颅脑损伤动物模型的步骤及详细说明

颅脑损伤动物模型的步骤及详细说明
•原型物种人
•来源颅脑打击致颅脑损伤
•模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g
•实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

•实验周期7d
•建模方法1. 称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，头部正中剃毛后用碘酒及酒精擦拭手术区域。

2. 沿头部正中稍偏右切开头皮约2cm，钝性分离软组织及骨外膜后暴露
颅骨，在人字缝前方2 mm，颅骨中线旁2 mm，用颅骨钻打开直径为
4 mm的圆形骨窗，保持硬脑膜完好无损，采用自由落体撞击至脑挫伤
的方法。

3. 用一个40g的金属重物自25cm高处垂直坠落，撞击置在硬脑膜上
的圆柱体，致伤冲击力为1000g·cm造成右顶叶脑挫裂伤，致伤面积为4mm×4mm，致重度脑损伤，然后用骨蜡封闭骨窗，缝合头皮。

4. 待大鼠苏醒后自由饮水，正常饲养。

5. 对照组仅作右顶叶相应部位颅骨开窗，不致伤。

样本采集：
1.血液标本留取：分别于术后24h、72h及7d水合氯醛麻醉大鼠后,于
下腔静脉取血2ml，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血
清，放入-80冰箱冻存。

2.脑组织标本留取：取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，
经OCT包埋做冰冻切片，切片10um。

•应用疾病模型
1.认知能力的检测
颅脑损伤后大鼠的神经功能受到损伤，认知能力也会受到影响。

术后应用Morris水迷宫对各组大鼠进行为期6天的训练后开始实验，以排除对环境不适应造成的应激影响,剔除不健康的大鼠。

2.细胞凋亡检测
TBI 会产生大量的细胞凋亡。

凋亡是发生在多细胞有机体中的一种程序性的细胞死亡过程，其中多种生化过程会引起细胞特征性的改变，特别是形态学上的改变，最后导致细胞死亡。

用TUNEL法检测细胞凋亡。