繁殖法：利用植物细胞具有全 能性的理论，通过少量植物材料快 速繁殖出大量优质种苗的方法
无性繁殖：利用植物的根、茎、叶 等营养器官进行繁殖，使植物保持 优良性状的方法
繁殖效率评估
繁殖周期：从种子到成熟所需的时间 生长速度：植物生长的快慢程度 繁殖数量：单位时间内产生的后代数量 遗传稳定性：后代与亲本在形态和生物学特性上的相似程度
繁殖技术的应用
农业领域：提 高作物产量和 品质，解决粮
园艺领域：促进花卉、蔬菜、水果等园艺作物的健康生长，提高其观赏价值和食用安全性
生物技术领域：为植物基因工程和细胞工程提供高质量的实验材料，推动植物生物技术的进一步 发展
生态恢复领域：用于治理荒漠化、盐碱化等生态退化地区，促进生态系统的恢复和重建
技术特点比较
植物脱毒技术：消除植物体内病毒，提高产量和品质 快速繁殖技术：通过组织培养等方法快速繁殖植物，缩短繁殖周期 脱毒技术更适用于大规模生产，快速繁殖技术更适用于珍稀植物保护 脱毒技术对环境条件要求较高，快速繁殖技术对设备要求较高
应用范围比较
植物脱毒技术： 适用于各种植物， 特别是多年生植 物和花卉
激光处理法：利 用激光照射植物 表面，使病毒失 活
脱毒效果评估
生长状况：脱毒苗生长旺盛， 根系发达，无明显生长缺陷
病毒检测：通过生物学和分 子生物学方法检测脱毒苗是 否携带病毒
生理生化指标：脱毒苗的生 理生化指标正常，无异常代
谢产物
抗病性：脱毒苗抗病性强， 不易感染病毒病和其他病害
脱毒技术的应用
快速繁殖技术：通过植物组织培养 或微型繁殖等方法，在短时间内大 量繁殖优质种苗的技术
添加标题
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微型繁殖法：利用植物细胞具有全 能性的理论，通过少量植物材料快 速繁殖出大量优质种苗的方法
无性繁殖：利用植物的根、茎、叶 等营养器官进行繁殖，使植物保持 优良性状的方法
繁殖效率评估
繁殖周期：从种子到成熟所需的时间 生长速度：植物生长的快慢程度 繁殖数量：单位时间内产生的后代数量 遗传稳定性：后代与亲本在形态和生物学特性上的相似程度
繁殖技术的应用
农业领域：提 高作物产量和 品质，解决粮
第五章植物脱毒快繁技术
2、培养基
一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎 尖时，有些离子浓度过高应稀释。
在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中 合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必 须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长 素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用 NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些 植物茎尖培养有用。
五、快速繁殖
茎尖培养得到的脱毒苗不多，用于生产需扩大繁殖。
扩繁方法： 1）组培快繁 2）无毒苗栽到土壤中进行扩繁。如甘薯、草 莓等利用蔓，马铃薯、姜、蒜等利用地下部分繁 殖。为了预防病毒再感染，扩繁应在培育温室或 防虫罩内，因为昆虫传播病毒。
3）两种方法相结合，试管内扩繁，移栽后再 扩繁。
注意： 1、培养变异的产生，应及时去除 2、脱毒苗并非永远是无毒苗，由于昆虫等的传播，
• ④愈伤组织增殖 可以说，所有的植物通 过组织培养的方法均可以诱导形成愈伤组 织,愈伤组织再进一步分化即可获得小植株。
• 愈伤组织增殖的特点是成功率高，繁殖系 数大，但遗传稳定性较差。
• 3．生根培养
• 4．生产用苗的培植
（二）离体繁殖的使用范围
离体繁殖常用于以下几个方面：
• 某些难以繁殖或繁殖系数很低的植物 • 某些需要加速繁殖的特殊基因型如名贵花卉、
3、茎尖的培养方法
材料选择、消毒 微茎尖的剥取 接种
3、茎尖的培养方法
需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物的快繁与脱毒培养PPT课件
16
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
17
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
21
番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
22
1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
18
1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
19
1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
17
二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
21
番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
22
1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
18
1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
19
1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
第八章 植物脱毒和快速繁殖技术
• 高激素浓度 植物的分生组织比其他组织的植物激素浓度 高，可以抑制病毒的增殖。
具体过程（以香石竹为例）
影响茎尖脱毒的因素
培养基
• 选择正确培养基，可以显著提高获得完整植株的成功率。
茎尖剥离体的大小
• 在最适培养基条件下，茎尖剥离体的大小对其存活率的
影响较大。一般被剥取的茎尖越大，越容易产生再生植
研究与开发
商业性组织培养实验室无法承担一些基础性研究，只能对具 有商业价值或潜在商业价值的植物微繁殖的技术和工艺进行 研究。
企业的研究和开发人员主要研究微繁殖技术因素（培养基、 培养条件等）、生产规划、生产体系的价格成本核算等，同 时负责解决生产中遇到的一些问题，如污染问题、生长异常 （玻璃化、变异等）等。
研究开发人员应经常与其他研究者和同事保持密切联系，经 常性地参加学术会议与交流活动，并阅读专业文献。
试管苗商业化生产的工艺流程（草莓）
热处理室 茎尖接种室 病毒鉴定室 净化工作室 培养室 冷藏室 温室 培养基制备室 清洗室 消毒室 （图）
试管快繁的成本
成本核算意义
• 了解生产过程中的各种消耗 • 产品成本是反映经营管理工作质量的一个综合指标 • 进行成本核算和成本管理可以促进生产单位注意各项技
采穗圃的无毒保持
采穗圃是整个无毒体系的主体之一，也是实现商品 价值的重要环节。 • 离地栽培 • 适当稀植 • 母本植株更新与基质消毒 • 定期喷药 • 病毒抽测
香石竹脱毒的操作程序
无毒优质种苗生产程序
试管苗商业化生产及经营
试管苗商业化生产及经营
概述 商业化运作的决定因素 试管苗商业化生产的工艺流程 试管快繁的成本 降低成本提高效益的措施 试管苗生产的经营管理
人工费用 其它费用
具体过程（以香石竹为例）
影响茎尖脱毒的因素
培养基
• 选择正确培养基，可以显著提高获得完整植株的成功率。
茎尖剥离体的大小
• 在最适培养基条件下，茎尖剥离体的大小对其存活率的
影响较大。一般被剥取的茎尖越大，越容易产生再生植
研究与开发
商业性组织培养实验室无法承担一些基础性研究，只能对具 有商业价值或潜在商业价值的植物微繁殖的技术和工艺进行 研究。
企业的研究和开发人员主要研究微繁殖技术因素（培养基、 培养条件等）、生产规划、生产体系的价格成本核算等，同 时负责解决生产中遇到的一些问题，如污染问题、生长异常 （玻璃化、变异等）等。
研究开发人员应经常与其他研究者和同事保持密切联系，经 常性地参加学术会议与交流活动，并阅读专业文献。
试管苗商业化生产的工艺流程（草莓）
热处理室 茎尖接种室 病毒鉴定室 净化工作室 培养室 冷藏室 温室 培养基制备室 清洗室 消毒室 （图）
试管快繁的成本
成本核算意义
• 了解生产过程中的各种消耗 • 产品成本是反映经营管理工作质量的一个综合指标 • 进行成本核算和成本管理可以促进生产单位注意各项技
采穗圃的无毒保持
采穗圃是整个无毒体系的主体之一，也是实现商品 价值的重要环节。 • 离地栽培 • 适当稀植 • 母本植株更新与基质消毒 • 定期喷药 • 病毒抽测
香石竹脱毒的操作程序
无毒优质种苗生产程序
试管苗商业化生产及经营
试管苗商业化生产及经营
概述 商业化运作的决定因素 试管苗商业化生产的工艺流程 试管快繁的成本 降低成本提高效益的措施 试管苗生产的经营管理
人工费用 其它费用
7.3植物组培快繁和脱毒技术
鉴定方法
1、直观测定法 2、指示植物法
利用病毒在其他植物上 出现症状的特征，作为 鉴别病毒种类的标准， 这种专门用以生产症状 的寄主植物即为指示植 物，又称鉴别寄主。
3、抗血清鉴定法
4、酶联免疫吸附法（ELISA） 5、电子显微镜检查法
6、免疫吸附电镜法
• 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织的上部，直接起源于中柱 鞘细胞，由于发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源 于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
原球茎形成
3、试管苗的增殖与继代培养
• 1）、试管繁殖速率及计算
• 理论计算：
接种一个芽或一块增殖的培养物，经一段时间的培养后看能 得到多少个芽或苗，从而推算理论上一年能繁殖出多少苗。
第一节 植物的离体快繁
植物离体快繁（Micropropagation） 又叫微型繁殖或试管繁殖，它是把植物 材料放在试管内，给予人工培养基和合 适培养条件，达到高速增殖，属离体无 性繁殖。
其特点是快速，每年能以千百万倍
一 .离体快繁的应用
良种快繁 脱毒良种苗快繁和无病毒苗大量快繁； 特殊育种材料快繁； 制种材料快速繁殖； 自然和人工诱变有用突变体的快繁； 基因工程植株的快繁；
四、离体快繁中的有关问题
• 培养物的增殖方式 • 外源生长调节物质对品种典 型性的影响 • 继代次数与变异
第二节 术
• 怎样脱毒？
植物的组培脱毒技
• 为什么要脱毒？
• 怎样鉴定无病毒植株？
病毒不仅使人患病，同样也侵害植物，使植物出现皱叶、黄 叶、落叶，以致品质变劣、花色变淡、花数减少、产量降低。 多数农作物，特别是无性繁殖作物，都易受到一种或多种病原 菌的周身浸染。病原菌的浸染不一定都会造成植物的死亡，很多病 毒甚至可能不表现任何可见症状。但在植物中病毒的存在会减少作 物的产量和降低作物的品质。
第十五章植物离体快速繁殖和脱毒技术
第十五章植物离体快速繁殖和脱毒技术第一节植物离体快速繁殖的概念与应用一、植物离体快速繁殖技术的概念植物离体快速繁殖技术是植物生物技术的一个重要组成部分，通过离体培养，将来自优良植株的茎尖、腋芽、鳞片、叶片等器官、组织或细胞进行离体培养，以期在短期内以更快的速度获得遗传上稳定一致的大量个体。
这种无性繁殖方式与传统无性繁殖方式的区别在于繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化。
二、植物离体快速繁殖技术的目的与应用前景植物离体快速繁殖技术已广泛应用于花卉、蔬菜、林木和药材生产，目的在于扩大繁殖珍稀植物原始材料和品种资源，繁殖经济效益高但难以繁殖的植物，繁殖和保存无病毒原种材料及销售量大而传统无性繁殖难以满足需求的植物。
植物离体快速繁殖技术已在全球范围内发展起来，试管苗产业已经形成并在迅速发展，前景广阔。
尤其是在发展中国家，由于投资少、见效快，植物离体快速繁殖技术常作为植物生物技术的主要内容。
快速繁殖也是生物技术应用于农业生产的中间环节之一。
目前很多通过基因工程、体细胞无性系变异、原生质体培养等手段获得的新品系或品种，尤其是通过营养繁殖的植物，往往需要通过离体快速繁殖技术才能使其迅速进行田间试验和生产，及早推向市场。
现在试管植物的生产已由早期的以观赏植物为主逐渐发展到果树、林木、蔬菜及某些大田作物。
第二节植物离体快速繁殖技术程序与关键一、植物离体快速繁殖技术的程序植物离体快速繁殖程序如图15.1所示。
图15.1 植物离体快速繁殖技术程序示意图二、植物离体快速繁殖技术的关键1. 防止污染，保证快速繁殖的质量和速度有无污染是影响试管苗质量好坏和整个生产成败的关键因素之一。
植物材料应清洗干净和进行表面消毒，接种后及时检查并弃去污染的培养物，未污染材料进行继代培养和扩大繁殖。
有时已污染的材料由于比较宝贵或认为对培养物的生长影响不大，仍继续使用和扩大繁殖，但应对污染问题予以足够的重视。
污染来源主要有二：一是植物表面消毒不彻底，或是由植物材料内部的微生物随着材料进入培养过程，这些微生物一般不能通过表面消毒清除；二是在操作和培养过程中微生物进入培养器皿。
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
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第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯试管苗
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第一节 蔬菜脱毒与快繁
(3) 驯化
炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。 炼苗具体方法：移植前7d左右，将长有3~5片叶、 高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培 养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管 苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
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第一节 蔬菜脱毒与快繁
３.接种液制备及接种
叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱 布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物 (混入６００目的金刚砂)。
用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面，以右 手指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造 成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种 物用清水洗净，放置在１５～２４的防虫室中， 一般５－１０天可发病。
固体、液体培养基相结合-----扩繁基础 苗----在防虫网室栽植或封闭温室扦插----原原种（或称脱毒小薯）。原原种----原种 1代----原种2代----良种1代-----良种2代。
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第一节 蔬菜脱毒与快繁
2．茎尖培养脱毒
（1）茎尖消毒
一般在室内发芽，芽经热处理（38℃）2 周。然后取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌 条件下先用70％的酒精浸组织15-20秒，再 用2％次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用 无菌水冲洗3次。
(4)掌握甘薯的生物学特性，脱毒与快繁的方法及技术；
(5)掌握芦荟、桔梗等药用植物的快繁技术；
(6)掌握毛白杨、河北杨等绿化苗木的快繁技术。
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第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第一节 蔬菜的脱毒与快繁
蕃茄
植物的快繁与脱毒培养
• 有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的 植物，极易受病毒病的侵染。
• 大多植物病毒不经种子传播（专化性强的 病毒除外）。
• 病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.
三、传统的植物脱毒技术简介
• 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温 热处理等
– 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目 的。
• 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在 植物体内的复制。
第一节 植物脱毒（virus elimination)培养
一、概念 • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞
中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
ISEM
• 脱毒苗的保存与快速繁殖
• 脱毒苗的离体保存与繁殖，建立脱毒种苗 生产繁殖网络体系，木本植物建立隔离的 脱毒苗母本园。
Proliferation medium
Rooting medium
六、植物脱毒培养的意义
• 能够有效地保持优良品种的特性； • 生产无病毒种苗，防止品种退化； • 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； • 节约耕地，提高农产品的商品率；
五、脱毒植物的鉴定方法
指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植 物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种 专用以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄 主植物能够辨别某种病毒的专化性症状。 方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果 待测植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病 毒选择适合的指示植物。
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
第二节果树脱毒与快繁（二） Nhomakorabea草莓脱毒苗的培养
(2) 继代培养：把芽丛割成芽丛小块，转入MS 培养基中，令其长大 。并进行分株，扩大繁殖。 (3) 生根培养：在培养基中加入NAA1或IBA1。
1、热处理脱毒 将草莓植株在40～41℃温度下处理4～6周。
2、微茎尖脱毒 （1）、初代培养 ：取草莓顶芽，用自来水流水
冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，消毒， 切取 0.2mm的茎尖。接入MS + BA0.25 + NAA0.25 培养基中。培养条件为22～25℃，日照16～ 18h光强3000lx。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
1．脱毒种薯生产程序
微茎尖组织培养-----诱导出苗-----联免疫 吸附试验法或指示植物方法鉴定-----脱毒试 管基础苗。
固体、液体培养基相结合-----扩繁基础 苗----在防虫网室栽植或封闭温室扦插----原原种（或称脱毒小薯）。原原种----原种 1代----原种2代----良种1代-----良种2代。
1、病毒种类：苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和 苹果茎沟病毒等 。
2、微尖嫁接脱毒：砧木：去顶的离体培养幼苗， 接穗：试管培养的无毒新稍；嫁接后培养生叶， 移栽即可。
3、热处理脱毒：把植株置于38 ℃下25-50天。 4、茎尖培养脱毒：把0.1-0.3mm的茎尖离体培养。 5、脱毒苗的鉴定：抗血清法，电子 显微镜法，
第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第二节 果树的脱毒与快繁
葡萄
苹果
草莓
第二节果树脱毒与快繁
一、苹果的脱毒与快繁
（一）、苹果的形态特性和生物学特性
苹果（Malus pumila）属落叶乔木，树木高大。果实为 假果。 苹果喜凉；喜光；适合在微酸性到中性土壤中栽种。
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第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第一节 蔬菜的脱毒与快繁
蕃茄
马铃薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁源自一、马铃薯的组织培养第一节 蔬菜脱毒与快繁
微型薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯是一种全球性的重要经济作物。 适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输， 既是一种重要的粮食作物也是一种调节市 场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美 洲，当被发现可以食用后，很快传到世界 各地，成为栽培很广的一种作物。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
３.接种液制备及接种
叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱 布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物 (混入６００目的金刚砂)。 用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面，以右 手指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造 成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种 物用清水洗净，放臵在１５～２４的防虫室中， 一般５－１０天可发病。
第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
本章主要内容(4学时)
蔬菜的脱毒与快繁 果树的脱毒与快繁 花卉植物的脱毒与快繁 农作物的脱毒与快繁 药用植物的试管快繁 树木的脱毒与快繁
第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
本章教学目的与要求
(1)掌握马铃薯的生物学习性，掌握马铃薯脱毒培养的过程以及 马铃薯脱毒苗的鉴定方法；掌握番茄的生物学特性及快速繁 殖方法； (2)掌握苹果的脱 毒方法与快繁技术；掌握葡萄的脱毒与快技 术；掌握草莓的脱 毒与快繁技术； (3)掌握兰花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牵牛、百合等花卉 的生物学特性，组培快速繁殖方法及自然繁殖法； (4)掌握甘薯的生物学特性，脱毒与快繁的方法及技术； (5)掌握芦荟、桔梗等药用植物的快繁技术； (6)掌握毛白杨、河北杨等绿化苗木的快繁技术。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2．茎尖培养脱毒
（1）茎尖消毒
一般在室内发芽，芽经热处理（38℃）2 周。然后取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌 条件下先用70％的酒精浸组织15-20秒，再 用2％次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用 无菌水冲洗3次。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
取材和接种
把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶，露 出圆滑的生长点，留1-2个叶原基，0.2— 0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上， 每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA， 2%蔗糖，p H值5.8。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯病毒的种类
危害有17种之多，如X病毒、S病毒、 Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤 形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
（一）、马铃薯特性和生物学习性
1、形态特性 (1)根 根系由出生根和匍匐根组成。 (2)茎 分地上部分和地下部分。 (3)叶 全缘，心脏形。 (4)花 为聚伞花序。 (5)果实 浆果。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2、 生物学习性
马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻。 发芽适温为12~18℃。 地上茎叶生长温度为17~21℃。 块茎形成要求昼温14~24℃，夜温12~14℃。 结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥 沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表 面粗糙和薯形不整。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
第一节 蔬菜脱毒与快繁
培养条件：
温度：21~25℃ 光照度：2000-3000 lx 光照时间：12h/d 2-3周长愈伤，4-5周长绿点，3--6月 长成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽 很快的扔掉。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
（2） 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒） 鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次） 采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。 取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培 养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发 育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁殖，此 法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗多节接种 在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯继代培养基：
MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10，3%蔗糖；
20-25℃，3000-4000LX，14-16hr光照；
每3周继代一次，单芽茎段约1厘米；
原则试管苗用2年—3年。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯试管苗
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(3) 驯化
炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
1．脱毒种薯生产程序
微茎尖组织培养-----诱导出苗-----联免疫 吸附试验法或指示植物方法鉴定-----脱毒试 管基础苗。 固体、液体培养基相结合-----扩繁基础 苗----在防虫网室栽植或封闭温室扦插----原原种（或称脱毒小薯）。原原种----原种 1代----原种2代----良种1代-----良种2代。
（二）、马铃薯脱毒技术
通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体 内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、 PVM、PSW等病毒。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
我国马铃薯栽培现状
全国现有马铃薯播种面积300多万公顷， 每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿 公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。
我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷， 是世界单产最高国这瑞士（48.80吨/公顷） 的1/4。最主要的因素就是种薯质量差，品 种布局不合理。
炼苗具体方法：移植前7d左右，将长有3~5片叶、 高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培 养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管 苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
（三）、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定 •在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常 用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒 很容易通过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 •马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日 红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物 应在无虫网室中培养。
第一节蔬菜脱毒与快繁
（四）、马铃薯无病毒株的繁殖 （１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
第一节蔬菜脱毒与快繁
二、番茄的组织培养