核医学体外分析技术

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抗CGMP抗体的交叉反应图
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（3）高滴度的抗体：
抗体滴度(Titer)指抗体实际应用时的稀释倍数。
稀释倍数越大，抗体的滴度越高，滴度一般要求在1/1000以 上为好。
滴度曲线的目的：确定抗体稀释度；找出抗原和抗体 的最适比例（B/T为50%时的抗体稀释度）。
1Bq=1/S
1Ci=3.7
10¹ºBq
2)保持标记抗原的免疫活性：
每个蛋白质分子上标记1-2个碘原子。
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3)便于放射性测量：
125I标记的抗原有r射线能直接测量
4)放射化学纯度高： 放射化学纯度: 是指具有免疫活性的标记抗原占总 放射性的百分数。 放化纯度要求大于90%以上
❖ 诺贝尔医学奖获得者－ Yalow博士。
❖ 1959年 Yalow和 Berson两位博士在研究胰岛素的抗 体时发展起来的。最早建立的是INS的RIA法。
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。
❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
1B。 2
3
4
5
6
0ng/L 20ng/L 40ng/L 80ng/L 160ng/L 320ng/L
通过测定*AgAb或*Ag的量可建立标准曲线。
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+ +
+ +
+ +
+ +
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放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力
2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总 量大于Ab上的有效结合位点。
3. Ag的量与*AgAb 的量成反比， 而与游离的*Ag成正比。
建立标准曲线
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2.体外非放射性标记免疫分析技术
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 酶免疫分析
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体外免疫分析技术的示意图
待测物 标记抗原
竞争法
非竞争法
标记抗体
固相支持物表面
包被抗体
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第一节 放射免疫分析的基本原理
(radioimmunoassay, RIA)
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一、放射免疫分析的基本原理
放射免疫分析法是利用限量的特异抗体与标记抗原 和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定放射性复合 物的量来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
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体外分析技术
1.体外放射性分析技术 (in vitro radioassay)
放射性竟争结合分析 *放射免疫分析(RIA)
(competitive radioactive binding assay)
放射性非竞争结合分析 *免疫放射分析(IRMA)
(non-competitive radioactive binding assay)
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抗体亲和力的Scatchard作图
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（2）高特异性的抗体：
抗体的特异性(Specificity)指：抗体分别与相应的抗 原和抗原结构类似物的结合能力的比较。
一般用交叉反应(Cross Reaction)来表示，交叉反应越小， 抗体的特异性越高。反之，抗体的特异性就差。
5)半衰期适当：
125I半衰期60天、131I半衰期8天、3H半衰期12.5年
3. 标准品
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• 标准品是用来制备标准曲线用的。
• 标准品抗原的要求： （1）高纯度的抗原 （2）化学结构、免疫活性与待测抗原一致
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(限量抗体）占总T的 30--50%
*Ag + Ab +
Ag （标准或待测样品)
当Ag=0时；
*AgAb + *Ag
(B)(F)ຫໍສະໝຸດ AgAb + Ag
当Ag不断增加时。
放射免疫分析的基本原理示意图 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
Ag + * Ag + Ab
* AgAb + AgAb +free*Ag
1、特异性抗体
高亲和力、高特异性、高滴度的抗体。
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（1）高亲和力的抗体：
亲和力（Affinity)是指抗原和抗体之间的一种结合能 力。
亲和力的测定方法是： Scatchard作图， 以AgAb的浓度为横坐标，以B/F为纵坐标绘制直线，观察
直线的斜率（-KA） 。标准曲线的斜率越大，表明抗体亲和力越 高，抗原抗体的结合也越紧。
看一看抗体滴度曲线
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抗体滴度曲线
2、标记抗原:
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1)比放射性活度高而适当；比放射性活度并不是越高越好
比放射性活度：是指每微克抗原上标记放射性核素的千贝可
KBq/ug.
被测抗原浓度高-----比活性 被测抗原浓度低-----比活性
B/T×100%
F/T ×100%
B/F ×100%
标 准 曲 线 的 纵 坐 标----结 合 率 （B/B+F、F/B+F、B/F、B/B。 ×100%）
标 准 曲 线 的 横 坐 标---标 准 品 浓 度
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二、 放射免疫分析的基本条件
特异性抗体、标记抗原、标准品、 分离技术、放射性测量仪器