微卫星技术筛选大黄鱼耐低温标记

微卫星技术筛选大黄鱼耐低温标记

穆方申;苗亮;李明云;胡谋;陈炯;张浩

【摘要】In this study , the large yellow croakers Donghai No.1 was divided into cold-tolerant and cold-sensitive two groups by reduc-ing water temperature from 15℃to 6℃gradually , and then the molecular marker which linked to the resistance to low temperature was screened by microsatellite markers (SSR) analysis.The results showed that 39 alleles were amplified using 10 SSR primers, and only the alleles frequence of locus KPC 43 had significant difference between the cold-tolerant group and the cold-sensitive group .In the three alleles of KPC43, the occurrence frequency of KPC43170bp was 80.0%in the cold-tolerant group, while its occurrence frequency was only 23.33% in the cold-sensitive

group .Correlative analysis showed that there was a significant positive correlation between KPC43170bp and cold-tolerant trait (P<0.01), and the correlation coefficient was 0.498.In the cold-sensitive group, the frequency of the KPC43150bp (76.67%) was significantly higher than that in the cold-tolerant group (30.0 %) .And there was a significant negative association with the KPC43150bp and cold-tolerant related character (P<0.01), and the correlation coefficient was -0.417.Sequence alignment showed that the microsatellite flanking regions of KPC 43170bp and KPC43150bp were the same, while the repeat sequence was (TG)12 in KPC43170bp and (TG)2 in KPC43150bp.It can be speculated that SSR marker KPC 43 may be linked to some cold tolerant gene of large yellow croaker , and the repeat numbers

of ( TG) may affect these gene′s expressing activity , which is associated to the ability of cold tolerance .%为筛选大黄鱼耐低温性状相关分子标记，对大黄鱼进行降温实验（15℃降至6℃）后用SSR标记对低温敏感个体和低温耐受个体进行扩增分析。结果显示：10对SSR引物共扩增到39个条带，仅标记KPC43的扩增条带在低温敏感和低温耐受个体间的出现频率存在显著差异。标记KPC43共扩增到3个等位基因，其中KPC43170bp在低温耐受组中出现的频率（80.0％）显著高于低温敏感组（23.33％），该条带与大黄鱼耐低温能力存在极显著正相关（P＜0.01），相关系数为0.498；KPC43150bp在低温敏感组中出现的频率（76.67％）显著高于低温耐受组（30.0％），与大黄鱼耐低温能力存在极显著负相关（P＜0.01），相关系数达到－0.417。序列比对显示KPC43170bp仅核心序列比KPC43150bp多了10个（TG）重复。推测SSR标记KPC43可能与大黄鱼耐低温性状相关基因连锁，其核心序列的重复次数可能与该基因的表达活性有关，从而影响大黄鱼个体的耐低温能力。

【期刊名称】《生物学杂志》

【年(卷),期】2017(034)001

【总页数】5页(P34-38)

【关键词】大黄鱼;耐低温;微卫星标记

【作者】穆方申;苗亮;李明云;胡谋;陈炯;张浩

【作者单位】宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实

验室，宁波315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，宁波315211

【正文语种】中文

【中图分类】Q958.8;S917.4

大黄鱼是一种暖水性鱼类，是浙江、福建两省的重要海水养殖经济鱼类之一。近年来，我国东南沿海在冬季常受寒潮侵袭，并多次出现特大寒潮，降温幅度大、持续时间长，养殖海域水温持续偏低，导致大黄鱼被大量冻死，经济损失严重[1-2]。

因此有必要研究低温对大黄鱼的影响，选育耐低温能力强的大黄鱼。

随着现代生物技术的发展，分子标记辅助育种成为培育具有优良性状新品种的一种重要方法。例如在鲤鱼抗寒新品种荷包红鲤的选育及其后续研究中，梁利群等[3-5]利用RAPD技术获得6个与鲤鱼耐寒相关的标记，并且将其中1个标记定位在鲤

鱼的第5号连锁群上；潘贤等[6]筛选出2个与鲤鱼抗寒性状相关的SSR标记，这些标记的开发与应用在鲤鱼抗寒新品种的选育中起到了重要作用；黄海水产研究所的研究人员[8]在开发了半滑舌鳎雌性特异性AFLP标记的基础上，研究了培育单

性群体的方法。

微卫星标记(Simple sequence repeat, SSR)是进行遗传分析和鉴定的有力手段之一，具有分布广泛、呈孟德尔共显性遗传、多态性丰富等特点[9]，目前已经筛选

到了罗非鱼体重与体长性状[10-11]、虹鳟抗肝胰脏坏死病性状[12]、褐牙鲆耐热

性状[13]相关的多种SSR标记。在大黄鱼的研究中，高国强等[14]、王惠儒等[15]分别发现微卫星标记LYC002和LYC0015可能与大黄鱼的耐低温能力有关。这说明大黄鱼耐低温性状可能受基因的控制，使用SSR筛选大黄鱼的耐低温标记是可

行的。

笔者所在课题组先后通过分析低温下大黄鱼血清生化、抗氧化水平、肝脏蛋白质组、