蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定
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（1.广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广州 云 510640；2. 南省畜牧兽医科学院，昆明 650224）
摘 要：为监测广东省蓝舌病流行状况，2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品，检测虫媒病病原，对经 RT-
PCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝，研磨后离心取上清转接 C6/
关键词：蓝舌病病毒；分离；鉴定；血清型；序列分析
中 图 分 类 号 ：S852.659.4
文献标志码：A
文 章 编 号 ：0366-6964（2017）07-1281-07
IsolationandIdentificationofBluetongueVirusSerotype7FieldIsolate
畜牧兽医学报 2017，48（7）:1281-1287
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.07.012
蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定
吕敏娜1# ，杨 恒2# ，孙铭飞1，李 娟1，林栩慧1，张健騑1， 廖申权1，戚南山1，吴彩艳1，李华春2* ，陈琴苓1*
LÜ Min-na1# ，YANG Heng2# ，SUN Ming-fei1，LIJuan1，LIN Xu-hui1，ZHANGJian-fei1， LIAOShen-quan1，QINan-shan1，WU Cai-yan1，LIHua-chun2* ，CHEN Qin-ling1*
（1.GuangdongOpenLaboratoryof Veterinary Public Health，GuangdongProvincial KeyLaboratoryof AnimalDiseasePrevention，Instituteof AnimalHealth，Guangdong
蓝 舌 病 是 由 蓝 舌 病 病 毒 引起 经雄性库蠓通过吸 （bluetongue，BT）
（bluetonguevirus，BTV） ，
收 稿 日 期 ：2016-11-15
公益性行业 农业 科研专项 广东省科技计划项目 基金项目：
（）
（201303035）；
（2015A020209075；2015A020209084）
Academyof AgriculturalSciences，Guangzhou510640，China； 2.YunnanAnimalScienceandVeterinaryInstitute，Kunming650224，China）
Abstract:In2014，cattlebloodsampleswerecollectedfrom Guangdongprovinceandvector-borne pathogenscontainedinthem weredetectedinthepresentstudy.Sampleswhichweredetectedas BTVpositivebyquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction （qRT-PCR）were isolatedandidentified.Embryonatedchickeneggsweresubsequentlyinoculatedandtheirlivers wereharvestedtopassageonC6/36andBHK-21cells，respectively.Extensivecytopathicchangeswereobserved.AsubsequentqRT-PCRassaytargetwithVP7geneandSEM observationresultsfurtherconfirmedthepresenceofBTV，andnamedasGD/ST2014.Inaddition，VP2gene fragmentwasusedforgenotyping.Andcombined with VNTtestresults，thegenotypeofthe isolateobtainedinthepresentstudy wereidentifiedasBTV-7.This wasthefirstreportthat bluetonguevirusserotype7fieldisolatewasisolatedfromcattleinChina. Keywords:bluetonguevirus；isolation；identification；serotype；sequenceanalysis
恒 男 （1978-）， ，四川西
1282
畜牧兽医学报
卷 48
血叮咬传播的虫媒病毒病，18世纪首次在南非好望
角发现 年 ，1902 首次报道此病。蓝舌病分布于全世
界 热 带 、亚 热 带 和 温 带 地 区 ，是 世 界 动 物 卫 生 组 织
规 （OIE） 定的必须通报的动物传染病 。 [1] 该病造成
严重的经济损失 全， [2-3] 世界每年因蓝舌病造成的损
失在30亿美元以上 。 [4-5] 蓝舌病病毒呈二十面体对
称，无囊膜，由10条双链 RNA 组成，编码7种结构
作者简介：吕敏娜 女 （1967-）， ，广东潮州人，副研究员，硕士，主要从事预防兽医学研究 杨 ，E-mail:gdczmn@163.com；
昌人，副研究员，博士，主要从事动物虫媒病毒研究。#并列第一作者
通信作者 李华春 陈琴苓 *
：
，E-mail:lihuachun@hotmail.com；
，E-mail:54402100百度文库@qq.com
36细胞和 BHK-21细胞，出现 CPE，RT-PCR检测蓝舌病病毒的VP7基因并进行序列比对，电镜观察病毒粒子，证
实分离到蓝舌病病毒，命名为 GD/ST2014。进一步扩增VP2基因，进行系统发育树分析，以及血清中和试验，表明
此分离株为血清型7型。这是国内首次报道牛源蓝舌病病毒血清型7型的分离鉴定。
摘 要：为监测广东省蓝舌病流行状况，2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品，检测虫媒病病原，对经 RT-
PCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝，研磨后离心取上清转接 C6/
关键词：蓝舌病病毒；分离；鉴定；血清型；序列分析
中 图 分 类 号 ：S852.659.4
文献标志码：A
文 章 编 号 ：0366-6964（2017）07-1281-07
IsolationandIdentificationofBluetongueVirusSerotype7FieldIsolate
畜牧兽医学报 2017，48（7）:1281-1287
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.07.012
蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定
吕敏娜1# ，杨 恒2# ，孙铭飞1，李 娟1，林栩慧1，张健騑1， 廖申权1，戚南山1，吴彩艳1，李华春2* ，陈琴苓1*
LÜ Min-na1# ，YANG Heng2# ，SUN Ming-fei1，LIJuan1，LIN Xu-hui1，ZHANGJian-fei1， LIAOShen-quan1，QINan-shan1，WU Cai-yan1，LIHua-chun2* ，CHEN Qin-ling1*
（1.GuangdongOpenLaboratoryof Veterinary Public Health，GuangdongProvincial KeyLaboratoryof AnimalDiseasePrevention，Instituteof AnimalHealth，Guangdong
蓝 舌 病 是 由 蓝 舌 病 病 毒 引起 经雄性库蠓通过吸 （bluetongue，BT）
（bluetonguevirus，BTV） ，
收 稿 日 期 ：2016-11-15
公益性行业 农业 科研专项 广东省科技计划项目 基金项目：
（）
（201303035）；
（2015A020209075；2015A020209084）
Academyof AgriculturalSciences，Guangzhou510640，China； 2.YunnanAnimalScienceandVeterinaryInstitute，Kunming650224，China）
Abstract:In2014，cattlebloodsampleswerecollectedfrom Guangdongprovinceandvector-borne pathogenscontainedinthem weredetectedinthepresentstudy.Sampleswhichweredetectedas BTVpositivebyquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction （qRT-PCR）were isolatedandidentified.Embryonatedchickeneggsweresubsequentlyinoculatedandtheirlivers wereharvestedtopassageonC6/36andBHK-21cells，respectively.Extensivecytopathicchangeswereobserved.AsubsequentqRT-PCRassaytargetwithVP7geneandSEM observationresultsfurtherconfirmedthepresenceofBTV，andnamedasGD/ST2014.Inaddition，VP2gene fragmentwasusedforgenotyping.Andcombined with VNTtestresults，thegenotypeofthe isolateobtainedinthepresentstudy wereidentifiedasBTV-7.This wasthefirstreportthat bluetonguevirusserotype7fieldisolatewasisolatedfromcattleinChina. Keywords:bluetonguevirus；isolation；identification；serotype；sequenceanalysis
恒 男 （1978-）， ，四川西
1282
畜牧兽医学报
卷 48
血叮咬传播的虫媒病毒病，18世纪首次在南非好望
角发现 年 ，1902 首次报道此病。蓝舌病分布于全世
界 热 带 、亚 热 带 和 温 带 地 区 ，是 世 界 动 物 卫 生 组 织
规 （OIE） 定的必须通报的动物传染病 。 [1] 该病造成
严重的经济损失 全， [2-3] 世界每年因蓝舌病造成的损
失在30亿美元以上 。 [4-5] 蓝舌病病毒呈二十面体对
称，无囊膜，由10条双链 RNA 组成，编码7种结构
作者简介：吕敏娜 女 （1967-）， ，广东潮州人，副研究员，硕士，主要从事预防兽医学研究 杨 ，E-mail:gdczmn@163.com；
昌人，副研究员，博士，主要从事动物虫媒病毒研究。#并列第一作者
通信作者 李华春 陈琴苓 *
：
，E-mail:lihuachun@hotmail.com；
，E-mail:54402100百度文库@qq.com
36细胞和 BHK-21细胞，出现 CPE，RT-PCR检测蓝舌病病毒的VP7基因并进行序列比对，电镜观察病毒粒子，证
实分离到蓝舌病病毒，命名为 GD/ST2014。进一步扩增VP2基因，进行系统发育树分析，以及血清中和试验，表明
此分离株为血清型7型。这是国内首次报道牛源蓝舌病病毒血清型7型的分离鉴定。