mRNA提取试剂盒的说明书

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东洋纺（上海）生物科技有限公司
[5] 试剂盒以外所需要的其他物品
・针筒（1 ml） ・注射针（20～25 G） ・磁性台架（本公司 Magical Trapper : Code No.: MGS-101）（也可使用离心机） ・漩涡混合器 ・heat-block（或者水浴槽） （65℃） ・简易台式离心机（能够进行 3,000～5,000 rpm 左右的简易离心。） ・离心机 ・对组织样品进行破碎的仪器或器械（本公司 Cool Mill：Code No.: CLM-101， 等） ・液氮（破碎组织样品时使用）
(2) 样品的前处理 ① 培养细胞 ・ 通过对培养细胞（1×107 cell 以下）进行离心分离，将产物回收到 1.5 ml微型试
管内，然后加入 400 μl溶解液（含有 2-ME），再通过pipetting进行溶解。接着，用 装有注射针（20～25 G）的针筒（1 ml）中来回抽吸 10 次左右，以减低溶液的粘 性（如果此项操作不够充分，就有可能使磁珠发生凝集，使得RNA的抽提无法顺 利进行）。
cDNA Array Filter、Gene NavigatorTM cDNA Array System；参照p. 14 的「[10] 相关商品」）
的模板来使用。 要注意的是，本试剂盒不适用于本公司的自动核酸抽提装置（MFX-2000、
6000、9600）。
<性能·特征>
·可以从培养细胞，组织等各种样品中直接纯化出 mRNA。 ·能够从 Total RNA 中纯化出 mRNA。 ·不含苯酚、氯仿等危险可溶物质。 ·采用了 DNase I 处理以及两次纯化步骤的操作程序，因此可以纯化出高纯
[6] 处理 RNA 时的注意点
1. 实验操作 在进行 RNA 实验时，必须注意要抑制 RNase 的作用。因此，除了要防止
通过使用器具以及试剂中混入 RNase，即注意实验环境之外，还要防止通过唾 液，汗等混入 RNase，故建议戴上口罩和手套。 2. 器材
在实验器材允许的情况下，请对一次性塑料制品进行高温高压湿热灭菌处 理 。 在 使 用 玻 璃 器 皿 的 情 况 下 ， 请 使 用 干 热 灭 菌 ， 或 者 在 0.1% Diethylpyrocarbonate (DEPC)溶液中，37℃下浸泡 12 小时，然后再进行高温高 压湿热灭菌（121℃，30 分钟）。
08-04
mRNA Purification Kit
MagExtractor® - mRNA -
(Code No.: NPK-801)
使用说明书
研究用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
目录
[1] 前言.........................................................................................................................1 [2] 纯化流程概要.........................................................................................................1 [3] 对应样品.................................................................................................................1 [4] 试剂盒中所包含的物品（5 次份）*.....................................................................3 [5] 试剂盒以外所需要的其他物品.............................................................................4 [6] 处理RNA时的注意点 ............................................................................................4 [7] 操作程序.................................................................................................................5
mRNA
mRNA
AAAAA
ToTlTigToT(dT)固定化磁珠
洗浄
AAAAA TTTTT
溶出
AAAAA
← DNase I *
磁珠
← 溶解液 吸着液
杂交
第二次纯化
mRNA
mRNA *已经 DNase I 处理过的样品不需要进行上述步骤。
AAAAA TTTTT
洗浄
AAAAA TTTTT
溶出
AAAAA
垂询电话：021-58794900
保存温度
4℃ 4℃或者室温 4℃或者室温 4℃或者室温
4℃ 4℃ -20℃ -20℃ -20℃
・ 试剂如果沾在衣服或者手上，请在使用结束后用清水充分清洗。如若碰到眼睛， 请立刻用清水清洗，然后去咨询医生。 ・ 溶解液中含有蛋白质变性剂，因此在操作的时候务必谨慎。 ・2-巯基乙醇在消防法中被定为“危险物第四类第二石油类 危险等级Ⅲ”。因为 属于易燃物质，请避免在火源的附近使用。 ・ 酶以及酶的反应缓冲剂以外的试剂请务必等回复到室温以后再用。 ・在使用溶解液和 2-巯基乙醇（2-ME）时，请只在使用前一刹那加入必要量 400:2.8(v/v)。请不要保存混合液。 *若仅进行一次纯化时则为 10 次。
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第一次纯化
利用MagExtractoR r® -mRNA- 进行mRA纯化的流程图
培养细胞 组织 ← 溶解液 匀浆 ← 吸着液
Lysate
磁珠
Total RNA
← DNase I * ← 溶解液 吸着液
杂交
rRNA、tRNA、genomic DNA
【 注意 】
本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等用途。在使 用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，并注意安全。
[1] 前言
本试剂盒是用oligo(dT)固定化了的磁珠粒来纯化mRNA (poly(A)+ RNA)的试 剂。因为使用的是磁珠，可以通过使用磁台架，最低限度地减少复杂的离心操作， 迅速的纯化mRNA。使用本试剂盒从Total RNA、培养细胞、组织等中得到的 mRNA主要能作为RT-PCR＊、cDNA克隆，cDNA Array（参照本公司Gene NavigatorTM
2. 从TOTAL RNA中纯化MRNA的方法.....................................................................9 （1）制备溶解液................................................................................................... 9 （2）Total RNA的DNase I 处理..........................................................................9 （3）mRNA的纯化（第一次） .........................................................................10 (4) mRNA的纯化（第二次） ............................................................................. 11
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[3] 对应样品
Biblioteka Baidu
MagExtractor® -mRNA-对应于以下的样品。
对应样品 培养细胞 动物组织 植物组织 Total RNA
样品量
～1×107 cells ～50 mg ～100 mg ～100 μg
[4] 试剂盒中所包含的物品（5 次份）*
本试剂盒含有以下 mRNA 抽提用试剂。请在下述温度下保存。
度的 mRNA。 ＊ Hoffmann La Roche 公司拥有 PCR 的专利。
[2] 纯化流程概要
利用 mRNA 进行的 RT-PCR、cDNA 克隆、cDNA Array 等实验是否成功很 大程度上取决于 mRNA 的品质和纯度。
为此，本试剂盒采用了 DNase I 处理以去除基因组 DNA，以及通过重复两 次纯化工艺来达到最小限度抑制 rRNA 混入的标准操作程序。
垂询电话：021-58794900
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[7] 操作程序
1. 从培养细胞，组织中直接抽提 mRNA 的方法
(1) 制备溶解液 2 次纯化的操作程序中对于每个样品，在 800μl 溶解液中需加入 5.6μl
2-ME。在 1 次纯化的操作程序中，在 400 μl 溶解液中只需加入 2.8 μl 2-ME。 制备此混合液时，请尽量不要保存混合液。
操作程序 第一次纯化 第二次纯化
用途
RT-PCR RT-PCR、cDNA Library 的制备、cDNA Array
・ 在第一次纯化中可能会混入基因组 DNA，请务必进行 DNase 处理。 ・ 在第二次纯化中因为已去除了第一次纯化后残留的 rRNA 以及基因组 DNA，回收量将是第
一次纯化后的 1/3～1/5 左右。
试剂名
溶解液 吸着液 洗浄液 溶出液 磁珠 2-巯基乙醇（2-ME） DNase I (1 unit/μl) RNase Inhibitor (10 units/μl) 10×DNase I 缓冲剂
容量
4 ml 8 ml 30 ml 5 ml 2.5 ml 0.1 ml 10 μl 10 μl 100 μl
1. 从培养细胞，组织中直接抽提MRNA的方法 ....................................................5 (1) 制备溶解液......................................................................................................5 (2) 样品的前处理..................................................................................................5 (3) mRNA的纯化(第一次).....................................................................................6 （4）DNase I处理 .................................................................................................7 (5) mRNA的纯化(第二次).....................................................................................8
[8] 抽提实例...............................................................................................................12 [9] 疑难解答...............................................................................................................13 [10] 相关商品.............................................................................................................15