TRIM24 多形性胶质母细胞瘤 解读
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15
琼脂克隆形成实验
16
17
18
LY294002： PI3K/AKT通路抑制剂
MTT检测
19
RT-PCR
染色质免疫共沉淀CHIP
20
TRIM24Δ：缺少PHDBromo结构域的突变体
21
CHIP
22
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
多形性胶质母细胞瘤：Glioblastoma multiforme（GBM）
GBM 是最常见且致死 率极高的脑部肿瘤； 具有高侵润性，可大范 围转移，与健康脑组织 混合在一起，难以治愈。
2
TRIM24：又称TIF1α（转录中介因子），是TRIM蛋白家族的一员。
RING
B-box
Coiled coil
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
23
替莫唑胺 Temozolomide，TMZ
在体内生理pH值下，它经非酶途径 快速转化为一种细胞毒性活性化合物 MTIC[5-(3-甲基三氮烯-1-)咪唑-4-甲酰 胺]而发挥作用。 MTIC的细胞毒性可能主要源于其DNA 烷基化(甲基化)作用，烷基化主要发 生在鸟嘌呤的O6和N7位。
优点： 1）PFS无需非要等到出现死亡事件，因此随访时间会大大 缩短 2）需要的病例数较少。 3）较少受非研究药物治疗的影响 缺点： 1）PFS的测量不如OS精确。 2）PFS的确认对于许多种类的肿瘤比较困难 10 3）频繁的放射学检查对病人本身就有负面影响
Overall survival(OS) 总生存数
PHD(植物同源结构域plant homeodomain):一种进化保守的锌指结构 域, 能特异性识别组蛋白的甲基化修饰. bromo结构域，特异性识别组蛋白末端乙酰化的赖氨酸位点，在调控 基因转录方面具有非常重要的作用
3
TRIM24与肿瘤 功能： 1）参与染色体重塑(H3K4me0， H3K23ac) 2）结合并降解P53 3）与ER,AR,RAR相互作用并调节其转录活性 4）在白血病，前列腺癌，乳腺癌中促进肿 瘤生长
4
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
5
免疫组化染色
NB:正常脑组织
OG:少突神经胶质瘤
Oncogene,2014.1
TRIM24 promotes glioma progression and enhances chemoresistance through activation of the PI3K/Akt signaling pathway
胡高磊 2014.6.13
1
背景介绍
24
T98
U87
MTT assay
平板克隆形成试验
25
Caspase-7可以被剪切而激活，激活的caspase7引起DNA修复酶 PARP的剪切，进而促进细胞的凋亡。
26
TUNEL检测
流式细胞分析
27
28
MGMT:DNA修复酶，可以 修复TMZ诱导的DNA损伤。
29
荧光素酶报告基因
RelA :编码NF-κB 的一个亚基
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
9
总生存期（Overall survival,OS）：从随机化开始至因 任何原因引起死亡的时间。该指标被认为是肿瘤临床 试验中最佳的疗效终点。
优点：便于统计，准确度高 缺点：需要样本较多，随访时间较长
PFS（Progression-Free-Survival，无进展生存期）：从 随机化到病人出现肿瘤进展或死亡的时间。
32
总生存数OS
33
无进展生存期PFS
34
总结
1.TRIM24能促进恶性 胶质瘤的发展
2.TRIM24通过PI3K/AKT 通路提高GBM对化学 药物的抵抗
35
36
37
PA:纤维性星形细胞瘤 grade I
DA:弥漫性星形细胞瘤 AA:间变型星形细胞瘤 grade II gradeIII
6
7
TRIM24水平在复发的GBM病人组织中明显上调
8
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
12
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
13
14
U251 TRIM24蛋白水平相对较低
30
结果表明：TRIM24通过促进MGMT表达使细胞对TMZ产生抗性
31
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
Progression-free survival(PFS) 无进展生存期
中位存活期 Low TRIM24 13.9month High TRIM24 11.0month
中位无进展生存期 Low TRIM24 6.5month High TRIM24 5.3month11Cox比例风险回归模型
HR:hazard ratio风险比
琼脂克隆形成实验
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17
18
LY294002： PI3K/AKT通路抑制剂
MTT检测
19
RT-PCR
染色质免疫共沉淀CHIP
20
TRIM24Δ：缺少PHDBromo结构域的突变体
21
CHIP
22
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
多形性胶质母细胞瘤：Glioblastoma multiforme（GBM）
GBM 是最常见且致死 率极高的脑部肿瘤； 具有高侵润性，可大范 围转移，与健康脑组织 混合在一起，难以治愈。
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TRIM24：又称TIF1α（转录中介因子），是TRIM蛋白家族的一员。
RING
B-box
Coiled coil
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
23
替莫唑胺 Temozolomide，TMZ
在体内生理pH值下，它经非酶途径 快速转化为一种细胞毒性活性化合物 MTIC[5-(3-甲基三氮烯-1-)咪唑-4-甲酰 胺]而发挥作用。 MTIC的细胞毒性可能主要源于其DNA 烷基化(甲基化)作用，烷基化主要发 生在鸟嘌呤的O6和N7位。
优点： 1）PFS无需非要等到出现死亡事件，因此随访时间会大大 缩短 2）需要的病例数较少。 3）较少受非研究药物治疗的影响 缺点： 1）PFS的测量不如OS精确。 2）PFS的确认对于许多种类的肿瘤比较困难 10 3）频繁的放射学检查对病人本身就有负面影响
Overall survival(OS) 总生存数
PHD(植物同源结构域plant homeodomain):一种进化保守的锌指结构 域, 能特异性识别组蛋白的甲基化修饰. bromo结构域，特异性识别组蛋白末端乙酰化的赖氨酸位点，在调控 基因转录方面具有非常重要的作用
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TRIM24与肿瘤 功能： 1）参与染色体重塑(H3K4me0， H3K23ac) 2）结合并降解P53 3）与ER,AR,RAR相互作用并调节其转录活性 4）在白血病，前列腺癌，乳腺癌中促进肿 瘤生长
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文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
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免疫组化染色
NB:正常脑组织
OG:少突神经胶质瘤
Oncogene,2014.1
TRIM24 promotes glioma progression and enhances chemoresistance through activation of the PI3K/Akt signaling pathway
胡高磊 2014.6.13
1
背景介绍
24
T98
U87
MTT assay
平板克隆形成试验
25
Caspase-7可以被剪切而激活，激活的caspase7引起DNA修复酶 PARP的剪切，进而促进细胞的凋亡。
26
TUNEL检测
流式细胞分析
27
28
MGMT:DNA修复酶，可以 修复TMZ诱导的DNA损伤。
29
荧光素酶报告基因
RelA :编码NF-κB 的一个亚基
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
9
总生存期（Overall survival,OS）：从随机化开始至因 任何原因引起死亡的时间。该指标被认为是肿瘤临床 试验中最佳的疗效终点。
优点：便于统计，准确度高 缺点：需要样本较多，随访时间较长
PFS（Progression-Free-Survival，无进展生存期）：从 随机化到病人出现肿瘤进展或死亡的时间。
32
总生存数OS
33
无进展生存期PFS
34
总结
1.TRIM24能促进恶性 胶质瘤的发展
2.TRIM24通过PI3K/AKT 通路提高GBM对化学 药物的抵抗
35
36
37
PA:纤维性星形细胞瘤 grade I
DA:弥漫性星形细胞瘤 AA:间变型星形细胞瘤 grade II gradeIII
6
7
TRIM24水平在复发的GBM病人组织中明显上调
8
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
12
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
13
14
U251 TRIM24蛋白水平相对较低
30
结果表明：TRIM24通过促进MGMT表达使细胞对TMZ产生抗性
31
文章内容
一、TRIM24表达与肿瘤等级相关并参与GBM复发 二、TRIM24水平与GBM病人预后呈反向相关
三、TRIM24通过PI3K/AKT信号通路促进细胞生长
四、TRIM24能提高GBM药物替莫唑胺(TMZ)的抗性 五、TRIM24是化学治疗有效的前提
Progression-free survival(PFS) 无进展生存期
中位存活期 Low TRIM24 13.9month High TRIM24 11.0month
中位无进展生存期 Low TRIM24 6.5month High TRIM24 5.3month11Cox比例风险回归模型
HR:hazard ratio风险比