血疟原虫(MP) 薄血片检查法

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疟原虫、检查

疟原虫、检查

血液疟原虫检查[试验名称] 血液疟原虫检查[试验方法] 薄血片法或厚血片法[操作]1.薄血片法:以常法薄推血片,血膜完全干燥后即可染色。

染色法同白细胞分类检查2.厚血片法:在洁净玻片上,滴患者血液2滴,用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm,厚薄均匀的血膜,在室温中自然干燥。

在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴,完全覆盖血膜,溶血数分钟,脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色,倾去溶血液。

不必待干,进行染色,干后镜检。

[结果报告]查见或未查见疟原虫[注意事项]1.采血时间:间日疟级三日疟患者应在发作后数小时至10余小时才学,此时,早期滋养体已发育至易于鉴别的形态晚期;恶性疟患者,应在发作20小时左右采血。

2.厚血片的溶血要及时,厚血片的放置期限在夏季不超过48h,冬季不超过72h,否则溶血不完全,会影响检验质量。

3.染色后,水洗时不要先倒去染液,应让清水流进染液,使沉渣飘浮冲走。

4.玻片油镜检查,须找100或100个以上视野才能报告“未检出疟原虫”。

厚血片至少20个视野以上。

5.疟原虫须分类报告,找到环状体后,须在仔细寻找更为成熟的阶段,以便分类。

如确实未找到更为成熟的疟原虫,可报告为“检出环状体疟原虫”6.有可能出现2种或3种疟原虫混合感染时,以间日疟与恶性疟混合感染最常见,须注意鉴别。

7.注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。

特别是厚血片检查时,缺乏经验者必须在薄血片上仔细寻找证实,才能报告。

8.除上述3种疟原虫外,在我国云南曾发现过少数卵形疟原虫引起的病例。

卵形疟原虫的基本形态与三日疟原虫相似,但虫体稍大,受感染的红细胞略胀大,滋养体后期与裂殖体前期的原虫呈圆形或卵圆形。

血疟原虫检查标准操作程序

血疟原虫检查标准操作程序

血疟原虫检查标准操作程序1 检验目的应用瑞氏-吉姆萨染色法对制备好的血片进行染色后在显微镜下观察,判断是否感染疟原虫。

2 检测原理瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。

将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中,即为瑞氏染料。

瑞氏染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。

各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。

核与酸性染料伊红结合,染成粉红色;胞质与碱性染料美蓝或天青结合,染蓝色;胞质中含有血红蛋日白消化分解后的产物-疟色素,疟色素不着色,为棕黄色或棕褐色。

3 性能特征无4 标本要求(包括病人准备、容器、样本类型等)4.1 病人准备:间日疟及三日患者应在发作后数小时至10余小时采血,此时,早期滋养体已发育成易于鉴别形态的晚期滋养体;恶性疟患者,应在发作后20小时左右采血。

4.2 标本类型:静脉全血4.3 标本容器: EDTA-K2抗凝管4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放:放在工作台标本架。

4.4.2已拉测标本的存放:检毕标本排列于样本架,置检毕标本台,由卫生员统一转入2-8℃标本冷藏库保存7天,血片用乙酸乙酯脱油保存于存片盒。

4.5 标本运输:室温条件下运输。

4.6 标本拒收标准:参照《用户手册》4.7 检测时限: 1小时。

5 仪器和试剂5.1 试剂名称:瑞姬氏染色液5.1.1瑞姬氏染色液:瑞氏染料0.5g、姬氏染料0.5g,加入500ml甲醇中,混匀溶解后备用。

5.1.2pH6.5磷酸盐缓沖液:磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g,加入100ml蒸馏水中溶解。

5.2 试剂来源:珠海贝索。

5.3 仪器:普通光学显微镜。

6 环境和安全:6.1 检测环境:应符合《显微镜标准操作程序》相关要求。

6.2 设备的安全操作:详见《显微镜标准操作程序》。

6.3 生物安全:6.3.1血液标本的运送必须保证运送过程中的生物安全,防止溢出。

血液标本溢出后,应该立即对污染的环境和设备进行消毒处理。

血疟原虫(薄血片法)1

血疟原虫(薄血片法)1
12.2注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
12.3薄片油镜检查,须找出100或100个以上视野才能报告“未检出疟原虫”。
12.4找到环状体后,须再仔细寻找更为成熟的阶段,以便分类。如确实未找到更为
成熟阶段的疟原虫,可报告为“检出环状体疟原虫”。
12.5有可能出现2种或3种疟原虫混合感染时,以间日疟与恶性疟原虫混合感染
..环状体..
虫体大小较大,
约为红细胞的1/3
较大,
约为红细胞的1/3
较小,
约为红细胞的1/6
细胞浆浅蓝色,
呈较薄之环状
浅蓝色,
呈较厚之环状
浅蓝色,环状较细薄,常位
于细胞之边缘,有时1个细
胞内有2个环状体
染色质可长得很大,甚至充
满整个红细胞
与间日疟原虫同红色小点,1个环状体具有
1-2个-或更多
养体
晚期滋
为常见,须注意鉴别。
裂殖子形

排列不规则排列不规则或呈花
朵状

虫体大小圆形,
约为红细胞1/2以上
圆形,与红细胞等大
或较小
半月形,两端钝圆(雄),
两端较尖(雌)

细胞浆深蓝色深蓝色蓝色
母体
染色质结实,深红色,
位于一边
结实,深红色,
位于一边
结实,深红色,
位于中央
疟色素沿边分布沿边分布黑褐色,密集于中央
红细胞胀大,色较淡正常或缩小正常,偶然缩小,色深
8.临床意义:本实验用于对疟原虫的形态进行鉴别分类。
9.操作性能:快速简便、操作简单。
10.方法局限性
10.1阳性检出率较低。
10.2存在主观判断的失误。
11.参考文献

疟原虫检测 血涂片镜检法

疟原虫检测 血涂片镜检法

ICS11.020C62WS 中华人民共和国卫生行业标准WS/T 569—2017疟原虫检测血涂片镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准起草单位:海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。

本标准主要起草人:王善青、高琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧阳范献。

疟原虫检测血涂片镜检法1 范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。

本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物,是疟疾(malaria)的病原体。

寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)和卵形疟原虫(Plasmodium ovale)等。

2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片。

供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。

3 仪器和器材3.1 生物显微镜(100×油浸物镜、5×或10×目镜)。

3.2 计数器。

3.3 载玻片(无划痕无油污的洁净载玻片)。

3.4 推片。

3.5 血片染色架。

3.6 血片干燥架。

3.7 玻片盒。

3.8 染色盘和染色缸。

4 试剂和材料4.1 吉氏染色原液。

4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)。

4.3 甲醇(分析纯)。

4.4 香柏油或专用浸油(折射率≥1.5)。

疟原虫镜检操作流程

疟原虫镜检操作流程

疟原虫镜检血片制作与染色操作流程
1.填写登记表在“疟疾发热病人血检登记本”上为患者编号并登记其相关信息。

2.清洁玻片
3.玻片编号
用目测法将玻片分成六等分,左侧第一和等二等份用于编号。

同一患者玻片上号码应与登记本上一致。

4.采血
5.涂制厚片
(1)血量: 4~5微升
(2)位臵:玻片第三等份中央的位臵
(3)血膜大小:0.8~1.0厘米
6.涂制薄血膜
(1)血量: 1~1.5微升
(2)位臵:玻片第四至第六等份的位臵。

涂制薄血膜的血应滴在玻片中央稍偏右的位臵
(3)血膜大小:2.0厘米(宽)×2.5厘米(长)
7.吉氏染色液配制
(1)2%的吉氏染色液配制方法98毫升蒸馏水加入2毫升吉氏原液,混匀后即为2%的吉氏染色液。

也可用1支试管,按1毫升蒸馏水加入1滴吉氏原液的比例稀释染液,混匀后用于染色。

(2)注意事项2%的吉氏染色液必须现配现用。

8.吉氏染色方法
(1)待厚血膜干燥
(2)甲醇固定薄血膜
(3)待甲醇挥发干净
(4)滴2%的吉氏染液覆盖厚薄血膜,染色30分钟。

(5)取出染好的血片,连同染液在清水中轻轻漂洗一遍,洗去表面吸附的杂质。

(6)放臵干燥处晾干。

血膜面朝上,注意不要放反了。

疟原虫检测血涂片镜检法

疟原虫检测血涂片镜检法

疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法ICS11.020C62WS 中华⼈民共和国卫⽣⾏业标准WS/T 569—2017疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前⾔本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准起草单位:海南省疾病预防控制中⼼、江苏省寄⽣⾍病防治研究所、中国疾病预防控制中⼼寄⽣⾍病预防控制所、云南省寄⽣⾍病防治所、海南省农垦总局医院。

本标准主要起草⼈:王善青、⾼琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李⾬春、刘莹、欧阳范献。

疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法1 范围本标准规定了⾎涂⽚镜检法检测疟原⾍的技术规范。

本标准适⽤于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原⾍的显微镜检测。

2 术语和定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。

2.1疟原⾍Plasmodium spp疟原⾍是⼀类单细胞、寄⽣性的真核动物,是疟疾(malaria)的病原体。

寄⽣于⼈体的疟原⾍主要有恶性疟原⾍(Plasmodium falciparum)、间⽇疟原⾍(Plasmodium vivax)、三⽇疟原⾍(Plasmodium malariae)和卵形疟原⾍(Plasmodium ovale)等。

2.2⾎涂⽚ blood films将⾎液涂制于载玻⽚上制成的涂⽚。

供显微镜疟原⾍检查⽤的⾎涂⽚包括厚⾎膜涂⽚和薄⾎膜涂⽚两种。

3 仪器和器材3.1 ⽣物显微镜(100×油浸物镜、5×或10×⽬镜)。

3.2 计数器。

3.3 载玻⽚(⽆划痕⽆油污的洁净载玻⽚)。

3.4 推⽚。

3.5 ⾎⽚染⾊架。

3.6 ⾎⽚⼲燥架。

3.7 玻⽚盒。

3.8 染⾊盘和染⾊缸。

4 试剂和材料4.1 吉⽒染⾊原液。

4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)。

4.3 甲醇(分析纯)。

4.4 ⾹柏油或专⽤浸油(折射率≥1.5)。

疟原虫检测标准操作程序

疟原虫检测标准操作程序

疟原虫检测标准操作程序疟原虫检测操作程序1.目的与原理1.1 目的:检查血液中是否有疟原虫。

1.2 原理:瑞氏染色原理。

瑞氏染料中含有美蓝和XXX两种染料,前者为碱性,后者为酸性。

它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调,以便于辨认。

根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同,可将疟原虫各期的形态进行清楚染色,便于观察。

高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫(如间日疟、三日疟、恶性疟),以及疟原虫的各期,如环状体(早期滋养体)、晚期滋养体、裂殖体、配子体等。

2.样本收集和贮存2.1 原始样本:全血。

2.2 标本类型:EDTA抗凝血2ml。

标本的采集应使用标准一次性采血管,充分混匀,勿震荡。

2.3 保存条件:EDTA抗凝血尽快即时检测。

2.4 病人要求:必须在发烧时采血。

3.试剂3.1 瑞氏染液:3.1.1 试剂成分:瑞氏染料1.0g、无水甲醇500ml、甘油10ml。

3.1.2 配制方法:将瑞氏染料称量好后,放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解。

将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中,倒入无水甲醇继续研磨,反复多次,直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止。

配制好的染液放在37℃24小时后方可使用,放在阴凉干燥处,避光保存。

3.2 磷酸盐缓冲液PH6.4:3.2.1 脱水Na2HPO4 1份:处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤)成粉末称量。

3.2.2 无水KH2PO4 2.6份:将脱水Na2HPO4 1份和无水KH2PO4 2.6份充分混合,边研磨边混匀。

3.2.3 将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中,混合均匀,方可使用。

3.3 器材:载玻片、加样枪、吸头、推片器。

4.仪器显微镜OLYMPUS型号:CX21.4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS显微镜:检查显微镜光路系统,目镜、物镜镜头正常,聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。

4.2 日常维护:每日清理纤维镜表面,保持显微镜光圈、聚光器干净整洁。

疟疾实验室检查方法

疟疾实验室检查方法

疟疾实验室检查方法疟疾是一种由疟原虫引起的传染病,该病在全球范围内广泛分布,并造成了大量的疾病和死亡。

为了及时准确地诊断和治疗疟疾,实验室检查方法起着至关重要的作用。

本文将介绍疟疾实验室检查的常见方法。

1. 血涂片检查血涂片检查是最常用的疟疾实验室检查方法之一。

该方法通过在玻片上涂抹患者的血液样本,并使用特殊的染色剂染色,然后在显微镜下观察。

疟原虫在血液中的形态特征使其能够与其他细胞区分开来,从而能够准确地诊断疟疾。

血涂片检查的优点是简单易行,结果迅速可靠。

然而,该方法需要经过专业人员的训练和经验,以确保结果的准确性。

2. 快速诊断试纸检测快速诊断试纸检测是一种简便快速的疟疾实验室检查方法。

该方法基于抗原-抗体反应原理,通过在试纸上加入患者血液样本,检测疟原虫抗原或抗体的存在与否。

试纸通常具有几个测试线,每个测试线代表一种疟原虫类型。

根据试纸上测试线的出现情况,可以快速诊断疟疾的类型。

快速诊断试纸检测的优点是操作简单,结果迅速,适用于一线医疗机构和偏远地区的疟疾筛查。

3. 分子生物学检测分子生物学检测是一种高灵敏度和高特异性的疟疾实验室检查方法。

该方法通过提取患者血液中的疟原虫DNA或RNA,然后使用特定的引物和荧光探针进行PCR扩增和实时荧光检测。

分子生物学检测能够检测到非常低浓度的疟原虫,具有高度的准确性和敏感性。

然而,该方法需要复杂的实验室设备和专业人员的操作技术,限制了其在资源匮乏地区的应用。

4. 免疫荧光检测免疫荧光检测是一种基于抗原-抗体反应的疟疾实验室检查方法。

该方法通过在患者血液样本中加入特定的荧光标记抗体,与疟原虫抗原结合形成复合物,然后在荧光显微镜下观察。

免疫荧光检测可以同时检测多种疟原虫类型,并具有高度的特异性和敏感性。

然而,该方法需要昂贵的设备和专业人员的操作技术,限制了其在一线医疗机构和偏远地区的广泛应用。

总结起来,疟疾实验室检查方法包括血涂片检查、快速诊断试纸检测、分子生物学检测和免疫荧光检测。

各级医疗机构医院疟原虫检测血涂片镜检法

各级医疗机构医院疟原虫检测血涂片镜检法

各级医疗机构医院疟原虫检测血涂片镜检法1 范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。

本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物,是疟疾(malaria)的病原体。

寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)和卵形疟原虫(Plasmodium ovale)等。

2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片。

供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。

3 仪器和器材3.1 生物显微镜(100×油浸物镜、5×或10×目镜)。

3.2 计数器。

3.3 载玻片(无划痕无油污的洁净载玻片)。

3.4 推片。

3.5 血片染色架。

3.6 血片干燥架。

3.7 玻片盒。

3.8 染色盘和染色缸。

4 试剂和材料4.1 吉氏染色原液。

4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)。

4.3 甲醇(分析纯)。

4.4 香柏油或专用浸油(折射率≥1.5)。

4.5 二甲苯(分析纯)。

4.6 75%酒精。

4.7 一次性采血针。

4.8 一次性手套。

5 检测步骤5.1 血涂片的制作5.1.1 采血部位及取血方法经75%乙醇消毒采血部位,待干后,用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血,婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。

取1张已消毒推片,用拇指和食指夹持推片侧缘中部,用推片左下角刮取血液4μL~5μL用于制作厚血膜,再用该端中部刮取血液1μL~1.5μL用于制作薄血膜。

5.1.2 厚血膜制作取1张载玻片,将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左,由里向外划圈涂成直径0.8cm~1.0cm 的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个~10个白细胞为宜。

血疟原虫薄血片检查法标准操作程序

血疟原虫薄血片检查法标准操作程序

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疟原虫检验技术

疟原虫检验技术

疟原虫检验技术一、疟原虫的生物学特征疟原虫是一类单细胞真核生物,寄生在人类和其他脊椎动物的红细胞内。

常见的疟原虫种类包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。

疟原虫的生活史包括在人体内的无性生殖和在蚊体内的有性生殖两个阶段。

在人体内,疟原虫经历了肝细胞内的红外期和红细胞内的红内期发育过程。

了解疟原虫的生物学特征对于选择合适的检验方法具有重要意义。

二、疟原虫检验技术的分类1、显微镜检查法这是疟原虫检验的经典方法,包括薄血膜涂片和厚血膜涂片检查。

薄血膜涂片用于疟原虫形态学观察,可鉴定疟原虫的种类;厚血膜涂片则提高了疟原虫的检出率。

在显微镜下,观察疟原虫的形态、大小、细胞核和细胞质的特点,以及疟色素的分布等,从而确定是否感染疟原虫以及感染的种类。

2、免疫学检测法(1)抗原检测利用免疫层析技术检测患者血液中的疟原虫抗原。

这种方法操作简便、快速,适用于现场检测和大规模筛查。

(2)抗体检测检测患者血清中的特异性抗体。

但由于抗体在感染后一段时间才会产生,且抗体检测不能区分现症感染和既往感染,因此在疟疾诊断中的应用相对有限。

3、分子生物学检测法(1)PCR 技术通过扩增疟原虫特定的基因片段来检测疟原虫。

具有高度的敏感性和特异性,能够检测到极低浓度的疟原虫核酸。

(2)核酸杂交技术利用标记的核酸探针与疟原虫核酸进行杂交,从而检测疟原虫。

4、其他检测方法(1)血常规检查疟疾患者可能会出现贫血、白细胞减少等血常规异常。

(2)血生化检查部分疟疾患者可能会有肝肾功能损害,通过血生化检查可以了解相关情况。

三、显微镜检查法的操作步骤1、采血通常采集患者的末梢血或静脉血。

2、制作血涂片薄血膜涂片:将一滴血液滴在载玻片的一端,用推片以 30°-45°角均匀地推成薄而均匀的血膜。

厚血膜涂片:取较多的血液滴在载玻片上,用推片制成较厚的血膜。

3、固定和染色薄血膜涂片自然干燥后,用甲醇固定,然后用吉姆萨染液或瑞氏染液染色。

厚、薄血膜法查疟原虫

厚、薄血膜法查疟原虫

厚、薄血膜法查疟原虫基本原理:疟原虫寄生于红细胞,经制片、染色后,显微镜下可以鉴别疟原虫的虫种和虫期。

试剂器材:75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、姬氏染液(或瑞氏染液)、显微镜等。

操作方法:(1)采血:①采血时间在普查时,一般无法考虑采血时间。

在临床上,对现症病人一般可随时采血,但为了提高检出率,就应当考虑采血的适当时间。

对典型发作的间日疟及三日疟患者,应选择发作后数小时至10余小时采血为好。

此时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体,虫体大,疟色素已形成,受染红细胞也出现变化,有利于疟原虫的检出。

恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和内脏微血管中发育的,通常在外周血液中不易查到,配子体在环状体出现1周后方能见于外周血液,故在发作时采血。

②采血部位从患者耳垂或指尖(以左手无名指为宜)取血,婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。

③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤,待干后用左手拇指和食指捏住采血部位,右手持针迅速刺入皮肤,待血液流出或轻轻挤出血滴,供制作涂片用,采血完毕用干棉球轻压伤口止血。

(2)制片:①薄血膜的制作取1滴血于1张洁净的载玻片上,选1张边缘平整、光滑的载玻片作推片,用左手拇指和中指夹持其两端,将推片的边缘中点与血滴接触,并与载玻片呈30o~45o夹角,待血滴沿推片边缘向两侧展开后,立即由右向左迅速推成薄血膜。

理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层,无裂痕,其末端凸出呈舌尖形。

注意:推片时用力和速度要均匀,不能中途停顿或重复推片,以免造成血膜断裂或厚薄不匀。

如取血量多,夹角宜小;取血量小,则夹角可大些。

②厚血膜的制作用推片的一角接触刺血点上的血滴,取血2滴,置载玻片上,并从里向外作旋转涂布,使成直径为0.8cm大小的圆形血膜,厚薄要均匀,然后平置桌上,待自然干燥。

③厚薄血膜同片制作用目测法将载玻片从右到左等分成6格,厚血膜涂在第3格中央,薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部,第1、2格可用于贴标签,制作厚、薄血膜方法同上。

疟原虫检验技术

疟原虫检验技术

疟原虫检验技术1)薄血膜(thin blood film)制作方法(1)采血:临床上取病人耳垂或指尖血(2)操作方法:取病人末梢血1滴,置载玻片的中部,使推片和玻片保持30~40度夹角,将血滴在推片边缘展开后,匀速向前推动,即形成舌状血膜。

2)厚血膜(thick blood film)制作方法(1)采血同薄血膜法(2)操作方法:厚血膜可置于薄血膜的另一端。

取病人末梢血2-3滴,自里向外顺着一个方向徐成直径约1cm大小,厚薄均匀的血膜。

厚、薄血膜间用蜡笔画线分开。

充分晾干后,滴加蒸馏水于厚血膜上溶血,将水倾去,晾干后与薄血膜一起染色。

3)固定、染色(1)瑞氏染色:先用蜡笔在血膜两端划上线,以防染液外溢。

瑞氏染液为甲醇溶液,血膜不需预固定、此染色法快速,适于临床检验,但较易褪色,保存时间不长。

滴加瑞氏染液数滴,使之覆盖血膜,约1~2min后血膜被染液中的甲醇固定,再加与染液等量的缓冲液或蒸馏水,轻摇载玻片,使染液与稀释液混匀,3~5min后用缓冲液或自来水从玻片一端冲洗,晾干后镜检。

4)注意事项(1)玻片要洁净,无油脂。

血量适中,推速均匀,以防血膜过厚、过薄或出现条状横纹。

血片在干燥过程中,避免灰尘或苍蝇脱吸。

(2)厚薄皿膜制备在一张载玻片时,应注意在厚血膜溶血前必须先用甲醇固定薄血膜,以避免接触水而使薄血膜上的红细胞溶解。

厚血膜溶血时间不可太长,不要振荡,以防血膜脱落。

(3)染液是甲醇溶液,切忌混入水滴,否则发生沉淀,妨碍染色,故染液发现有沉淀时不可再用。

(4)滴加染料切忌太多,否则染料残渣粘在血膜上无法洗净,影响检查。

加水后必须与染料充分混合,否则发生染色不均。

冲洗血膜时应流水直接将染液冲去,避免染料粘着血膜。

疟原虫血检

疟原虫血检

膜编号
血膜制成后,立即用记号笔于玻片面 立即用记号笔于玻片面 上写上受检者的号码,以防差错,待 上写上受检者的号码 薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上 血片种类的代号和受检者的个人编号 依次顺序插入标本盒内。 依次顺序插入标本盒内
制血膜的注意事项
涂制血膜时,手指只能持载片的边缘 手指只能持载片的边缘,不能接触玻片表 以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。推片的 以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落 缘一定要平滑,才能使推出的血膜均匀一致 才能使推出的血膜均匀一致。 刚涂制的血膜要平放在标本盒内,干前勿倾斜,以免造 刚涂制的血膜要平放在标本盒内 血膜厚薄不均,厚处不易溶血和着色而影响检查结果 厚处不易溶血和着色而影响检查结果; 干血膜时应注意防尘、防止苍蝇 防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜 干后应及时装入标本盒并盖严,新的木制标本盒需敞开 干后应及时装入标本盒并盖严 置一段时间,让木醇挥发后才能使用 让木醇挥发后才能使用,以免厚血膜红蛋 被其固定,不能溶血或染色效果不佳 不能溶血或染色效果不佳。 血膜让其自然干燥,切忌用太阳晒或火烤 切忌用太阳晒或火烤,干透后才能 甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能 夏天标本尽可能24~48小时内固定染 冬天也不能超过72小时。放置时间越久 放置时间越久,厚血膜越不易 血,染色效果也差。
日疟早期滋养体---环状体 日疟早期滋养体--环状体
约占寄生红细胞的1/3,很少见到一个红细胞寄生2 约占寄生红细胞的1/3,很少见到一个红细胞寄生2
间日疟滋养体间日疟滋养体-大滋养体
日疟裂殖体
2.1
经40小时晚期滋养体发育成熟 40小时晚期滋养体发育成熟 虫体变圆, schizont) 未成熟裂殖体 虫体变圆,空泡消失 (immature schizont) 核开始分裂又称裂殖体前期 色素聚集成团块

疟原虫血检操作卡

疟原虫血检操作卡

疟原虫血检操作卡一、血片的制作1、载玻片:玻片在使用前应清洗。

新玻片的清洗方法,是先把玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟,然后用干净棉巾逐个擦拭,再放入盛有清水的容器中换水3~4次,凉干,最后用干净的柔软的棉巾将玻片擦亮。

洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内,保存于干燥环境中备用。

2、血膜的制作:薄血膜:取洁净的载玻片2张,1张平置在桌上,以左手拇指,食指夹持载玻片两端(手指切勿接触玻片表面),用另一张边缘平滑(最好为磨口边缘)的载玻片做推片,用推片一端边缘的中点从取血部分取约1ul的血量(相当于1/4火柴头大小),使血滴与平置的载玻片接触,并形成25~30度夹角,待血液向两侧扩展约2cm长度时,均匀而迅速地轻轻向左推出约2.5cm。

厚血膜:用推片的一角,从取血部位刮取约4ul血量(相当于火柴头大小),使血滴与平置的载玻片接触,再由里向外一个方向旋转,转2~4圈,涂成直径0.8~1cm大小圆形厚血膜,血膜厚薄均匀,过厚易于脱落,过薄达不到检出率的要求。

3、血膜编号:血膜制成后,立即用记号笔于玻片面上写上受检者的号码,以防差错,待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号,依次顺序插入标本盒内。

4、涂制血膜的注意事项:(1)玻片清洗:避免玻片碰撞、磨损。

制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。

制片时,手指只能持载片的边缘,不能接触玻片表面,以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。

作为推片的玻片边缘一定要平滑,才能使推出的血膜均匀一致。

(2)涂制血膜:刚涂制的血膜要平放在标本盒内,厚血膜未干前勿使标本盒倾斜,以免血膜倾向一侧,造成血膜厚薄不均,厚处不易溶血和着色而影响检查结果。

晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜,干后应及时装入标本盒并盖严,血膜让其自然干燥,切忌用太阳晒或火烤,干透后才能用甲醇固定薄血膜。

新的木制标本盒需敞开放置一段时间,让木醇挥发后才能使用,以免厚血膜红蛋白被其固定,不能溶血或染色效果不佳。

疟疾的检查与诊断

疟疾的检查与诊断

疟疾的检查与诊断病原学检查确诊疟疾最可靠的依据是从受检者的外周血中检出疟原虫。

厚、薄血膜染色镜检是目前最常用的方法。

在高度怀疑疟疾时,如果血液涂片为阴性,应当重复涂片镜检。

血液涂片的染色常使用Giemsa染液、Field染液或其他Romanowsky染色劑。

镜检疟原虫时应当同时对厚血涂片和薄血涂片进行检查。

薄血涂片应迅速风干,用无水甲醇固定后染色,然后在油镜(放大1000倍)下检查膜尾红细胞,以每1000个红细胞的寄生红细胞个数表示。

厚血涂片很可能会不均匀,涂片时应充分干燥和染色,不得固定。

计数寄生虫和白细胞(至少200个),并根据总白细胞数目计算单位体积内的寄生虫数目。

在判断厚血涂片为阴性前,应在油镜下检查100~200个区域。

薄血涂片和厚血涂片有着各自的优点和缺点。

薄血涂片中疟原虫的形态完整而典型,容易识别和鉴别虫种,但疟原虫密度低时,容易漏检;厚血涂片制作过程中多层的红细胞相互重叠并且被溶解,因此可以使疟原虫集中(比薄血涂片集中40~100倍),提高检出灵敏度,但由于染色过程中红细胞溶解,疟原虫形态有所改变,虫种鉴别困难。

因此,最好在一张玻片上同时制作两种血涂片,如果在厚血涂片查到疟原虫而鉴别虫种困难时,可再检查薄血涂片。

恶性疟在发作开始时,间日疟在发作后数小时至10余小时采血能够提高检出率。

免疫学检查目前已经广泛使用的恶性疟原虫抗体诊断棒或诊断卡能够快速、简单、敏感和特异地对恶性疟原虫特异性、富含组氨酸的蛋白2(NHRP2)、乳酸脱氢酶或醛缩酶抗原进行检测,并借此将恶性疟和其他危险性较低的疟疾区分开来。

此外,常用的方法还有间接荧光抗体试验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。

由于抗体在患者治愈后仍能存在一段时间,且广泛存在个体差异,因此检测抗体主要用于疟疾的流行病学调查、防治效果评估及输血对象的筛选,在临床上仅作辅助诊断。

分子生物学技术聚合酶链式反应(PCR)和核酸探针已用于疟疾诊断。

分子生物学检测技术的最突出优点是对低疟原虫血症的检出率较高。

疟原虫血涂片镜检技术规范

疟原虫血涂片镜检技术规范

附件3疟原虫血涂片镜检技术规范一、吉氏液染色--光学显微镜(油镜)检查同时涂制薄血膜和圆形厚血膜,薄血膜须用甲醇固定,用吉氏染色液(Giemsa stain)进行染色。

吉氏染液用pH7.0-7.2的水配成3%的稀释液,可将血片插入染色缸内染色,或用滴管将稀释液滴在厚、薄血膜上,染色30min,若需快速染色,可在2ml水中加吉氏染液3滴,染色6min 。

对临床诊断为脑型疟者,宜用快速染色法,以便能尽快获得确诊依据。

现症患者至少检查100个厚血膜视野,带虫者应查完整个厚血膜,未发现疟原虫才判为阴性。

薄血膜可用于原虫形态鉴定。

以薄血膜中平均每100个红细胞中的原虫数,或厚血膜中平均每100个白细胞范围内的原虫数,推算每微升血中的原虫密度。

染色血片中的原虫核呈红色,胞浆呈兰色。

除环状体外,其他各期均可查见褐色的疟色素。

除恶性疟病例外,均可查见各期疟原虫。

一般恶性疟病例,仅查见环状体,或可见配子体。

但脑型疟病例,不仅原虫密度高,查见的环状体比一般的粗大,而且可查见大滋养体和裂殖体,疟色素呈黑褐色,这些特点对明确诊断很有帮助。

还有一点值得注意,在非洲感染的非重症恶性疟病例,其环状体往往比国内一般恶性疟病例所见的环状体粗大,胞浆较多,与间日疟原虫小滋养体相似,容易误判为间日疟原虫,但也不能同时查见大滋养体和裂殖体,这一点有别于间日疟原虫感染。

二、瑞氏液染色-光学显微镜(油镜)检查同时制作厚、薄血膜,用瑞氏染液(Wright stain)进行染色。

在厚血膜上加清水2-3滴溶去血红蛋白,染色效果较好。

染色时,先在薄血膜上直接加约1ml瑞氏液染色2min,然后在薄血膜上加与染液等量的水稀释,并引到厚血膜上共染5-6min。

其他参见吉氏液染色法。

三、荧光素吖啶橙染色-荧光显微镜检查要求涂制成直径为1.2-1.5cm的亚厚血膜,不宜过薄。

须用甲醇固定薄血膜,用清水溶去厚血膜的血红蛋白。

吖啶橙1g加pH6.5-7.0磷酸缓冲液100ml配制成1%吖啶橙母液。

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血疟原虫(MP)薄血片检查法(手工法)1. 实验原理
应用瑞氏染色法对制备好的薄血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫,并鉴别其形态种类。

2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备:间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血;恶性疟患者,应在发作后20h左右采血。

2.2 标本种类:全血或末梢血
2.3 标本要求:薄血片的血膜厚度要适度均匀以利镜检。

3. 标本储存:室温存贮,尽快检查。

4. 标本运输:室温运输。

5. 标本拒收标准:细菌污染。

6. 操作步骤
6.1 以常法推制成薄片。

6.2 血膜完全干燥后即可进行瑞氏染色。

6.3 在油镜下进行检查。

7. 结果判断与分析
在油镜下观察,进行形态鉴别。

薄血片上3种疟原虫形态特点:
8. 临床意义:
本实验用于对疟原虫的形态进行鉴别分类。

9. 操作性能:快速简便、操作简单。

10. 方法局限性
10.1 阳性检出率较低。

10.2 存在主观判断的失误。

中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程(第二版).1997,85-86
12. 注意事项
12.1 染色后,水洗时不要先倒去染液,应让清水流进染液,使沉渣冲走。

12.2注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。

12.3 薄片油镜检查,须找出100或100个以上视野才能报告“未检出疟原虫”。

12.4找到环状体后,须再仔细寻找更为成熟的阶段,以便分类。

如确实未找到更为成熟阶段的疟原虫,可报告为“检出环状体疟原虫”。

12.5 有可能出现2种或3种疟原虫混合感染时,以间日疟与恶性疟原虫混合感染为常见,须注意鉴别。

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