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1876年Pasteur首次提 取出了内生细菌
国外，从28
种健康植物的 器官中分离出 内生细菌并初 步鉴定
国内，起步较
晚（20世纪70 年代）相继对 多种作物内生 细菌进行相关 研究
研究深入，从30多种植物 分离出80个属内生细菌
实验方案
统计内生细菌的种群数量 记录其菌落形态特征
生理生化指标简单测定
TXPZ-14
寡养单胞菌属
TXPZ-16ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
土地杆菌
Pedobacte r
Chryseobacteriu m
TXPZ-02,12 TXPZ-9
根据菌落菌体形态、培
养性状和生理生化特性， 结合16S rDNA序列分析 可知，共分离出11属。
待讨论问题
简单传统培养方法
长期系统高精密研究
单纯一个生长时期
多个生长时期
形状 圆形 圆形 椭圆形 圆形 圆形 圆形 圆形 圆形 椭圆形 圆形 椭圆形 圆形 圆形 椭圆形 椭圆形 圆形 圆形 圆形 圆形
颜色 绿色 浅黄色 白色 棕绿色 乳白色 白色 黄色 白色 浅黄色 亮黄色 乳白色 白色 白色 乳白色 白色 浅黄色 浅黄色 乳白色 白色
透明 否 否 是 否 否 否 否 否 是 否 是 否 否 否 是 否 否 否 是
婆枣根部组织
婆枣的各个器官
菌属
芽孢杆菌属 假单胞杆菌
细菌编号
TXPZ-08 ,04,15 TXPZ-03,17,05
葡萄球菌属
TXPZ-11,18
节杆菌属
TXPZ-10
土壤杆菌 属
根瘤菌属
Aagrobacteriu m sp.
Williamsia sp.
TXPZ-19 TXPZ-07 TXPZ-01,06,13
湿斯捷连科属
光泽 无 有 无 无 无 有 无 无 无 有 无 无 无 有 无 无 无 无 有
边缘 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐
凹凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸
生理生化测定
革兰氏染色
婆枣根部内生细菌多样性的研究
姓名：张青 指导老师：崔娜 完成时间：2014.5
论文构架
1 研究目的和研究现状
2 实验方法 3 结果与分析
4 待讨论问题
研究目的
本实验采用传统培养方法，从新 鲜婆枣根部分离、纯化根部内生细菌， 研究婆枣根部内生细菌的多样性。可为 开发婆枣细菌资源提供基础。
国内外研究现状
测定16S rDNA序列
PCR流程图
配置扩增反应 体系
PCR扩增
电泳
构建系统 发育树
相似性分 析测菌属
测序
实验结果及分析
表1 枣根部组织内生细菌的分布情况
枣组织 根
菌落数 (×104cfu·g-1)
10.043
菌株数 85
种类 11
表2 各种培养基菌种种类数
培养 基
NA
PDA
KB
TSA CYM KMB 蛋水 牛肉
菌种 数
5
5
3
4
2
2
2
3
表3 分离得到婆枣根部内生细菌
菌落编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
大小 2mm 3mm 3mm 3mm 4mm 2mm 3mm 2mm 3mm 2mm 2mm 3mm 2mm 1mm 4mm 3mm 2mm 2mm 3mm
生理生化管反应
大部分为革兰氏阳性菌，少部分为革兰氏阴性菌
PCR扩增
• 将分离的细菌选取19个菌株进行标号（1,2,3……19），并 将编号菌种依次命名为TXPZ-01- TXPZ-19。特异性地对 16S rDNA 部分区段进行扩增。
1 2 34567M
图3 电泳图谱
图4 枣内生细菌及其同源菌株基于16S rRNA序列的系统发育树
国外，从28
种健康植物的 器官中分离出 内生细菌并初 步鉴定
国内，起步较
晚（20世纪70 年代）相继对 多种作物内生 细菌进行相关 研究
研究深入，从30多种植物 分离出80个属内生细菌
实验方案
统计内生细菌的种群数量 记录其菌落形态特征
生理生化指标简单测定
TXPZ-14
寡养单胞菌属
TXPZ-16ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
土地杆菌
Pedobacte r
Chryseobacteriu m
TXPZ-02,12 TXPZ-9
根据菌落菌体形态、培
养性状和生理生化特性， 结合16S rDNA序列分析 可知，共分离出11属。
待讨论问题
简单传统培养方法
长期系统高精密研究
单纯一个生长时期
多个生长时期
形状 圆形 圆形 椭圆形 圆形 圆形 圆形 圆形 圆形 椭圆形 圆形 椭圆形 圆形 圆形 椭圆形 椭圆形 圆形 圆形 圆形 圆形
颜色 绿色 浅黄色 白色 棕绿色 乳白色 白色 黄色 白色 浅黄色 亮黄色 乳白色 白色 白色 乳白色 白色 浅黄色 浅黄色 乳白色 白色
透明 否 否 是 否 否 否 否 否 是 否 是 否 否 否 是 否 否 否 是
婆枣根部组织
婆枣的各个器官
菌属
芽孢杆菌属 假单胞杆菌
细菌编号
TXPZ-08 ,04,15 TXPZ-03,17,05
葡萄球菌属
TXPZ-11,18
节杆菌属
TXPZ-10
土壤杆菌 属
根瘤菌属
Aagrobacteriu m sp.
Williamsia sp.
TXPZ-19 TXPZ-07 TXPZ-01,06,13
湿斯捷连科属
光泽 无 有 无 无 无 有 无 无 无 有 无 无 无 有 无 无 无 无 有
边缘 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐 整齐
凹凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸 凸
生理生化测定
革兰氏染色
婆枣根部内生细菌多样性的研究
姓名：张青 指导老师：崔娜 完成时间：2014.5
论文构架
1 研究目的和研究现状
2 实验方法 3 结果与分析
4 待讨论问题
研究目的
本实验采用传统培养方法，从新 鲜婆枣根部分离、纯化根部内生细菌， 研究婆枣根部内生细菌的多样性。可为 开发婆枣细菌资源提供基础。
国内外研究现状
测定16S rDNA序列
PCR流程图
配置扩增反应 体系
PCR扩增
电泳
构建系统 发育树
相似性分 析测菌属
测序
实验结果及分析
表1 枣根部组织内生细菌的分布情况
枣组织 根
菌落数 (×104cfu·g-1)
10.043
菌株数 85
种类 11
表2 各种培养基菌种种类数
培养 基
NA
PDA
KB
TSA CYM KMB 蛋水 牛肉
菌种 数
5
5
3
4
2
2
2
3
表3 分离得到婆枣根部内生细菌
菌落编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
大小 2mm 3mm 3mm 3mm 4mm 2mm 3mm 2mm 3mm 2mm 2mm 3mm 2mm 1mm 4mm 3mm 2mm 2mm 3mm
生理生化管反应
大部分为革兰氏阳性菌，少部分为革兰氏阴性菌
PCR扩增
• 将分离的细菌选取19个菌株进行标号（1,2,3……19），并 将编号菌种依次命名为TXPZ-01- TXPZ-19。特异性地对 16S rDNA 部分区段进行扩增。
1 2 34567M
图3 电泳图谱
图4 枣内生细菌及其同源菌株基于16S rRNA序列的系统发育树