HPLC法测定四季感冒片中连翘苷的含量

HPLC法测定四季感冒片中连翘苷的含量

【摘要】目的采用HPLC法测定四季感冒片中连翘苷的含量。方法采用外标一点法,Diamonsil ODS1 C18色谱柱,乙腈-水(25∶75)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为277 nm。结果连翘苷在0.112 8～0.902 4 μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y＝5.795 68X＋1.843 19,r＝0.999 3,平均加样回收率为98.6%,RSD＝1.82%(n＝6)。结论本法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为四季感冒片中连翘苷定量分析提供了有效的方法。

【关键词】四季感冒片；连翘苷；高效液相色谱法；含量测定

Abstract：Objective To establish the method for detemining the content of Phillyin in Siji Ganmao Pian by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 column was used with acetonitrile-water (25∶75) as the mob ile phase, detection wavelength as 277 nm and flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.1128～0.9024 μg for Phillyin and linear equation was Y＝5.795 68X＋1.843 19, r＝0.999 3. The average recovery was 98.6% and RSD was 1.82% (n＝5). Conclusion This method was simple, accurate and proper, the reduplication of the result was good. The method can be provide for quantitative analysis of Phillyin in Siji Ganmao Pian.

Key words：Siji Ganmao Pian；Phillyin；HPLC；content determination

四季感冒片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第13册中,功能清热解表,用于四季风寒感冒,特别适用于体弱者,妊娠妇女因感冒引起的发热头痛、鼻流清涕、咳嗽口干、咽喉疼痛、恶心厌食等。处方由紫苏叶、荆芥、连翘、大青叶、防风、桔梗、陈皮、香附(炒)、炙甘草组成[1]。原标准中只有鉴别项检查,没有含量控制项。为了更好地控制四季感冒片的质量,我们对四季感冒片处方进行了分析,方中连翘清热解毒、消肿散结,用于风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑、热淋尿闭,与本方主治一致,故选择连翘中连翘苷作为本品的质控指标,采用高效液相色谱法对四季感冒片中连翘苷的含量进行测定。本方法简便快速,稳定可靠,专属性强。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：SPD-10A,日本岛津；紫外分光光度仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H,上海科导超声仪器有限公司。

连翘苷对照品(批号110821-200406,供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；四季感冒片(批号20060102、20060103、20060104)由河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Diamonsil ODSI C18 色谱柱；乙腈-水(25∶75)为流动相,流速1.0

mL/min；检测波长为277 nm。理论塔板数按连翘苷峰计算应不低于3 000[2]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取连翘苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品20片,研细,取约2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量。摇匀,滤过,精密量取续滤液10 mL,蒸至近干,加中性氧化铝1.5 g,拌匀,加置中性氧化铝柱(100～200目,3 g,内径1 cm)上,用70%乙醇70 mL洗脱,收集洗脱液,浓缩至干,残渣加50%甲醇溶解,转移至5 mL量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

共2页: 上一页12下一页

2.3 线性关系的考察

精密称取连翘苷对照品,分别制成浓度为11.28、22.56、45.12、67.68、90.24 μg/mL的5个对照品溶液,分别吸取上述对照品溶液各10 μL进样,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,以不同浓度为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程Y＝5.795 68X ＋1.843 19,r＝0.999 3(n＝5),表明连翘苷在0.112 8～0.902 4 μg之间呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

取同一对照品溶液10 μL,重复进样6次,测定连翘苷峰面积并计算峰面积的相对标准偏差,测定结果RSD＝1.20%,表明本法精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一批号(批号20060104)供试品,按供试品溶液制备方法制备6份供试液,分别测定连翘苷峰面积并分别计算连翘苷含量和含量的相对标准偏差,RSD＝1.62%,表明重复性良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h测定连翘苷峰面积并计算连翘苷峰面积积分值的相对标准偏差,RSD＝1.75%(n＝5),表明制备的供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

取同一批号已知含量供试品(批号060104,20片重7.218 2 g,每片重0.360 9 g,连翘苷含量0.245 mg/g)1.0 g,研细,精密称定,共取6份,均分别加入连翘苷对照品适量,按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样量10 μL,测定连翘苷峰面积并计算连翘苷含量(见表1)。结果平均回收率为98.6%,RSD＝1.82%(n＝6)。表1 加样回收率试验结果（略）

2.8 样品测定

按照供试品溶液制备方法制备供试液,共对3批产品进行了测定,结果见表2。表2 连翘苷含量测定结果（略）

2.9 系统适用性试验

取缺连翘的样品,按供试品溶液制备法制备阴性样品后测定,在连翘苷相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。

3 讨论

为了保证供试品中连翘苷提取完全,对供试品超声处理时间进行了考察,分别超声处理10、20、30、40、50 min,测得样品中对应的连翘苷含量分别为54.78、78.23、88.25、88.53、88.43 μg/片,试验结果表明,超声处理30 min以上,能够提取完全。样