抗菌肽体外抑菌实验方法

微量肉汤稀释法（borth microdilution

method ）

实验方法：

1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280

g/L的储备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA稀释，在用

0.01%乙酸（含0.2% BSA溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双

倍稀释，得到质量浓度为640, 320, 160……1.25 mg/L 的共10个梯度的系列稀释液，4 ?C下保存备用。

2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于

灭菌试管中的MH肉汤，37 C 180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至2*10八5-7*10八5 CFU/mL向无菌的96孔平板中的1-11 孔各加入100 □啲菌液，12孔不加入菌液而加入100卩LM肉汤，然后从1〜10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。

37 ?C, 90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为

64, 32, 16,……0.125 mg/L。（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍）

3.最小抑菌浓度MIC （mininmal inhibitory concentration ）就是

能阻止50%以上细菌生长的最小肽浓度。用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC的确定按照比对照孔（11孑L）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。

4.最小杀菌浓度MB（minimal bactericidal concentration ）就是

能抑制任何残余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10卩涂布到MH琼脂平板上，37化培养18 h, 以此来确定肽的MBC

参考文献：

【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较J].中国兽医学报，2004, 24 （3） : 270-273.

抗菌肽的体外抑菌实验（平板法）

1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用

剂量同样做6个浓度的稀释

2.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10八6 CFU/mL

3.制板：取 1 mL 指示菌注入培养皿中，倒入灭菌的固体LB 培养基摇

匀，放冷后制成平板。

4.用打孔器打孔法来确定抑菌效果。

参考文献：

李晓营，等. 一种抗菌肽的体外抑菌实验、安全性评价及其对肠道菌群的影响[J]. 广东饲料，2014，23（2）：25-28

（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）