核医学体外分析技术
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5)半衰期适当：
125I半衰期60天、131I半衰期8天、3H半衰期12.5年
3. 标准品
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 标准品是用来制备标准曲线用的。
• 标准品抗原的要求： （1）高纯度的抗原 （2）化学结构、免疫活性与待测抗原一致
2.体外非放射性标记免疫分析技术
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 酶免疫分析
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体外免疫分析技术的示意图
待测物 标记抗原
竞争法
非竞争法
标记抗体
固相支持物表面
包被抗体
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第一节 放射免疫分析的基本原理
(radioimmunoassay, RIA)
❖ 诺贝尔医学奖获得者－ Yalow博士。
❖ 1959年 Yalow和 Berson两位博士在研究胰岛素的抗 体时发展起来的。最早建立的是INS的RIA法。
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
B/T×100%
F/T ×100%
B/F ×100%
标 准 曲 线 的 纵 坐 标----结 合 率 （B/B+F、F/B+F、B/F、B/B。 ×100%）
标 准 曲 线 的 横 坐 标---标 准 品 浓 度
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二、 放射免疫分析的基本条件
特异性抗体、标记抗原、标准品、 分离技术、放射性测量仪器
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体外分析技术
1.体外放射性分析技术 (in vitro radioassay)
放射性竟争结合分析 *放射免疫分析(RIA)
(competitive radioactive binding assay)
放射性非竞争结合分析 *免疫放射分析(IRMA)
(non-competitive radioactive binding assay)
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。
❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
1B。 2
3
4
5
6
0ng/L 20ng/L 40ng/L 80ng/L 160ng/L 320ng/L
通过测定*AgAb或*Ag的量可建立标准曲线。
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+ +
+ +
+ +
+ +
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放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力
2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总 量大于Ab上的有效结合位点。
3. Ag的量与*AgAb 的量成反比， 而与游离的*Ag成正比。
建立标准曲线
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看一看抗体滴度曲线
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抗体滴度曲线
2、标记抗原:
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1)比放射性活度高而适当；比放射性活度并不是越高越好
比放射性活度：是指每微克抗原上标记放射性核素的千贝可
KBq/ug.
被测抗原浓度高-----比活性 被测抗原浓度低-----比活性
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抗体亲和力的Scatchard作图
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（2）高特异性的抗体：
抗体的特异性(Specificity)指：抗体分别与相应的抗 原和抗原结构类似物的结合能力的比较。
一般用交叉反应(Cross Reaction)来表示，交叉反应越小， 抗体的特异性越高。反之，抗体的特异性就差。
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一、放射免疫分析的基本原理
放射免疫分析法是利用限量的特异抗体与标记抗原 和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定放射性复合 物的量来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
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(限量抗体）占总T的 30--50%
*Ag + Ab +
Ag （标准或待测样品)
当Ag=0时；
*AgAb + *Ag
(B)
(F)
AgAb + Ag
当Ag不断增加时。
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Ag + * Ag + Ab
* AgAb + AgAb +free*Ag
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抗CGMP抗体的交叉反应图
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（3）高滴度的抗体：
抗体滴度(Titer)指抗体实际应用时的稀释倍数。
稀释倍数越大，抗体的滴度越高，滴度一般要求在1/1000以 上为好。
滴度曲线的目的：确定抗体稀释度；找出抗原和抗体 的最适比例（B/T为50%时的抗体稀释度）。
1、特异性抗体
高亲和力、高特异性、高滴度的抗体。
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（1）高亲和力的抗体：
亲和力（Affinity)是指抗原和抗体之间的一种结合能 力。
亲和力的测定方法是： Scatchard作图， 以AgAb的浓度为横坐标，以B/F为纵坐标绘制直线，观察
直线的斜率（-KA） 。标准曲线的斜率越大，表明抗体亲和力越 高，抗原抗体的结合也越紧。
源自文库
1Bq=1/S
1Ci=3.7
10¹ºBq
2)保持标记抗原的免疫活性：
每个蛋白质分子上标记1-2个碘原子。
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3)便于放射性测量：
125I标记的抗原有r射线能直接测量
4)放射化学纯度高： 放射化学纯度: 是指具有免疫活性的标记抗原占总 放射性的百分数。 放化纯度要求大于90%以上
125I半衰期60天、131I半衰期8天、3H半衰期12.5年
3. 标准品
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• 标准品是用来制备标准曲线用的。
• 标准品抗原的要求： （1）高纯度的抗原 （2）化学结构、免疫活性与待测抗原一致
2.体外非放射性标记免疫分析技术
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 酶免疫分析
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体外免疫分析技术的示意图
待测物 标记抗原
竞争法
非竞争法
标记抗体
固相支持物表面
包被抗体
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第一节 放射免疫分析的基本原理
(radioimmunoassay, RIA)
❖ 诺贝尔医学奖获得者－ Yalow博士。
❖ 1959年 Yalow和 Berson两位博士在研究胰岛素的抗 体时发展起来的。最早建立的是INS的RIA法。
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
B/T×100%
F/T ×100%
B/F ×100%
标 准 曲 线 的 纵 坐 标----结 合 率 （B/B+F、F/B+F、B/F、B/B。 ×100%）
标 准 曲 线 的 横 坐 标---标 准 品 浓 度
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二、 放射免疫分析的基本条件
特异性抗体、标记抗原、标准品、 分离技术、放射性测量仪器
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体外分析技术
1.体外放射性分析技术 (in vitro radioassay)
放射性竟争结合分析 *放射免疫分析(RIA)
(competitive radioactive binding assay)
放射性非竞争结合分析 *免疫放射分析(IRMA)
(non-competitive radioactive binding assay)
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。
❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
1B。 2
3
4
5
6
0ng/L 20ng/L 40ng/L 80ng/L 160ng/L 320ng/L
通过测定*AgAb或*Ag的量可建立标准曲线。
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+ +
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+ +
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放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力
2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总 量大于Ab上的有效结合位点。
3. Ag的量与*AgAb 的量成反比， 而与游离的*Ag成正比。
建立标准曲线
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看一看抗体滴度曲线
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗体滴度曲线
2、标记抗原:
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1)比放射性活度高而适当；比放射性活度并不是越高越好
比放射性活度：是指每微克抗原上标记放射性核素的千贝可
KBq/ug.
被测抗原浓度高-----比活性 被测抗原浓度低-----比活性
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗体亲和力的Scatchard作图
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（2）高特异性的抗体：
抗体的特异性(Specificity)指：抗体分别与相应的抗 原和抗原结构类似物的结合能力的比较。
一般用交叉反应(Cross Reaction)来表示，交叉反应越小， 抗体的特异性越高。反之，抗体的特异性就差。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、放射免疫分析的基本原理
放射免疫分析法是利用限量的特异抗体与标记抗原 和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定放射性复合 物的量来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology or medicine, "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones."
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
(限量抗体）占总T的 30--50%
*Ag + Ab +
Ag （标准或待测样品)
当Ag=0时；
*AgAb + *Ag
(B)
(F)
AgAb + Ag
当Ag不断增加时。
放射免疫分析的基本原理示意图 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
Ag + * Ag + Ab
* AgAb + AgAb +free*Ag
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抗CGMP抗体的交叉反应图
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（3）高滴度的抗体：
抗体滴度(Titer)指抗体实际应用时的稀释倍数。
稀释倍数越大，抗体的滴度越高，滴度一般要求在1/1000以 上为好。
滴度曲线的目的：确定抗体稀释度；找出抗原和抗体 的最适比例（B/T为50%时的抗体稀释度）。
1、特异性抗体
高亲和力、高特异性、高滴度的抗体。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（1）高亲和力的抗体：
亲和力（Affinity)是指抗原和抗体之间的一种结合能 力。
亲和力的测定方法是： Scatchard作图， 以AgAb的浓度为横坐标，以B/F为纵坐标绘制直线，观察
直线的斜率（-KA） 。标准曲线的斜率越大，表明抗体亲和力越 高，抗原抗体的结合也越紧。
源自文库
1Bq=1/S
1Ci=3.7
10¹ºBq
2)保持标记抗原的免疫活性：
每个蛋白质分子上标记1-2个碘原子。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
3)便于放射性测量：
125I标记的抗原有r射线能直接测量
4)放射化学纯度高： 放射化学纯度: 是指具有免疫活性的标记抗原占总 放射性的百分数。 放化纯度要求大于90%以上