分析多肽链的氨基

步骤
（1）活化 （2）酰胺化保护侧链羧基 （3）烷基化 （4）修饰Thr和Ser的羧基 （5）裂解和衍生
核酸来演算氨基酸的序列
近年来，由于核酸的研究在理论上及技术上的 迅猛发展，人们开始通过核酸来演算蛋白质中 氨基酸的序列。 详细情况请同学们参照书上所描述的来了解， 这里就不多说了！
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多肽链的氨基酸序列测定 原理
• N端测序原理 • 至今应用最广的N端测定法大多仍以 Edman降解原理为基础。 • 还有一种C端测序原理。 C
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Edman降解法
肽段先与异硫氰酸苯酯反应，该试剂只与 氨基末端氨基酸的游离α-氨基作用。再用冷 稀酸处理，氨基末端残基即从肽链脱落下 来，成为异硫氰酸苯酯衍生物，用层析可 鉴定为何种氨基酸衍生物。残留的肽链可 继续与异硫氰酸苯酯作用。一次鉴定出氨 基酸的排列顺序。
分析多肽链的氨基酸序列
应用化学或反向遗传学方法
肽链的氨基酸序列的测定
目前，进行氨基酸序列测定有两个关键步骤，即: 氨基酸残基一个一个依次从蛋白质和多肽的末端切 割下来。可采用化学发或酶解法进行裂解。可以从 蛋白质和多肽的N端进行裂解，也可从C端进行分 析。 正确鉴定每次切割下来的氨基酸残基。利用高效液 相色谱，对带有生色基团的氨基酸进行分离分析。
C端测序原理
虽然建立在Edman化学法上的自动化N端测 序技术日趋成熟，但仍有不少问题需借助C 端序列分析来解决。C端测序尤其适合于基 因重组蛋白是否正确表达的鉴定和大规模生 产时的质量控制、N端封闭蛋白的分析以及 DNA探针的设计。
C端测序原理
基于与N端Edman降解类似的原理，C端 分析采用化学试剂与蛋白质和多肽的α-羧基 反应，反应后的C末端衍生物被切割下来， 通过HPLC系统进行分离分析。一个完整的 C端序列分析包括以下几个步骤。