实验8 血细胞计数板的使用

血球计数板的使用

Questions：

1.亚甲蓝染色液怎么配制？

2.计数时是全部计数还是选取其中一部分计数？

3.菌悬液怎么制备？

4.加样时可以先加样再盖玻片么？

5.计数时，若有菌体处于边界线上应怎么计数？

一、实验目的

1.能正确进行染色操作；

2.能正确使用显微镜；

3.能用血球计数板对微生物进行计数。

二、实验原理

血球计数板可计算活菌和死菌的数目，其用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm².容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。

三、实验仪器

显微镜、血球计数板、接种环、酒精灯

四、实验步骤

1.菌悬液的制备

用平板培养的微生物怎么制备菌悬液？

操作过程中是否需要无菌操作？

2.染色

注意染色剂浓度过稀菌体不能充分染色的情况。

3.血球计数板计数室洁净度检查

若有污染，清洗吹干后方能使用。

4.加样

血球计数板盖上盖玻片后，从盖玻片边缘加入菌液，此过程不可有气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽内多余菌液。

用什么加样？

5.显微计数

静止5min后，观察技术，以每小格内有5-10个菌体为宜。先用低倍镜，再用高倍镜。观察时注意调整光源亮度（可适当调弱）。

为什么要静止5min？

6.计算

7.清洗血球计数板

用水冲洗，不要用硬物擦洗，以免损坏网格刻度。自行晾干或吹干放入盒内保存。

五、注意事项

1.计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。

2.今天实验只计算四个（五个）格子内的总菌数。不用考虑稀释倍数等。

3.菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。