环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰动物模型的建立和评价
蒙医对卵巢早衰的认识及治疗
蒙医对卵巢早衰的认识及治疗[摘要]：近年来，卵巢早衰的发病率逐渐升高，且呈现年轻化趋势。
卵巢早衰的发病机制尚未完全阐明，且目前对于预防卵巢早衰及保存生育力的措施较少，本文将近年蒙医学对卵巢早衰的治疗情况进行总结分析，以期为临床防治卵巢早衰提供新思路。
[关键词]：卵巢早衰；蒙医；认识；治疗[中图分类号]：R711.75[文献标识码]：A卵巢早衰（POF）是指女性40岁之前即闭经的现象，表现为月经紊乱、闭经、不孕等症状。
其血清学特征是低雌激素和高促性腺激素，而低雌激素还会增加更年期提前、心脑血管疾病、骨质疏松及心理疾病（如抑郁症）的发生[1,2]，对患者的生存质量是极大的影响。
POF的病因尚不清楚，可能由遗传因素、自身免疫性因素、环境因素、医源性因素（手术、放化疗）等不良因素引起[3-6]。
由于当前社会压力大，生育年龄推后及环境等因素综合影响下，POF的发病率在上升，且呈现年轻化趋势[7]。
因此保护卵巢功能受到越来越多的重视。
目前对卵巢早衰患者的西医治疗各有利弊，尚无理想的治疗方案。
随着近年来传统医药的优势和特色以及天然中草药物越来越受到人们的重视，蒙药在临床中的应用亦越来越广泛。
基于此，笔者对近几年国内外文献进行整理，对蒙医药在改善卵巢功能方面进行述评，以期为临床治疗提供依据。
1.卵巢早衰的蒙医病机根据古籍记载，蒙医学并无POF的病名，根据其临床表现，可归为“月经不调”、“闭经”、“不孕症”、“更年期综合征”等范畴。
妇女之身体在进行生命活动需要三种能量—三根(赫依、希拉、巴达干)和七种物质基础—七素(食物精华、血、肉、脂肪、骨、骨髓、精液)共同协调。
三根之任何一方若出现偏盛或偏衰，或七素与三根的平衡失调，相互为害，或由某种外因，致使三根失调，便会影响月经，引起生殖系统疾病[8]。
所以，在蒙医学中，卵巢早衰的病机就是先天因素或者后天因素对精府直接损害并引起卵子的三根和七素失衡，当赫依旺盛与巴达干相搏，或合并黏从而影响气血运行，作用于卵巢和子宫，进而导致其正常生理运行受到阻扰，内环境平衡受到破坏，继而出现卵巢早衰相关症状。
抗肿瘤药物体内筛选试验标准操作规程(SOP)
抗肿瘤药物体内筛选标准操作规程概述：抗肿瘤药物是指能够直接杀伤或抑制肿瘤细胞生长或增殖的一类药物,作用机制包括抑制肿瘤细胞核酸或蛋白质的合成、干扰大分子物质代谢、干扰微管系统、抑制拓扑异构酶等.本操作规程包括与抗肿瘤药物申请临床试验和申请上市有关的非临床有效性和安全性研究的内容,其中着力强调非临床有效性和安全性之间的关联性，以及非临床研究和临床试验之间的关联性。
旨在一方面为抗肿瘤药物的非临床研究提供技术参考；另一方面,通过技术要求引导科学有序的研发过程，使国内此类药物的研发更趋规范和合理。
本操作规程仅代表目前对抗肿瘤药物非临床研究的一般性认识.具体药物的非临床研究应在本指导原则的基础上,根据药物的自身特点制订研究方案。
研究目的：建立一套包括抗肿瘤药物体内作用的药效学研究和评价体系及相应的标准操作规程以及抗肿瘤药物安全性和作用新机制的研究.①有效性研究抗肿瘤药物有效性研究的目的主要在于探索受试物的作用机制、作用强度、抗瘤谱等,为之后的安全性评价以及临床试验中适应症、给药方案的选择提参考信息。
②安全性评价安全性评价的目的主要包括：（1）估算 I 期临床试验的起始剂量；（2）预测药物的毒性靶器官或靶组织；（3）预测药物毒性的性质、程度和可逆性；（4）为临床试验方案的制订提供参考.研究计划:(a)小鼠急性毒性测试按照急性毒性测试的常规方法，选用昆明种小鼠,通过腹腔注射方式给药，测定体外抗肿瘤活性突出的化合物的半数致死量（LD50)，参考给药小鼠体重变化情况，评价化合物的急性毒性，并确定小鼠体内抗肿瘤活性测试的给药剂量。
（b）小鼠体内抗肿瘤活性测试根据动物体内抗肿瘤活性测试的标准方法，选用昆明种小鼠，皮下接种肉瘤S180或肺癌H22瘤株，选择体外活性突出且急性毒性较低的化合物，设定合适的剂量通过腹腔注射方式给药，以临床常用抗肿瘤药物环磷酰胺作为阳性对照药物，测定肿瘤生长抑制作为体内活性评价指标。
(c）专利保护范围内的化合物的继续合成申请保护范围较大的专利,合成部分可能具有良好活性的新的化合物,拓展研究范围，发现活性更强的化合物，并申请新的发明专利。
隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响
隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响卢岩;田梦;沈庆思;张晶;孙振高;张永臣;贾红玲【摘要】Objective To observe the effects of herb-partition moxibustion at navel on the expressions of Bcl-2 and Bax in rats with premature ovarian failure (POF); To explore its mechanism underlying improvement of POF. Methods POF model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide. Forty-eight Female Wistar rats were randomly divided into normal group, model group, moxibustion group and Western medicine group, with 12 rats in each group. Rats of moxibustion group were treated with herb-partition moxibustion at navel (Shenque, CV8), 30 min/d, once every other day; rats of Western medicine group were given intragastric dose of estradiol valerate, once a day, for 14 d. The protein and mRNA expressions of Bax and Bcl-2 in ovarian granulosa cells were detected by immunohistochemal method, Western blot and qRT-PCR, respectively.Results The weights of ovaries in the model group rats were significantly lower than those in the normal group (P<0.05). The expressions of Bcl-2 and Bax protein in ovarian tissue of each group were mainly expressed brown coloration and in the cytoplasm of cells. The range of Bax protein in granulosa cells of moxibustion group and Western medicine group was significantly less than that in model group. The range of Bcl-2 in moxibustion group and Western medicine group was significantly larger than that in model group. Compared with the normalgroup, the expressions of Bcl-2 protein and mRNA in the model group rats significantly decreased (P<0.05,P<0.01), and the expression of Bax protein and mRNA significantly increased (P<0.05,P<0.01). The expression level of Bcl-2 protein and mRNA was significantly higher in the moxibustion group and in the western medicine group than that in the model group(P<0.05,P<0.01). The expression level of Bax protein and mRNA in the moxibustion group was significantly lower than that in the model group (P<0.05,P<0.01). ConclusionThe herb-partition moxibustion at navel can improve the function of ovaries by up regulating the expression of Bcl-2 and down regulating the expression of Bax in POF rats model.%目的观察隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其对卵巢的保护机制.方法采用腹腔注射环磷酰胺建立大鼠卵巢早衰模型.48只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸脐组、西药组,每组12只.隔药灸脐组大鼠隔药灸"神阙",30 min/d,隔日1次,连续14 d;西药组大鼠予戊酸雌二醇灌胃,每日1次,连续14 d.采用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达.结果模型组大鼠卵巢质量明显低于正常组(P<0.05).Bcl-2、Bax蛋白主要表达在细胞胞浆中,隔药灸脐组和西药组较模型组卵泡颗粒细胞Bax表达范围明显缩小,Bcl-2表达范围明显增加.与正常组比较,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白和mRNA 表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,隔药灸脐组和西药组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01).结论隔药灸脐可能通过上调卵巢早衰模型大鼠卵巢Bcl-2和下调Bax的表达,改善卵巢功能.【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2017(024)007【总页数】5页(P40-44)【关键词】卵巢早衰;隔药灸脐;神阙;Bcl-2蛋白;Bax蛋白;大鼠【作者】卢岩;田梦;沈庆思;张晶;孙振高;张永臣;贾红玲【作者单位】山东中医药大学针灸推拿学院,山东济南 250355;山东中医药大学针灸推拿学院,山东济南 250355;山东中医药大学针灸推拿学院,山东济南 250355;山东中医药大学针灸推拿学院,山东济南 250355;山东中医药大学附属医院,山东济南250014;山东中医药大学针灸推拿学院,山东济南 250355;山东中医药大学附属医院,山东济南 250014【正文语种】中文【中图分类】R245卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）是指女性40岁前出现持续性闭经、性器官萎缩、高卵泡刺激素、黄体生成素水平及低雌激素水平等围绝经期症状。
环磷酰胺不同剂量及停药周期构建小鼠卵巢早衰动物模型比较研究
环磷酰胺不同剂量及停药周期构建小鼠卵巢早衰动物模型比较研究莫金桦;胡鸿;颜秋霞;李鹏东;陈彩蓉【期刊名称】《生殖医学杂志》【年(卷),期】2024(33)3【摘要】目的比较环磷酰胺(CTX)不同剂量和停药周期构建的小鼠卵巢早衰(POF)动物模型,寻找最佳造模方式,为进一步研究POF提供更为适用的实验模型。
方法8周龄动情周期规律的C57BL/6雌性小鼠共40只,随机分成5组:CON(对照组),CTX80(80 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX100(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX120(120 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX150(150 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续腹腔注射10 d,CON组注射生理盐水,其余组注射不同剂量CTX。
记录小鼠体重、动情周期和卵巢脏器系数等,比较得出CTX诱导POF模型最佳暴露剂量。
使用最佳CTX暴露剂量重新造模,随机分为模型组和对照组,分别在停药后第1、2、3、4周,检测血清性激素,计数各级卵泡等,比较得出CTX诱导POF模型最佳停药周期。
结果(1)研究最佳造模剂量时,CTX150死亡2只,而CTX80小鼠仍有完整的动情周期,说明这两种剂量并非最佳。
CTX各组在暴露过程中体重呈进行性下降,停止暴露后体重开始回升,但至停药第7天各组体重仍显著低于CON组(P<0.05)。
停药第7天各CTX组卵巢脏器系数均显著低于CON组(P<0.01),CTX100最低(P<0.001),但各CTX组间差异无统计学意义(P>0.05)。
考虑到尽量缩小药物对实验动物伤害的伦理要求,得出CTX诱导卵巢早衰模型的最佳暴露剂量为100 mg·kg^(-1)·d^(-1)×10 d。
(2)研究最佳停药周期时,模型组停药后第1、2、3、4周血清抗苗勒管激素(AMH)水平、雌二醇(E_(2))水平、原始卵泡、初/次级卵泡均显著低于同期对照组(P<0.05),卵泡刺激素(FSH)水平在第1、3、4周均显著高于同期对照组(P<0.05),而第1、2、4周的闭锁卵泡计数均显著高于同期对照组(P<0.05),均表现出POF典型特征。
环磷酰胺对小鼠遗传和生殖毒性影响的研究(1)--对骨髓细胞微核和染色体的影响
环磷酰胺对小鼠遗传和生殖毒性影响的研究(1)--对骨髓细胞微核和染色体的影响贾庆军;郭魁亮;刘天鹏;冯长龙;杨录军;周燕虹【期刊名称】《白求恩军医学院学报》【年(卷),期】2006(004)001【摘要】目的探讨不同剂量的环磷酰胺对小鼠骨髓细胞微核和染色体的影响.方法骨髓细胞微核试验,40只小鼠随机分为4组,3个实验组分别腹腔注射环磷酰胺10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg,于染毒后24 h、48 h取小鼠胸骨髓,计数小鼠骨髓细胞微核率;骨髓染色体畸变试验,16只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射环磷酰胺30 mg/kg,连续5 d染毒,第5 d染毒后6 h取双侧股骨骨髓,计数小鼠染色体畸变率,评价环磷酰胺对小鼠的毒性作用程度.结果小鼠腹腔注射环磷酰胺各剂量组骨髓细胞微核发生率显著高于对照组(P＜0.05);染色体畸变率亦高于对照组,且有非常显著性差异(P＜0.01).结论腹腔注射环磷酰胺可诱导小鼠染色体损伤.【总页数】2页(P6-7)【作者】贾庆军;郭魁亮;刘天鹏;冯长龙;杨录军;周燕虹【作者单位】050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;400038,重庆,第三军医大学预防医学系卫生毒理教研室;400038,重庆,第三军医大学预防医学系卫生毒理教研室【正文语种】中文【中图分类】R979.1;R994.1【相关文献】1.环磷酰胺对小鼠遗传和生殖毒性影响的研究(2)--对雄性小鼠生殖细胞的影响 [J], 贾庆军;刘天鹏;郭魁亮;冯长龙;杨录军;周燕虹2.烹调油烟对小鼠骨髓细胞染色体畸变率和微核率影响的研究 [J], 让蔚清;李东阳3.环磷酰胺对小鼠骨髓细胞微核率的影响作用研究 [J], 王文蔚;方芳;李春明4.艾灸对环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞微核率的影响 [J], 魏明俊;叶卓明5.环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞微核的影响因素的研究 [J], 余明泽;刘以农;蒋中仁;谢惠萍;葛宇杰;敬明武;郭明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
卵巢摘除诱导围绝经期综合征动物模型的研究进展
卵巢摘除诱导围绝经期综合征动物模型的研究进展I. 概要随着现代医学的发展，围绝经期综合征(perimenopause syndrome,PMS)的研究日益受到重视。
卵巢摘除(Ovariectomy)作为一种常用的治疗方法，已被广泛应用于治疗多种妇科疾病，如乳腺癌、子宫内膜癌等。
然而卵巢摘除后围绝经期综合征的发生率较高，给患者的生活质量带来了很大影响。
因此研究围绝经期综合征的机制和治疗方法具有重要意义，本综述主要介绍了近年来关于卵巢摘除诱导围绝经期综合征动物模型的研究进展，包括动物模型的选择、建立方法、评价指标以及围绝经期综合征症状的表现等方面的内容。
通过对这些研究的梳理，旨在为今后围绝经期综合征的治疗提供理论依据和实验参考。
卵巢摘除是绝经前女性一种常见的手术，但其对围绝经期综合征的影响仍有争议卵巢摘除是绝经前女性一种常见的手术，主要用于治疗卵巢囊肿、子宫内膜异位症等疾病。
然而随着围绝经期综合征(PMS)的关注度逐渐提高，卵巢摘除对围绝经期综合征的影响也引起了广泛关注。
尽管许多研究已经探讨了卵巢摘除与PMS之间的关系，但目前仍存在一定的争议。
一方面有研究表明，卵巢摘除可以显著降低PMS的发生率和严重程度。
这可能是因为卵巢在女性生殖激素的分泌中起着关键作用，而这些激素在围绝经期综合征的发生和发展中具有重要作用。
因此通过去除卵巢，可以减少这些激素的产生，从而降低PMS的发生风险。
此外卵巢摘除还可以减轻其他与PMS相关的症状，如潮热、失眠和情绪波动等。
卵巢摘除对围绝经期综合征的影响仍存在一定争议，未来的研究需要进一步探讨卵巢摘除与PMS之间的确切关系，以便为临床医生提供更准确的指导。
同时也需要关注卵巢摘除术后女性的生活质量和健康状况，以确保手术的安全性和有效性。
II. 卵巢摘除与围绝经期综合征卵巢是女性生殖系统的重要组成部分，负责产生卵子和激素。
卵巢摘除(Ovariectomy)是一种常见的妇科手术，主要用于治疗卵巢囊肿、子宫内膜异位症等疾病。
益经汤对环磷酰胺所致卵巢早衰小鼠的治疗作用研究
益经汤对环磷酰胺所致卵巢早衰小鼠的治疗作用研究牛逸琳;陈烁;陈雨诗;何冬梅;尹永芹【期刊名称】《广东药科大学学报》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】目的探究中药复方益经汤对环磷酰胺(CTX)所致卵巢早衰(POF)小鼠的治疗作用。
方法腹腔注射CTX建立POF小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照组、益经汤低、高剂量组和空白组,每组6只,灌胃给药30 d。
检测小鼠动情周期、体质量,卵巢、子宫指数和组织形态变化;ELISA检测血清中雌二醇(E_2)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、抗缪勒氏管激素(AMH)、孕酮(PROG)的浓度;免疫组织化学法(IHC)检测卵巢PI3K、AKT、FOXO3A蛋白表达水平。
结果益经汤干预模型小鼠后,动情周期趋向正常,高剂量组体质量、卵巢指数、子宫指数皆显著升高(P<0.05);卵巢体积增大,初级和次级卵泡数量增多,细胞纤维化改善;子宫内膜增厚,恢复子宫腺上皮细胞排列;阳性对照组和益经汤高剂量组血清E_2、AMH、PROG 均升高(P<0.05,P<0.01),FSH、LH显著下降(P<0.01)。
益经汤组和阳性对照组PI3K、AKT、FOXO3A蛋白表达皆显著降低(P<0.01)。
结论益经汤可有效改善动情周期,恢复卵巢和子宫的功能,可提高血清E_2、AMH、PROG和降低FSH、LH 的表达,机制可能与下调PI3K、AKT和FOXO3A蛋白表达有关。
【总页数】7页(P1-7)【作者】牛逸琳;陈烁;陈雨诗;何冬梅;尹永芹【作者单位】广东药科大学;惠州市中医医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.基于卵泡颗粒细胞凋亡研究归肾育宫汤对免疫性卵巢早衰小鼠的治疗作用2.盐酸千金藤碱对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的治疗作用3.人参皂甙Rb1对环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠的保护作用4.益气养荣复经方对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠的治疗作用及保护机制5.四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2022卵巢储备功能下降小鼠模型研究进展(全文)
2022卵巢储备功能下降小鼠模型研究进展(全文)摘要卵巢储备功能下降(decreased ovarian reserve , DOR )损害女性身心健康。
因伦理原因，难以对人体卵巢组织进行研究，构建DOR动物模型是解决这一难题的办法。
构造DOR动物模型有助于研究其病理生理及探索治疗措施。
目前构建小鼠DOR模型的方法主要有：使用药物(化疗药物、干扰代谢类药物、免疫调节剂等X射线照射、基因工程、环境毒物损伤等，这些造模方法各具特点，其中注射化疗药物环磷酰胺是建立DOR 小鼠模型的一种较好的方法，具有操作简单、经济、周期快、效果确切、易重复、卵巢损伤程度可控的优点。
本文对DOR小鼠常用建模方法的原理及特点进行综述。
卵巢储备功能下降(decreased ovarian reserve , DOR )是指女性卵巢卵泡数量减少，或伴有质量下降，导致月经周期紊乱、经量减少、闭经、生育力下降甚至不孕等一系列临床表现的生殖系统病变。
DOR诊断标准为卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone , FSH ) >10 U/L 或抗苗勒管激素(anti-Mullerian hormone , AMH ) <1.0 pg/L [ 1 L DOR 在不孕症人群中发病率约为10% [ 2 ],近年来有增高趋势。
DOR病因尚未完全清楚，与年龄、放化疗、手术损伤、烟酒等不良嗜好以及遗传因素等有关，部分患者原因不明。
目前DOR尚无有效的治疗方法,戒除烟酒嗜好、调整月经周期、使用抗氧化剂,有生育需求者采用诱导排卵或辅助生殖技术，以期达到对症治疗。
因此，探索DOR的病因、病理改变、发病机制、治疗措施有望对疾病的治疗取得突破性进展。
但受伦理限制,难以用人的卵巢组织进行硏究，DOR动物模型有助于解决这一难题。
目前国内夕卜文献扌艮道了多种DOR动物模型造模方法，国内已有DOR 动物模型相关综述［3 ］,但是动物种类未统一，具体造模方法的剂量、异同点比较、是否可逆等有待深入阐述。
环磷酰胺诱导的小鼠骨髓抑制模型及中药对其防治作用机制研究进展
环磷酰胺诱导的小鼠骨髓抑制模型及中药对其防治作用机制研究进展王成龙;赵东峰;杨志烈;贾友冀;常君丽;王拥军;杨燕萍【摘要】Patients with chemotherapy-induced myelosuppression is prone to infection or bleeding,which has a serious impact on their treatment,prognosis and quality of life and even endangers life and leads patients and their family to suffering.In recent years,traditional Chinese medicine in preventing and treating chemotherapy-induced myelosuppression have gradually garnered increasing attention.As the animal model of myelosuppression is being established,applied and mature,research on mechanism of Chinese meteria medica in preventing and treating chemotherapy-induced myelosuppression has made great achievements,showing the advantages and prospect of Chinese meteria medica in the treatment of this disease.%化疗后骨髓抑制容易导致患者发生感染或出血,严重影响患者治疗、预后和生命质量,甚至危及生命,给患者及家属带来很大痛苦.中医药防治化疗导致骨髓抑制越来越受到重视.随着骨髓抑制动物模型的建立、应用和成熟,中药防治化疗导致骨髓抑制机制的研究也取得许多进展,显出中药治疗的优势和前景.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2017(012)009【总页数】6页(P2252-2257)【关键词】环磷酰胺;化疗;骨髓抑制;小鼠模型;机制研究【作者】王成龙;赵东峰;杨志烈;贾友冀;常君丽;王拥军;杨燕萍【作者单位】上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;上海中医药大学附属龙华医院科技中心实验室,上海,200032;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;滨州医学院中西医结合学院,烟台,264003;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;上海交通大学医学院附属瑞金医院骨科,上海,200025;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032;上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】R285.5化疗是肿瘤治疗的重要手段,骨髓抑制是化疗最常见的不良反应,严重影响化疗进行,使临床疗效降低。
环磷酰胺构建动物免疫抑制模型的研究进展
Chinese Journal of Veterinary Medicine中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期环磷酰胺构建动物免疫抑制模型的研究进展伍维高,钟金凤(湖南环境生物职业技术学院,湖南衡阳421005)中图分类号:O571.21+1㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:05296005(2019)02008703收稿日期:20180528基金项目:湖南省教育厅项目(16C0563);湖南省科技厅项目(2017JJ5026)作者简介:伍维高(1979-),男,畜牧师,硕士,研究方向为动物繁殖与生产,E-mail:30942422@通讯作者:钟金凤,E-mail:498379002@㊀㊀近几年来,动物疫病肆意流行,免疫接种成为预防传染病的有效措施之一,而免疫反应过程相当复杂,诸多因素会影响接种效果,如免疫抑制性疾病㊁不良的饲养环境㊁微量元素和蛋白质的缺乏等,常导致免疫接种失败,给生产带来不可挽回的重大损失㊂为提高机体抗病力,增强动物免疫力,免疫增强剂得以广泛运用㊂为了进一步研究此类制剂,人为构建免疫抑制模型的研究手段得到了诸多研究者的青睐㊂而环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX),以其诱导动物产生免疫抑制作用效果显著,且成本低廉,越来越广泛地运用到制备动物免疫抑制模型中㊂为此,本文对环磷酰胺构建免疫抑制模型进行综述㊂1㊀环磷酰胺的药理作用经口服或静脉注射的环磷酰胺主要在肝脏进行代谢,生成低毒性的4-羟基环磷酰胺和醛磷酰胺,分布全身,进一步降解为磷酰氮芥㊁丙烯醛和去甲氮芥,结合于快速生长细胞的DNA 上,产生强烈的细胞毒性㊂极少部分可进一步氧化成4-酮环磷酰胺和羧基环磷酰胺,无毒性,随尿排出[1]㊂2㊀CTX 免疫抑制机理2.1㊀环磷酰胺对免疫基因的影响2.1.1㊀抑制抗菌蛋白基因表达㊀内源性抗菌蛋白是天然免疫的重要组成部分,其中杀菌/渗透增强蛋白(Bactericidal /permeability increasing protein,BPI)㊁防御素(Defensins,DF)以及血小板型磷脂酶A 2(Phospholipase A 2,PLA 2)备受关注[2]㊂大鼠连续5d 腹腔注射环磷酰胺40mg /kg㊃bw,对照组注射等体积生理盐水,结果显示,对照组大鼠的睾丸㊁附睾㊁胸腺㊁肝㊁小肠㊁大肠6种器官均表达BPI㊁β-DF-1㊁血小板型PLA 2;而环磷酰胺组胸腺㊁肝无BPI 表达,睾丸㊁胸腺㊁肝无β-DF-1表达,睾丸㊁胸腺无血小板型PLA 2表达,其他有表达的组织中其含量比对照组低[3],试验提示,环磷酰胺可抑制体内抗菌蛋白基因表达㊂2.1.2㊀影响免疫相关基因的表达㊀环磷酰胺对免疫相关基因有一定影响㊂经环磷酰胺处理的荷瘤鼠脾脏㊁骨髓和血浆相关多种免疫调节因子基因上调,包括危险信号㊁模式识别受体㊁炎症介质㊁生长因子㊁细胞因子㊁趋化因子和趋化因子受体[4]㊂通过基因芯片技术检测环磷酰胺干预的胚胎干细胞发现:自体免疫激活和移植排斥相关基因如CD 3㊁CD 28㊁CTLA 4㊁MHC II ㊁PRF 1㊁GZMB 和IL-2R 基因下调,而免疫相关受体基因如IL 1R 2㊁IL 18R 1和FLT 3上调[5]㊂2.2㊀环磷酰胺对动物转录水平的影响2.2.1㊀抑制骨髓细胞相关mRNA 表达㊀环磷酰胺诱导骨髓抑制,造成骨髓细胞(BM)降低㊂雄性昆明种小鼠连续3d 腹腔注射150mg /kg㊃d 环磷酰胺,7d 后采骨髓细胞通过Real time PCR 检测发现,试验组BM 细胞钙敏感受体(Calcium-sensing recep-tor,CaSR)和丝裂素活化蛋白激酶(Mitogen-activa-ted protein kinase,MAPK)mRNA 水平极显著高于对照组(P <0.01),引起BM 造血干细胞㊁间充质干细胞和内皮祖细胞增殖㊁分化和动员产生明显障碍[6]㊂2.2.2㊀调节细胞凋亡相关mRNA 表达㊀环磷酰胺对细胞凋亡的影响主要体现在两方面:增加促凋亡基因mRNA 表达而抑制抗凋亡基因mRNA 表达,从而诱导细胞凋亡㊂SPF 级NIH 雄性小鼠于试验期第9㊁11㊁13天腹腔注射环磷酰胺10mg /kg,于14d㊁28d 取脾脏采用半定量RT-PCR 检测促凋亡基因-Caspase-9mRNA 和抗凋亡基因-B 淋巴细胞基因2(B-cell lymphonma gene 2,BCL-2)的表达,两次结果均显示,模型组Caspase-9mRNA 表达较对照组显著升高而BCL-2mRNA 表达显著降低[7]㊂8~12周远78中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期Chinese Journal of Veterinary Medicine交系昆明种小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,1次/d,连续3d,第10天取小鼠脾脏测定凋亡相关基因,结果显示,BAX(Bcl-2associated X protein)mR-NA表达水平明显上升,而BCL-2mRNA表达明显下降[8]㊂2.2.3㊀降低免疫相关受体mRNA表达㊀环磷酰胺可降低免疫相关受体mRNA的表达㊂树突状细胞相关C-型凝集素-1(Dectin-1)和Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)主要表达在免疫细胞上,为免疫相关受体,与免疫状态有关[9]㊂给予150mg/kg环磷酰胺的BALB/c小鼠与第4㊁7㊁9天取肺组织测定Dectin-1mRNA,结果显示,在第4㊁7天肺组织Dec-tin-1mRNA表达较对照组明显下降(P<0.05)[10]㊂24只昆明种小鼠(雌性)腹腔注射环磷酰胺150 mg/kg,4h后肺泡巨噬细胞TLR2mRNA表达与对照组相比极显著下降(P<0.01);8h后TLR4mR-NA表达极显著降低(P<0.01)[11]㊂2.2.4㊀影响免疫因子mRNA表达㊀环磷酰胺对Th1㊁Th2类细胞因子mRNA表达均有不同程度影响㊂汪祯等[12]用SPF级昆明种小鼠按50mg/kg㊃bw剂量隔日腹腔注射环磷酰胺,共7次,14d后,无菌取脾脏测定IL-2mRNA㊁IL-10mRNA,结果显示, IL-2mRNA㊁IL-10mRNA表达水平与对照组相比显著下降;易有金等[13]腹腔注射40mg/kg㊃d环磷酰胺,结果显示,脾脏和胸腺中IL-2㊁IL-10㊁IL-12㊁IL-4㊁TNF-α和IFN-γmRNA的表达量降低,以上试验提示,环磷酰胺对Th1㊁Th2类细胞因子表达均呈现下调现象[14]㊂2.3㊀环磷酰胺对动物蛋白水平的影响2.3.1㊀抑制细胞周期相关蛋白表达㊀环磷酰胺降低着丝粒蛋白B(Centromere Protein,CenpB),Cen-pB是染色体着丝粒/动粒复合体上一种最重要的功能蛋白,其特异性结合位点位于着丝粒α1-卫星DNA上17bp的CenpB盒,参与着丝粒异染色质的形成,环磷酰胺可致CenpB蛋白含量异常,致细胞无法正常分裂㊂昆明种小鼠连续7d腹腔注射50 mg/kg㊃bw环磷酰胺,5d后取血通过Western Blot-ting方法检测CenpB蛋白,其含量显著低于对照组[15]㊂2.3.2㊀增加细胞凋亡相关蛋白表达㊀环磷酰胺可通过增加细胞凋亡蛋白的表达影响Fas/Fas L系统介导的凋亡蛋白㊂SPF级ICR纯种雄性小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg㊃bw,用流式细胞术检测Fas 抗原(CD95)介导细胞凋亡的蛋白,其表达量与对照组相比显著升高[16]㊂人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat加入环磷酰胺3mg/L,于12㊁24㊁48h收取细胞,Western Blot检测FasL(Fas ligand,fas配体)和FADD(Floationg Point Addition,胞浆死亡信号衔接蛋白)表达,结果表明,未处理的细胞无FasL和FADD表达,而环磷酰胺处理组表达FasL和FADD,且表达水平随环磷酰胺刺激时间延长而增加[17]㊂除此,环磷酰胺能显著诱导Fas/Fas L下游蛋白Caspases产生[18],使凋亡不可逆进行㊂3 环磷酰胺在动物上的应用因环磷酰胺主要作用于快速生长细胞的DNA,并能从基因转录㊁翻译和蛋白表达等多方面产生细胞毒性㊂免疫细胞属于快速生长细胞,因此,环磷酰胺对免疫系统影响甚大,故可用环磷酰胺作为免疫抑制剂构建免疫抑制模型,这是环磷酰胺在动物上的主要用途㊂3.1㊀环磷酰胺抑制动物免疫器官㊀在环磷酰胺作用下鸡表现出形态退行性改变,包括腔上囊囊泡不发达,即腔上囊初级滤泡严重萎缩,皮质和髓质间隔不明显且滤泡间结缔组织严重增值[19]㊂Marsh J 研究发现,脾脏内正常椭球相关细胞在环磷酰胺作用后1周变为空泡[20]㊂3.2㊀环磷酰胺降低动物免疫细胞数量㊀连续3d 给7~8周龄雌性尼古拉斯火鸡注射环磷酰胺(0~ 100mg/kg㊃bw),测定血液学指标发现,环磷酰胺在初始注射后24~72h引起明显的白细胞减少㊁淋巴细胞减少㊁血小板减少和白细胞减少㊂但对单核细胞循环数㊁细胞体积㊁血浆蛋白无明显影响㊂同时,无法确定对嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的变化,因为它们在机体内的数量微量[21]㊂3.3㊀环磷酰胺减少免疫分子产生㊀研究表明,环磷酰胺可减少免疫分子产生:用80mg/kg㊃bw环磷酰胺腹腔注射小鼠,同位素标记法显示24h和48h其肠道蛋白损失显著高于对照组,连续2d注射环磷酰胺(50mg/kg㊃bw),可造成肠黏膜SIgA损伤,肠道固有层IgA表达量减少[22]㊂环磷酰胺(10mg/ kg㊃bw)与单剂量长春新碱(0.025mg/kg㊃bw,静脉注射)和单剂量的L-天冬酰胺酶(400IU/kg㊃88Chinese Journal of Veterinary Medicine中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期bw,静脉注射)同时注射狗,3d后抗体反应受抑制[23]㊂环磷酰胺在抑制免疫系统的同时,其他新陈代谢旺盛的组织如胃肠㊁毛发等亦会受影响,因此,用环磷酰胺造模的同时,动物可出现采食量降低㊁生长性能受阻㊁毛发脱落等现象[24-25]㊂4 小结环磷酰胺主要作用快速生长细胞DNA,并从基因水平㊁转录水平和蛋白水平影响免疫系统,它可下调抗菌蛋白基因㊁免疫相关基因的表达,增加促凋亡基因mRNA和抑制抗凋亡基因mR-NA转录,降低着丝粒蛋白B含量,抑制细胞正常分裂;诱导促凋亡蛋白Caspases产生,促使凋亡不可逆进行,从而广泛引起细胞周期改变㊁诱导细胞凋亡发生,最终表现出免疫器官㊁免疫细胞和免疫分子的现象,可广泛应用在动物免疫抑制模型上㊂参考文献:[1]㊀钟金凤,方热军.环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用[J].中国免疫学杂志,2016,10(32):15411546. [2]㊀Calafat J,Janssen H,Tool A,et al.The bactericidal/permeabili-ty increasing protein(BPI)is present in specific guanules of hu-man eosinophilsl[J].Blood,1998,91(12):44704475. [3]㊀王昕昕,梁宁生,张炜炜,等.环磷酰胺对抗菌蛋白的影响[J].黑龙江科技信息,2014(30):45.[4]㊀Moschella F,Valentini M,AricòE.et al.Unraveling cancer che-moimmunotherapy mechanisms by gene and protein expression pro-filing of responses to cyclophosphamide[J].Cancer Res,2011, 71(10):35283539.[5]㊀El-Serafi I,Abedi-Valugerdi M,PotácováZ,et al.Cyclophosphamidealters the gene expression profile in patients treated with high doses prior to stem cell transplantation[J].PLoS One,2014,9(1):111.[6]㊀徐尚福.人参皂苷Rg1对环磷酰胺诱导骨髓抑制小鼠骨髓功能的改善及机制研究[D].遵义:遵义医学院,2009. 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[24]㊀冯焱.环磷酰胺对肉仔鸡免疫机能的影响[J].饲料博览,2007,19:3134.[25]㊀张玲,陈代文,杨继文,等.壳寡糖对环磷酰胺应激仔猪生产性能和免疫功能的影响,中国畜牧杂志,2013,49(17):5862.98。
不同来源诱导剂建立的卵巢早衰动物模型的比较
不同来源诱导剂建立的卵巢早衰动物模型的比较目的比较不同来源的诱导剂建立的卵巢早衰动物模型。
方法选取97只雌性SD大鼠分别给予120 mg/kg的环磷酰胺、白消安、35%半乳糖食物丸，制备卵巢早衰动物模型。
通过观察体重变化，激素血清浓度水平，卵巢病理切片等分析数据。
结果单次给药环磷酰胺后，大鼠体重增加非常缓慢，卵巢受损；随着血清LH浓度上升趋势，血清E2浓度下降趋势和受损的卵巢，35%半乳糖食物颗粒饲喂的大鼠体重增加缓慢，其中白蛋白和总蛋白以及受损的卵巢的血清浓度显著升高（P＜0.05）。
结论不同诱导物可产生不同特征POF模型，为进一步研究提供有效的实验依据。
标签：大鼠；卵巢早衰；动物模型卵巢早衰（POF）是指40岁以前卵巢早衰或卵巢功能衰退，主要发生在平均绝经年龄前两年的标准偏差人口，其原因可能与内源性基因，异常自身免疫，感染，医疗疗法等影响有关。
POF具有明显异质性及显着遗传性。
染色体异常被一直被认为是POF的常见原因。
基于POF基因组学致突变大鼠模型在探索，且不同模型之间存在较大差异，因此在探索POF治疗方法时很难选择合适的动物模型。
本文通过比较不同方法致大鼠卵巢早衰动物模型之间的差异，为POF治疗进一步研究提供实验依据。
1 材料和方法1.1 一般材料环磷酰胺由上海金穗生物有限公司提供。
35%半乳糖食品颗粒由南通营养饲料有限公司提供。
1.2 研究方法雌性大鼠在室温（22±2）℃和相对湿度（50±10）%的标准实验室条件下培养12 h光暗周期，水和食物随意提供。
每只大鼠的平均食物消耗为28g。
所有手术均在戊巴比妥钠麻醉下进行。
将体重约为（180～200）g的56只SD大鼠分成A、B、C组，A组大鼠用120 mg/kg的溶于0.9%盐水溶液中的单次腹膜内注射环磷酰胺处理，B组大鼠用单一的用0.9%盐水溶液以12 mg/kg的剂量自发注射白消安注射液，C组大鼠为对照组，用0.9%盐水溶液腹膜内处理。
药物性卵巢早衰动物模型的制备
真实可靠 ， 误差在允许的范围之内。 １ ． ４ 透射 电镜 下观察 酒精丙酮逐级脱水 ， Ｅ ｐ ｏ ｎ ８ １ ２ 树脂包埋 ， 使用超薄切 片机将组织切成 ７ ０ ｎ ｍ ／ 片的超
薄切 片 ， 柠檬 酸铅 一 醋 酸 双 氧 铀 双 染色 法 染 色 ， Ｈ － ７ ５ ０ ０ 型透 射 电镜下 观察 、 摄片。
镜。 ２ ． ２ 电镜 下观 察到 的 变化 模 型 组 较 正 常对 照 组 卵 巢皮 质颗粒 细 胞 中约 有 １ ０ ％ 的细 胞 超 微 结 构 发 生 变
化， 粗面内质 网出现扩 张及脱颗 粒现象 ， 视 为造模成 功 。 电镜 下大 鼠卵 巢 内颗粒 细胞 细胞 中出现 明显 的裂 隙（ 空泡 ） ， 细胞质 电子密度增高， 放大后再次观察为
一
ｑ法进行两 两 比较 ， Ｐ值 以 ０ ． ０ ５为显著性 水平 界
值； 若不符合上述条件 ， 则应用秩和检 验， 整体 比较 Ｐ
值 以０ ． ０ ５为显著性水 平 界值 ， 两两 比较 Ｐ值 以 ０ ． ０ ０ ８ ３为显著性水平界值 。
２ 结 果
现象我们采用简便易行 的方法成 功制备大 鼠 Ｐ Ｏ Ｆ
到方差齐性要求。若方差分析差异性显著 ， 再用 Ｓ Ｎ Ｋ
—
院风湿免疫科统计的资料显示 ： 应用治疗量 的雷公藤 多甙片 ３个月 ， 便可 出现月经改变 ， 严重者甚 至发生
Ｐ Ｏ Ｆ 。而 发生 Ｐ Ｏ Ｆ的 严重 程 度 及 时 间与 患 者 的年 龄 、 药物 的种类 、 用药 持 续 时 间 和 药 物剂 量 有 关 。根 据 这
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． ． 潍坊 医学 院学报
２ ０ ０ ７年
第２ ９卷
一种卵巢目标基因过表达模型构建的方法
一种卵巢目标基因过表达模型构建的方法哇塞，今天要给大家讲讲一种卵巢目标基因过表达模型构建的方法呢！
首先呢，这个方法的步骤其实并不复杂啦。
先选取合适的实验动物，比如小鼠之类的。
然后通过特定的技术手段，将目标基因导入到卵巢细胞中。
这可不是随便搞搞就行的哦，这里面可有不少要注意的地方呢！比如说，在导入基因的时候，要确保操作的精准度，不能有偏差呀，不然可就前功尽弃啦！而且还要注意对实验动物的护理，让它们能在舒适的环境中进行实验呢。
这就好像盖房子，每一块砖都要放对位置，才能盖出坚固漂亮的房子呀！
接下来谈谈安全性和稳定性吧。
在整个过程中，安全性那可是至关重要的呀！要确保实验对动物的伤害最小化，不能让它们太遭罪呀。
而且稳定性也不能忽视，得保证基因能够稳定地表达，不能一会儿有一会儿没的，那可不行呀！这就像走钢丝，得稳稳当当的，不能摇摇晃晃的。
再说说这个方法的应用场景和优势。
它可以用于研究卵巢相关疾病的发生机制呀，还能为药物研发提供重要的依据呢。
它的优势可多啦，比如能够更直接地研究基因的功能和作用，这可比间接研究厉害多了吧！就像直接看到了问题的本质，而不是绕着弯子去猜呀！
给大家举个实际案例吧。
之前有研究人员利用这种方法构建了一个卵巢早衰的模型，通过对这个模型的研究，深入了解了卵巢早衰的发生过程，为治疗提供了新的思路和方向呢。
这效果，是不是很厉害呀！
所以呀，这种卵巢目标基因过表达模型构建的方法真的是超级有用的呀！它为我们打开了一扇了解卵巢奥秘的大门，让我们能够更好地探索和解决相关的问题呢！。
环磷酰胺实验报告
一、实验目的本研究旨在探讨环磷酰胺在体外对肿瘤细胞的抑制作用，为环磷酰胺在临床肿瘤治疗中的应用提供实验依据。
二、实验材料1. 实验细胞：人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株SGC-7901、人乳腺癌细胞株MCF-7。
2. 实验药物：环磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）。
3. 实验试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、DMSO（二甲基亚砜）。
4. 实验仪器：CO2培养箱、酶标仪、倒置显微镜、离心机等。
三、实验方法1. 细胞培养：将人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株SGC-7901、人乳腺癌细胞株MCF-7分别接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待细胞贴壁生长至对数生长期时进行实验。
2. 药物制备：将环磷酰胺用DMSO溶解，配制成一定浓度的环磷酰胺溶液。
3. 实验分组：将细胞分为对照组、环磷酰胺低浓度组、环磷酰胺中浓度组、环磷酰胺高浓度组。
4. 实验步骤：（1）取对数生长期的细胞，用RPMI-1640培养基洗涤两次，调整细胞浓度为1×10^5细胞/mL。
（2）将细胞按分组分别加入相应的药物溶液，对照组加入等体积的DMSO。
（3）将细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时。
（4）采用MTT法检测细胞增殖抑制率。
5. 数据处理：采用SPSS 22.0软件进行统计分析，数据以均值±标准差（±SD）表示，组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。
四、实验结果1. 环磷酰胺对A549细胞的抑制作用：随着环磷酰胺浓度的增加，A549细胞的增殖抑制率逐渐升高，呈现剂量依赖性。
环磷酰胺低浓度组、中浓度组、高浓度组的增殖抑制率分别为（29.2±3.5）%、（49.3±5.2）%、（72.1±6.8）%。
2. 环磷酰胺对SGC-7901细胞的抑制作用：随着环磷酰胺浓度的增加，SGC-7901细胞的增殖抑制率逐渐升高，呈现剂量依赖性。
高黏血症动物模型制作的步骤及方法
高黏血症动物模型制作的步骤及方法高黏血症又称高黏滞血症或血液高黏滞综合征，是指某种血液黏滞因子升高所造成的一种病理综合征，也是临床上冠心病、高血压、脑卒中以及糖尿病、肾病等疾病的常见并发症。
患者由于血液黏稠度增高常可引起微循环障碍，使心、脑、肾等重要脏器血液供应不足，导致缺氧而使原有病情加重。
1老年大鼠模型(1)复制方法分别采血测定平均体重约为350g，年龄为20月龄老年大鼠和平均体重约为600g，年龄为12个月龄的SD大鼠的血流动力学指标。
(2)模型特点前者低切全血黏度、纤维蛋白原红细胞比容和血沉方程K值极显著性高于后者(P<0.01)，前者高切全血黏度、血浆黏度和血沉显著高于后者(P<0.05)。
本模型的优点是指标变化以自然老化为基础，与老年高黏滞血症患者发病原因类似；但动物来源有限，且价格较贵。
在很大程度上限制了其在实验研究中的应用。
(3)比较医学近年来，随着人类社会老龄化程度的升高，高黏滞血症的发病率随年龄增加亦呈明显增高的趋势。
本模型根据大鼠随自然增龄其血流变呈黏、浓、凝、聚改变的特点所建立，这些变化均与人类老年的血液流变学改变相似。
同时老年大鼠易形成体内、外血栓，由于临床上常见的老年病如冠心病、脑血栓、糖尿病、肿瘤等均有血液流变性质异常，尤以血液黏度的增高更为明显。
因此，采用自然老化大鼠作为高黏滞血症模型动物，适用于对临床高黏滞血症药物治疗及药物筛选方面动物模型的研究。
2高脂饲料喂养法(1)复制方法用体重为2.5～3.0kg的实验兔，给动物每天饲喂高脂饲料(胆固醇0.5％，蛋黄粉15％，猪油5％，基础饲料79.5％)，连续喂养8周后，分别采血作血液动力学指标测定。
(2)模型特点血液流变指标测定结果显示模型动物全血比黏度、全血还原黏度以及红细胞压积均明显增高，血液流变学异常。
模型制作方法简便，造模时间短，重复性好。
(3)比较医学高黏血症是临床上高血压、冠心病及脑血管疾病的主要危险因素。
环磷酰胺在动物模型体内抗肿瘤影响及抑瘤机制的研究
环磷酰胺在动物模型体内抗肿瘤影响及抑瘤机制的研究作者：迟淑萍白冰珂谢进陈红鸽杜丽由莉越程云来源：《中国医药导报》2012年第14期[摘要] 目的探讨环磷酰胺（CTX）在动物模型体内抗肿瘤影响及抑瘤机制。
方法建立小鼠实体瘤模型和腹水瘤模型:分别在昆明系小鼠皮下接种S180肉瘤细胞、腹腔接种鼠源性H22肝癌细胞，同时给予环磷酰胺处理小鼠，其后观察各组肿瘤生长大小，小鼠存活率的变化；应用Western blot技术检测凋亡抑制基因（Bcl-2）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）含量、抑癌基因P53及P21的蛋白表达。
结果环磷酰胺组肿瘤重量明显低于模型组（P ＜ 0.05），其抑瘤率为88.55%；小鼠存活天数均较模型组长，其生命延长率为57.73%；环磷酰胺可明显诱导P53的表达，抑制BCL-2的表达，从而促进肿瘤细胞的凋亡，但对P21没有作用；对瘤体组织中VEGF蛋白表达水平亦有抑制作用。
结论环磷酰胺可通过激活抑癌基因P53，抑制抗凋亡基因Bcl-2和促血管生成因子VEGF等多种途径，发挥抗肿瘤活性，为抗肿瘤动物模型尤其为调节抗肿瘤相关基因表达方面的阳性药物对照提供重要的实验依据。
[关键词] 环磷酰胺；Western blot；S180肉瘤；H22肝癌细胞；抗肿瘤相关基因[中图分类号] R969.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（b）-0020-03肿瘤目前是危害人类健康的主要疾病，环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）作为一种抗癌谱广、疗效较好的抗癌药物，已广泛应用于临床。
由于该药物的良好抗癌性能，尤其是具有对癌细胞与正常细胞杀伤力差别很大这一特性，使得其在临床得到了广泛应用。
环磷酰胺在细胞水平以及联合用药等方面的研究较多[1-2]，目前肿瘤化疗所应用的大多数药物，都经移植性动物肿瘤试验而被发现，并以此为模型进行疾病发生机制和药物筛选的研究，因此它是筛选抗肿瘤新药中最常用的模型[3]，对研究肿瘤的病因、发病机制、抗癌药物筛选及肿瘤防治等都具有非常重要的意义[4]。
卵巢早衰动物模型造模
卵巢早衰动物模型造模【摘要】卵巢早衰(POF)是多种病因所致的卵巢功能衰竭。
其病理表现复杂，病因和发病机制至今尚不清楚。
而且尚没有有效的预防和治疗方法。
由于卵巢早衰的病因多种多样，如自身免疫功能异常、遗传因素、代谢因素、化疗、放疗及感染等。
【关键词】卵巢早衰;卵巢早衰模型临床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前减退，常见为女性在40岁以前出现闭经，以闭经，不育，雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病［1、2］。
在人群中发病率为1%~3%，在继发性闭经中占2%~10%，诊断以至少半年或半年以上闭经多次发生，排除其他原因为基础［3］，卵巢早衰是妇科分泌领域的常见病［4］。
POF病因多种多样，具体发病机制尚不清楚，为了寻找病因和有效的治疗方法，就必须建立与人类临床表现和发病机制相似的动物模型。
国内外专家学者根据POF的病因的多样性建立了不同的动物模型。
1 材料与方法1.1 实验材料雌性Wistar大鼠。
1.2 实验动物分组本实验选用雌性Wistar大鼠40只，体重260~300 g，随机分成2组。
正常对照组：20只。
实验模型组：20只。
1.3 实验方法1.3.1 POF大鼠模型制备实验模型组雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片)，0.6 mg/(100 g•d)体重，灌胃1次/d，连续9 d，建立POF动物模型。
1.3.2 组化标本制备对实验动物用1％戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min 滴入1％肝素钠的生理盐水500 ml，同时剪开右心耳。
继用0.1 m磷酸盐缓冲液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。
取出实验动物的卵巢组织，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2 h，之后将实验动物的卵巢组织切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。
在4℃冰箱中存放，至组织薄片沉底，经水包埋，恒冷箱连续横切片，片厚20 μm。
应用环磷酰胺对免疫抑制模型的建立及免疫抑制模型的检测
应⽤环磷酰胺对免疫抑制模型的建⽴及免疫抑制模型的检测应⽤环磷酰胺对免疫抑制模型的建⽴及免疫抑制模型的检测摘要⽬的：应⽤环磷酰胺建⽴⼩⿏免疫抑制模型并检测免疫抑制模型建⽴是否成功⽅法：⼗六只⼩⿏分为四⼤组，每组四只。
将四只⼩⿏平均分为两组，分别为对照组和免疫抑制组，第⼀天对两组的四只⼩⿏进⾏初次免疫，对照组⼩⿏分别注射0.4mlNS和0.4mlOVA-AL(OH)3，免疫抑制组⼩⿏分别注射0.4mlNS 和0.4mlOVA-AL(OH)3。
此后分别于第8、10、12、14天给对照组⼩⿏注射0.4mlNS，给免疫抑制组⼩⿏注射100mg/kg的CTX。
于第⼗五天对两组⼩⿏加强免疫，对照组⼩⿏分别注射0.4mlNS 和0.4mlOVA-AL(OH)3，免疫抑制组⼩⿏分别注射0.4mlNS和0.4mlOVA-AL(OH)3，即四组分别为NS-NS组、OVA-NS组、NS-CTX组、OVA-CTX组，免疫抑制模型建⽴。
⽤⼩⿏腹腔巨噬细胞吞噬墨汁试验对天然免疫功能进⾏检测，淋巴细胞转化试验对细胞免疫功能进⾏检测，双向免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验对体液免疫功能进⾏检测。
结果：细胞免疫的检测（淋转实验）结果全为阴性，吞噬细胞功能的检测（吞噬实验）结果为阴性，体液免疫的检测（双扩实验和ELISA）结果有三项测定项⽬为阳性。
结论：虽然本实验不⾜以证明CTX对免疫功能的抑制作⽤，但从⼀些数据可以看出CTX的免疫抑制功能。
AbstractObjective:cyclophosphamide was applied to establish the mice immunos uppression model and detection whether the immunosuppression model s uccess or not.Meyhod:Divid the 16 mice into four groups, each group of four. Divid the four mice into two groups, control group and immunosuppressive gro ups. On the first day giver primary immune to the two groups of fou mic e, Control group mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (OH) 3 0.4 ml, Immunosuppressive mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (O H) 3 0.4 ml. In 8, 10, 12, 14 days inject 0.4 ml NS to the control group mice, inject 100 mg/kg CTX to the immunosuppressive mice. In the fift eenth day give strengthen immunity to the two groups of mice. Control g roup mice were injected NS 0.4 ml and OVA -AL (OH) 3 0.4 ml, Immu nosuppressive mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (OH) 3 0.4ml, which means the four groups were NS-NS group, OVA-NS grpoup, NS -CTX group, OVA-CTX group.,Immunosuppression model is established. Use macrophage cell in abdominal cavity of mice phagocytosis ink expe riment to test the natural immune function, The lymphocyte transformatio n test to test the cellular immune function, double immunodiffusion test, ELISA to test the humoral immune function.Result: The results cellular immune detection (lymphocyte transformation test) were all negative, the result Phagocytes function detection (Consuming experiment) was all negative, three of the results of humoral immunity test ( double immunodiffusion test and ELISA) are positive.Conclusion：Although this experiment is not enough to prove that CTX ‘s inhibitory effect on the immune function, but the CTX’s immunosuppressive function can be seen from some of the datas.关键词：免疫抑制环磷酰胺固有免疫体液免疫细胞免疫引⾔⽬前化疗仍是临床上治疗肿瘤的三⼤有效⼿段之⼀,化疗在杀灭患者体内的癌细胞⽅⾯有很好的效果,但均有不同程度的毒副作⽤,如化疗后往往会出现⽩细胞减少,特别是中性粒细胞减少,⾎⼩板减少等情况，严重的会造成⼈体免疫功能降低甚⾄是免疫功能缺陷[1],随着肿瘤化疗的不断发展，肿瘤的治疗效果有了很⼤提⾼，但其免疫抑制的毒副作⽤却难以克服。
动物病理实训课兔子炎症模型的建立
动物病理实训课兔子炎症模型的建立
动物病理实训课中，兔子炎症模型的建立是一种常见的实验方法，用于研究炎症反应的机制以及试验新的抗炎治疗方法。
以下是兔子炎症模型建立的一般步骤：
1. 兔子准备：选择健康成年兔子，完全空腹并麻醉。
确保实验中兔子的舒适和安全。
2. 炎症诱导：将炎症诱导剂注入兔子体内，常用的炎症诱导剂包括低浓度硫酸多巴胺、大剂量糖皮质激素等。
这些诱导剂能够引起兔子组织的炎症反应。
3. 炎症观察：观察兔子的炎症反应表现，包括红肿、渗出液、组织损伤等。
可以使用炎症指标如白细胞计数、炎性细胞数目等进行定量评估。
4. 取样分析：根据实验需要，可以在不同的时间点和组织中进行取样。
例如，采集皮肤组织样本、血液样本等，用于炎症相关指标的检测和分析。
5. 数据分析：对实验结果进行统计分析，比较不同组之间的差异。
可以使用多种方法如t检验、方差分析等。
6. 结果解读和讨论：根据实验结果，讨论炎症模型的适用性以及炎症反应的机制。
总之，兔子炎症模型的建立是一种常用的动物模型，在炎症疾病研究以及药物治疗策略的评估中发挥着重要的作用。
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中国比较医学杂志 ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
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Ｊａｎｕａｒｙ， ２０１８ Ｖｏｌ． ２８ Ｎｏ． １
������������������������������ 研究报告
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【关键词】 卵巢早衰；环磷酰胺；动物模型；家兔 【 中图分类号】 Ｒ⁃３３ 【 文献标识码】 Ａ 【 文章编号】１６７１⁃７８５６（２０１８） ０１⁃００３８⁃０６ ｄｏｉ： １０������ ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １６７１ － ７８５６������ ２０１８������ ０１������ ００７
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环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰动物模型的建立和评价
张 娟１ ，周月希１，３ ，刁 波２ ，王 刚２ ，岳钊平１ ，解 迪１ ，王 放军武汉总医院妇产科，武汉 ４３００７０； ２． 中国人民解放军武汉总医院医学实验科，武汉 ４３００７０； ３． 湖北中医药大学临床医学院，武汉 ４３００６５）
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ
ＺＨＡＮＧ Ｊｕａｎ１ ， ＺＨＯＵ Ｙｕｅｘｉ１， ３ ， ＤＩＡＯ Ｂｏ２ ， ＷＡＮＧ Ｇａｎｇ２ ， ＹＵＥ Ｚｈａｏｐｉｎｇ１ ， ＸＩＥ Ｄｉ１ ， ＷＡＮＧ Ｊｉｎｇ１ ， ＷＡＮＧ Ｌｉｑｕｎ１，３ （１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ， Ｗｕｈａｎ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ， Ｗｕｈａｎ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０； ３． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｗｕｈａｎ ４３００６５）
【摘要】 目的 比较不同注药方式下建立环磷酰胺诱导家兔卵巢早衰动物模型的方法，寻找最佳造模方式，
为进一步研究卵巢早衰提供更为适用的实验模型。 方法 ２１ 只家兔随机分四组，正常对照组 ３ 只，不作任何处理 （ Ａ 组） ；模型一组 ６ 只，５０ ｍｇ ／ ｋｇ 环磷酰胺溶液注射 １ ｄ（ Ｂ 组） ；模型二组 ６ 只，５０ ｍｇ ／ ｋｇ 连续注射 ２ ｄ（ Ｃ 组） ；模型 三组 ６ 只，首日注射 ５０ ｍｇ ／ ｋｇ，以后按照 ８ ｍｇ ／ ｋｇ 连续注射 １４ ｄ（ Ｄ 组） 。 称量各组家兔体重和卵巢重量，描述注药 １４ ｄ 内的体重变化，分析卵巢指数；ＨＥ 染色观察卵泡形态，光镜下计算各级卵泡数；ＴＵＮＥＬ 法观察分析细胞凋亡 情况；ＥＬＩＳＡ 法分析血清雌二醇（ Ｅ２） 变化。 结果 体重：Ｂ、Ｃ 组体重无明显变化（ Ｐ ＞ ０������ ０５） ；Ｄ 组家兔生长受限（ Ｐ ＜ ０������ ０５） ，死亡率高。 卵巢指数：Ｃ 组卵巢指数明显小于 Ａ 组（ Ｐ ＜ ０������ ０５） 。 各级卵泡情况：Ｂ、Ｃ 组原始卵泡和初级 卵泡异常率均升高（ Ｐ ＜ ０������ ０１７） ，其中 Ｃ 组原始卵泡异常率升高更明显（ Ｐ ＜ ０������ ０１７） ，而两组初级卵泡异常率差异 无显著性（ Ｐ ＞ ０������ ０１７） 。 Ａ、Ｂ、Ｃ 三组次级、窦状卵泡异常率差异无显著性（ Ｐ ＞ ０������ ０５） 。 细胞凋亡率：细胞凋亡主 要发生在卵泡中的颗粒细胞上，Ｂ、Ｃ 组凋亡率均明显高于 Ａ 组（ Ｐ ＜ ０������ ０５） ，且 Ｃ 组凋亡率高于 Ｂ 组（ Ｐ ＜ ０������ ０５） 。 血清 Ｅ２ 值：Ｂ 组第 ７ 天 Ｅ２ 分泌达高峰，７ ｄ 后逐渐下降，Ｅ２ 分泌量第 ７ 天明显高于第 ３５ 天（ Ｐ ＜ ０������ ０５） ；Ｃ 组 Ｅ２ 值 持续下降，第 ０ 天明显高于第 ３５ 天（ Ｐ ＜ ０������ ０５） 。 结论 以 ５０ ｍｇ ／ ｋｇ 剂量连续注射 ２ ｄ 是建立环磷酰胺诱导家兔 卵巢早衰模型的最佳造模方式。
【 Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｇｉｍｅｎｓ ｏｆ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ （ ＣＴＸ） ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ （ ＰＯＦ） ， ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ｔｗｅｎｔｙ⁃ｏｎｅ ５ － ６ ｍｏｎｔｈｓ ｏｌｄ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ４ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ａ （ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ） ｉｎｃｌｕｄｅｄ ３ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ｂ （ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ） ｉｎｃｌｕｄｅｄ ６ ｒａｂｂｉｔｓ， ｒｅｃｅｉｖｅｄ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ５０ ｍｇ ／ ｋｇ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ． Ｓｉｘ ｒａｂｂｉｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ｃ （ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ） ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ５０ ｍｇ ／ ｋｇ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｏｎｃｅ ｄａｉｌｙ ｆｏｒ ２ ｄａｙｓ． Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ｄ （ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ