一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测

一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测

2.1.9.1 细菌或真菌污染总菌数的检测

2.1.9.1.1 目的

检测一次性使用医疗用品消毒后残存细菌或真菌状况，存放一定时间后是否被细菌或真菌污染及其污染的程。

2.1.9.1.2 适用范围

临床用于病人检查、治疗、护理用指套、手套、吸痰管、**窥镜、肛镜、印模托盘、治疗巾、皮肤清洁巾、擦手巾、压舌板、臀垫、中单等接触完整粘膜、皮肤的各类一次性使用医疗、护理用品。

2.1.9.1.3 试验器材

（1）营养琼脂培养基：见附录A。

（2）沙堡琼脂培养基（真菌培养用）：见附录A。

（3）无菌检查用洗脱液：见附录A。

（4）磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）：见附录A。

（5）100级洁净室或100级层流超净工作台（下简称超净台）。

（6）安全操作箱（用于防止真菌孢子污染周围环境）

（7）刻度吸管（1.0mol、5.0mol）

2.1.9.1.4 抽样要求

（1）抽样方法

为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。随机选取不同3个批号的产品。根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数

量的样品，尽量选自多个大包装。不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。

（2）抽样数量

①对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：随机选取不同3个批号的产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。从每个大包装中随机抽取20个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。）作为该品牌、批号产品抽检样品。其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。

②对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.9.1.4（2）①。

③对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号的产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.9.1.4（2）①。

2.1.9.1.5 检测样本的制作

（1）检测数量

①每批样品首次检测时，检测5个样本，分别在所选的5个最小销售包装内抽取。

②必要时进行复测。复测时，检测10个样本，分别在所选的10个最小销售包装内抽取。

③以下的样本制作均按首次检测设计，复测时样本量加倍。

（2）样本制作

①垫单、手套等产品的样本制作：分别在所选5个最小销售包装内样品的不同部位剪取10g重样片。共5份。分别剪碎后，各放入一含100ml洗脱液试管中，震荡20s或振打80次。待样本碎片沉淀后，取各管洗液分别进行检测。

②指套等小件物品的样本制作：在所选5个最小销售包装内样品中各选一个样本，共5份。分别剪碎后，各投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。震荡20s或振打80次，取各管洗液分别进行检测。

③棉签.在所选5个最小销售包装内样品中，各选5支为一个样本，共5份。分别直接投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。震荡20s或振打80次，取各管洗脱液分别进行检测。

④对不能用上述方法采样的物品，在所选5个小包装中各选一个样本。共5份。分别用无菌棉拭子涂抹法采样。每样本涂抹采样面积25cm。采样后，按无菌操作原则剪下棉拭采样端置于10ml采样液试管中，每管一份样本。震荡20s或振打80次，取各管采样液分别进行检测。

2.1.9.1.6 细菌检测操作程序

（1）样本制备后，应立即进行检测。

（2）每一样本洗脱液或采样液接种2个平皿，每个平皿接种1.0ml。当估计含菌量过高时（每平板生长菌落数超过300个），应用PBS对洗脱液或采样液作适当稀释后再接种。为取得适宜的菌落数，应接种2个～3个不同稀释度样液。每吸取一个稀释度样液，换一支无菌吸管。

（3）将45℃左右融化的营养琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中。每平皿约15ml～20ml。盖好、与样液混均、平放。待培养基凝固后，翻转平板使底向上，置37℃恒温培养箱内培养48h后，计数菌落数。

（4）菌落数计算：接种洗脱液或采样液原液进行培养者，即使生长的菌落数<15cfu/平板时，仍按实际生长菌落数计算；接种不同稀释度洗脱液或采样液进行培养时、应选择生长的菌落数在15cfu/平板～300cfu/平板之间的稀释度进行菌落数计算。

（5）检测时应设阴性、阳性对照组。阴性对照组：①用同批营养琼脂培养基倾注平板直接培养；②分别吸取1.0ml同批洗脱液与PBS各2份，分别接种平皿、倾注营养琼脂培养基进行培养。阳性对照组：接种金黄色葡萄球菌（ATCC6538）18h新鲜肉汤培养物1.0ml 于平皿内，倾注营养琼脂培养基进行培养。培养条件为37℃恒温培养培养48h后观察结果。若阴性对照组有菌生长，说明其中培养基、洗脱液、PBS灭菌不合格或被污染；若阳性对照组无菌生长或生长的

菌落不正常，说明其中使用的培养基、培养条件可能存在问题或均存在问题。以上两种情况均需更换培养基重新进行试验。

2.1.9.1.7 真菌检测操作程序

（1）真菌的检测操作程序与细菌检测操作程序基本相同，主要

区别在于所用培养基、培养温度、培养时间不同。真菌培养使用沙堡琼脂培养基。倾注法接种。20℃～25℃恒温培养72h，计数菌落数。为防止真菌孢子飞扬污染环境，真菌菌落计数应在安全操作箱内进行。

（2）检测时设阴性、阳性对照组。方法与2.1.9.1.6（5）相同。阳性对照组接种白色念珠菌（ATCC10231）。20℃～25℃恒温培养72h 观察结果。

2.1.9.1.8 结果计算

将2个平板计数所得菌落数的平均值乘以稀释倍数即得洗脱液

或采样液中每毫升所含菌量（cfu/mL）。根据每毫升所含菌量推算出

每个样本的菌量。其表达单位可根据情况使用cfu/cm、cfu/g、cfu/样本。

2.1.9.1.9 注意事项

（1）严格无菌操作防止污染。

（2）同批样品检验洗脱振敲次数要保持一致。振敲轻重尽量保

持一致。

（3）吸量管取液量应准确，减少使用中误差。

（4）样液接种后应尽快倾注培养基，避免样液干燥于平皿上，

影响结果的准确性。