[血细胞计数板的构造和使用方法简介] 血细胞计数板

[血细胞计数板的构造和使用方法简介] 血细胞

计数板

【摘要】

人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板，教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。

【关键词】

血细胞计数板的构造计数方法使用方法

人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板，教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。

1、血细胞计数板的构造

血细胞计数板是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平

台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低,也就是盖上盖玻片后计数室深度为。

计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是

16×25=25×16=400个小方格组成。

计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为

1mm2,每个小格面积为〖SX〗mm 2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为mm。所以，一个计数室的体积为3，每个小方格的体积为〖SX〗mm 3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为

4mm2，每个小格面积为〖SX〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为，所以，一个计数室的体积为3，每个小方格的体积为〖SX〗mm3。

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2、计数方法

25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX〗×400×10×1000=50000A；②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX〗

×400××1000=12500A 。

16×25计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个中格，即4×25＝100个小方格的细菌数，若这100个小方格的细菌数为B。①若计数室边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX〗×400×10×1000=4000B 。②若计数室的边长为2mm，则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX〗

×400××1000=10000B 。

3、使用方法

取血细胞计数板，盖上盖玻片，将加入酵母菌的试管摇匀后，用滴管吸取少许菌液，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的边缘滴入一小滴，菌液会沿着沟槽扩散，充满计数区，然后用吸水纸吸去多余的菌悬液。

静置数分钟，待全部菌体细胞沉降到载玻片表面再置于显微镜下观察，先用低倍镜观察，找到计数板刻度后，换高倍镜计数，将结果记录下来，作为原始数据使用，取下盖玻片，用水将计数板浸泡、冲洗干净，待自然晾干，放入盒内保存。

每个样品计数通常应重复三次以上，取平均值，求出每个小方格中的酵母菌平均数，按以上计数方法计算。

由于菌液处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节细准焦螺旋，才能找到全部菌体，以免误差，对于压线的菌体，采取计上不计下，计左不计右的计算方法，以减少误差，若酵母菌已出芽，只要芽体达到母体的〖SX〗，即可单独计为一个个体。

由于酵母菌是单细胞生物，细胞体积很小，不易观察，在观察显微镜时，要注意对视野的明暗进行选择，太明或太暗都不好，如果样品密度很大，为了计数准确，常常需将待测样品稀释成不同浓度的菌液后再进行计数，一般每一小格内酵母菌数目平均在10个以上的，通常应该稀释，稀释倍数以每小格5～6个菌体为宜。

取液过程中，为了防止污染，一定要用无菌滴管或无菌移液器，稀释时尽量取少一些，稀释后的溶液不能放回原液。

4、血球计数板的清洁

血球汁数板使用后，用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥、通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。

举例：在用血细胞计数板刻度为25中格×16小格，装入液体后液体高度为,经过计数计算，求得每个小格中的平均酵母菌数为A个，且已知稀释倍数为B，则1mL培养液中的酵母菌数为

〖CD#4〗个？。