肠缺血再灌注损伤及缺血预处理实验设计

肠缺血再灌注损伤及缺血预适应处理的干预作用
研究背景：
缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI) 是指各种原因导致组织器官缺血时, 会引起细胞代谢障碍和组织结构出现破坏, 而当血供恢复时, 组织及细胞损伤反而出现加重的现象称为。

微血管通透性增加、组织间质水肿、血管调节机制受损及炎症细胞浸润与缺血再灌注所引发的器官功能障碍相关。

肠缺血再灌注（intestinal ischemia reperfusion，IIR）损伤是由多种临床情况引起的，如出血性休克、败血症、严重创伤、绞窄性肠梗阻和急性肠系膜缺血等，具有高发病率和死亡率的一种常见临床问题。

IIR 会导致不可逆转的组织损伤，血流恢复后通过诱导细胞凋亡、炎症反应及氧化应激又会进一步加重损，严重者还会引起全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），甚至进一步诱发多器官功能衰竭（multiple organ failure，MOF）。

因此，防治肠缺血再灌注损伤是危重病研究领域的重点之一。

缺血预适应（ischemic preconditioning, IPC）是短期缺血应激使机体对随后长时间的缺血再灌注损伤产生明显保护作用的一种适应性机制进行反复的、短暂的、无创伤、无危害的缺血预适应训练，能够激发人体免疫系统的应急机制，产生和释放内源性保护物质（如：腺苷、缓激肽、一氧化氮等，这些物质参与保护心肌和能量代谢）减轻和抵抗随后更长时间因为人体缺血缺氧造成的损伤。

故本次研究的目的是探究不同的缺血预处理方法对肠道I / R损伤的可能保护作用。

材料与方法：
1.动物与分组：
中国家兔16只，雌雄各半，随机分为4组，分别为假手术组（只进行开腹手术，辨认肠系膜上动脉，不结扎）；对照组（进行肠系膜上动脉根部夹闭及复灌）；预适应处理A组（先进行缺血预处理，方法为夹闭5min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）；预适应处理B组（先进行缺血预处理，方法为夹闭20min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）。

2.模型复制：
（1）根据文献[3]方法，复制家兔肠缺血再灌注模型，具体如下
家兔经耳缘静脉注射乌拉坦（0. 005 mL/g）麻醉后，仰卧固定于手术台上。

腹部正中线自剑
突下1.5cm起向下做5cm切口，用温生理盐水纱布将肠管推向左侧腹腔，找到齐右肾门对侧垂直向腹主动脉分出的肠系膜上动脉，在其根部用动脉夹阻断肠系膜上动脉（superior mesenteric artery，SMA）血流，观察2 min，观察到血管搏动消失，肠壁苍白代表动脉血流阻断，将肠管整理后放回腹腔，用纱布覆盖切口，防止肠管干燥。

30min后松开动脉夹恢复动脉的血流，再灌60min。

（2）根据文献[4]方法，进行缺血预适应处理干预，具体如下
A组家兔在进行缺血再灌注模型复制前，先夹闭5min短暂缺血，再松开动脉夹5min复灌，循环3次，再进行模型复制；B组家兔在进行缺血再灌注模型复制前，先夹闭20min短暂缺血，再松开动脉夹5min复灌，循环3次，再进行模型复制。

3.观察指标：
机能学指标：家兔血压、心率、呼吸频率
形态学改变：将肠组织在冰磷酸盐缓冲液（pH 7. 4）中反复洗涤并暂时储存在甲醛（pH 7. 4）中，石蜡包埋并平行于肠轴切成5 µm厚的切片，并用苏木精和曙红染色。

观察肠道病理变化并利用组织学Chiu’s[5]评分对肠粘膜的完整性进行分级：0级：正常粘膜；1级：绒毛尖端的上皮下Gruenhagen空间的发展；2级：上皮下间隙的扩展，并从固有层适度抬升上皮层；3级：巨大的上皮向下举起绒毛的侧面；4级：完全剥去绒毛和扩张的毛细血管；5级：绒毛脱落，固有层崩解；出血和溃疡。

并比较正常肠组织切片、再灌注损伤后肠切片的形态，评分高表示肠组织受损更严重。

生化指标：血清中丙二醛（MDA），髓过氧化物酶（MPO），超氧化物歧化酶（SOD）
数据采集时间点：缺血前（正常），缺血30分钟后，复灌60分钟后。

4.统计方法：
数据以均数±标准差(mean±SD) 表示, 组间均数比较采用单因素方差分析, 应用SPSS软
件包进行统计处理, 以P<0.05为差异有统计学意义。

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