肠缺血再灌注损伤 实验课
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后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
二、理论基础
（二）缺血再灌注损伤的机制
肠缺血后，小肠粘膜损伤，内皮细胞坏死，中性粒细 胞浸润，产生大量黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）及自由基等。
氧自由基生成增加
钙超载
炎性反应综合症
1、多价不饱和脂肪 酸的过氧化，损伤生 物膜； 2、蛋白质和DNA分 子结构的变化。
2、阳性对照组 2、4、6、8、10
3、治疗组 ①硝苯地平组 11、13、15、17、19 ②氢化可的松组 12、14、16、18、20
1、检测实验前观察指标 2、夹闭肠系膜上动脉 假手术组仅分离，不夹闭（假手术）
缺血至第30min时开始治疗 ①假手术组: 生理盐水3ml/kg ②阳性对照组：生理盐水3ml/kg ③硝苯地平组：尼莫地平1mg/kg ④氢化可地松组：15mg/kg
品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值：
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
（三）本课程只安排了5个学时，请各实验组合理 安排人员，分工合作完成实验；
（四）课后认真书写实验论文，一周后上交。
标准管ml
标准空白管ml
测定管ml
标准品
0.1
测试样品
0.1
甲醇
0.1
甲液
4.1
4.1
4.1
乙液
旋涡混匀器混匀，置沸水浴40分钟，4000转/1分钟、离心10分钟，吸取上清液
蒸馏水调零、1cm杯子、532nm处比色
测定空白管ml 0.1
4.1
③ 计算： （测定管吸光度－测定空白管吸光度）/（标准管吸光度－标准空白管吸光度）×10nM/ml=测定样
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三wk.baidu.com实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
1、线粒体功能障碍-----ATP消耗，产生； 2、钙依赖性的降解酶 的激活------细胞结构破 坏，死亡； 3、促进活性氧的生成-----XO增多，花生四 烯酸代谢增强。
1、机械的阻塞作用-----内皮细胞坏死，产生 大量炎性介质； 2、白细胞对组织的损 伤作用------活性氧，水 解酶。
二、理论基础
MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
肠缺血再灌注损伤
基础医学院 医学基础实验教学中心
一、实验目的
（一）掌握缺血再灌注损伤的概念； （二）学会建立肠缺血再灌注损伤的实验动物模 型； （三）观察小肠缺血再灌注损伤时家兔的血流动 力学改变及血清MDA含量的测定方法； （四）熟悉肠缺血再灌注的致伤机制和防治原则。
二、理论基础
（一）缺血再灌注损伤的定义 指组织缺血一段时间，当血流重新恢复
MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚 至细胞死亡。
三、实验技术路线
（三）实验步骤
1、家兔捉拿、称重、麻醉、固定 2、颈动脉插管——动脉血压标记
3、辨认、分离肠系膜上动脉
三、实验技术路线-实验步骤
实验分组
肠休克模型制备及其干预 取样要求
1、假手术组 1、3、5、7、9
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉取血1.5ml
三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
二、理论基础
（二）缺血再灌注损伤的机制
肠缺血后，小肠粘膜损伤，内皮细胞坏死，中性粒细 胞浸润，产生大量黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）及自由基等。
氧自由基生成增加
钙超载
炎性反应综合症
1、多价不饱和脂肪 酸的过氧化，损伤生 物膜； 2、蛋白质和DNA分 子结构的变化。
2、阳性对照组 2、4、6、8、10
3、治疗组 ①硝苯地平组 11、13、15、17、19 ②氢化可的松组 12、14、16、18、20
1、检测实验前观察指标 2、夹闭肠系膜上动脉 假手术组仅分离，不夹闭（假手术）
缺血至第30min时开始治疗 ①假手术组: 生理盐水3ml/kg ②阳性对照组：生理盐水3ml/kg ③硝苯地平组：尼莫地平1mg/kg ④氢化可地松组：15mg/kg
品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值：
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
（三）本课程只安排了5个学时，请各实验组合理 安排人员，分工合作完成实验；
（四）课后认真书写实验论文，一周后上交。
标准管ml
标准空白管ml
测定管ml
标准品
0.1
测试样品
0.1
甲醇
0.1
甲液
4.1
4.1
4.1
乙液
旋涡混匀器混匀，置沸水浴40分钟，4000转/1分钟、离心10分钟，吸取上清液
蒸馏水调零、1cm杯子、532nm处比色
测定空白管ml 0.1
4.1
③ 计算： （测定管吸光度－测定空白管吸光度）/（标准管吸光度－标准空白管吸光度）×10nM/ml=测定样
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三wk.baidu.com实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
1、线粒体功能障碍-----ATP消耗，产生； 2、钙依赖性的降解酶 的激活------细胞结构破 坏，死亡； 3、促进活性氧的生成-----XO增多，花生四 烯酸代谢增强。
1、机械的阻塞作用-----内皮细胞坏死，产生 大量炎性介质； 2、白细胞对组织的损 伤作用------活性氧，水 解酶。
二、理论基础
MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
肠缺血再灌注损伤
基础医学院 医学基础实验教学中心
一、实验目的
（一）掌握缺血再灌注损伤的概念； （二）学会建立肠缺血再灌注损伤的实验动物模 型； （三）观察小肠缺血再灌注损伤时家兔的血流动 力学改变及血清MDA含量的测定方法； （四）熟悉肠缺血再灌注的致伤机制和防治原则。
二、理论基础
（一）缺血再灌注损伤的定义 指组织缺血一段时间，当血流重新恢复
MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚 至细胞死亡。
三、实验技术路线
（三）实验步骤
1、家兔捉拿、称重、麻醉、固定 2、颈动脉插管——动脉血压标记
3、辨认、分离肠系膜上动脉
三、实验技术路线-实验步骤
实验分组
肠休克模型制备及其干预 取样要求
1、假手术组 1、3、5、7、9
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉取血1.5ml
三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：