肠缺血再灌注损伤 实验课
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缺血再灌注损伤宣讲培训课件
④ 减少ATP生成
2、蛋白质功能抑制 3. 破坏核酸及染色体一碱基羟
化、DNA断裂，引起染色体 畸变或细胞死亡。
二、钙超载
各种原因引起的细胞内钙 含量异常增多并导致细胞结构 损伤和功能代谢障碍的现象称 为钙超载。
(一) 细胞内钙超载的机制
1、钠离子/钙离子交换异常
① 细胞内高钠离子对钠离子/钙离子 交换蛋白的直接激活
(三) 自由基的损伤作用
1、膜脂质过氧化
① 破坏膜的正常结构 不饱和脂肪酸/蛋白质的比例失调， 膜的液态性、流动性降低，通透性 增加，细胞外钙离子内流增加。
② 间接抑制膜蛋白功能 钙泵、钠泵及钠离子/钙离子交 换系统导致胞浆钠离子、钙离 子浓度升高，造成细胞肿胀和 钙超载。
③ 促进自由基及其它生物活性物质 生成
三、微血管损伤和白细胞 的作用
(一) 再灌注时血管内皮细胞 与白细胞激活
缺血时心肌白细胞聚集，再灌 注期，血管内皮细胞和白细胞 激活进行性增加。
(二) 血管内皮细胞与中性粒细胞
介导的缺血-再灌注损伤
1、微血管损伤
结扎狗冠状动脉造成心肌局 部缺血后,再开放结扎动脉，重新 恢复血流，部分缺血区并不能得到 充分的血流灌注，这种现象称为无 复流现象。
缺血再灌注损伤宣讲
一、缺血－再灌注损伤
缺血后再灌注,不仅不能使 组织、器官功能恢复，反而加 重组织器官功能障碍和结构损 伤。此现象称缺血－再灌注损 伤。
二、氧反常
用低氧溶液灌注组织器官 或在缺氧条件下培养细胞一定 时间后，再恢复正常氧供应， 组织及细胞的损伤不仅未能恢 复，反而更趋严重。这种现象 称为氧反常。
① 微血管血液流变学改变：中性粒 细胞粘附在血管内皮细胞上，血 小板和红细胞聚集。
2、蛋白质功能抑制 3. 破坏核酸及染色体一碱基羟
化、DNA断裂，引起染色体 畸变或细胞死亡。
二、钙超载
各种原因引起的细胞内钙 含量异常增多并导致细胞结构 损伤和功能代谢障碍的现象称 为钙超载。
(一) 细胞内钙超载的机制
1、钠离子/钙离子交换异常
① 细胞内高钠离子对钠离子/钙离子 交换蛋白的直接激活
(三) 自由基的损伤作用
1、膜脂质过氧化
① 破坏膜的正常结构 不饱和脂肪酸/蛋白质的比例失调， 膜的液态性、流动性降低，通透性 增加，细胞外钙离子内流增加。
② 间接抑制膜蛋白功能 钙泵、钠泵及钠离子/钙离子交 换系统导致胞浆钠离子、钙离 子浓度升高，造成细胞肿胀和 钙超载。
③ 促进自由基及其它生物活性物质 生成
三、微血管损伤和白细胞 的作用
(一) 再灌注时血管内皮细胞 与白细胞激活
缺血时心肌白细胞聚集，再灌 注期，血管内皮细胞和白细胞 激活进行性增加。
(二) 血管内皮细胞与中性粒细胞
介导的缺血-再灌注损伤
1、微血管损伤
结扎狗冠状动脉造成心肌局 部缺血后,再开放结扎动脉，重新 恢复血流，部分缺血区并不能得到 充分的血流灌注，这种现象称为无 复流现象。
缺血再灌注损伤宣讲
一、缺血－再灌注损伤
缺血后再灌注,不仅不能使 组织、器官功能恢复，反而加 重组织器官功能障碍和结构损 伤。此现象称缺血－再灌注损 伤。
二、氧反常
用低氧溶液灌注组织器官 或在缺氧条件下培养细胞一定 时间后，再恢复正常氧供应， 组织及细胞的损伤不仅未能恢 复，反而更趋严重。这种现象 称为氧反常。
① 微血管血液流变学改变：中性粒 细胞粘附在血管内皮细胞上，血 小板和红细胞聚集。
家兔肠缺血再灌注损伤ppt课件
先结扎远心端，后夹闭近心
端，剪口部位尽量靠近远心
端，成45度角朝向近心端 剪一小口，约为管径的
1/3-2/3，插管方向朝向近
心端，插入2-4cm
【插管的注意事项】
插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气
泡，记录前应关闭三通管
插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠 勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血
【实验动物】
家兔（性别、体重）
【实验设计原理】
通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)来阻断部分 肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注， 以复制肠缺血/再灌注损伤的动物模型，探
讨缺血/再灌注损伤的发生机制
【实验分组】
Байду номын сангаас Ⅰ组：持续缺血组 结扎肠系膜上动脉
（2）再灌注时遵循低压、低温、低钙的原则
（3）清除活性氧
（4） Ca2+拮抗剂的使用
（5） 减少白细胞的激活和炎性介质的释放 （6）补充能量及促进能量生成 （7）启动细胞内源性保护机制
【实验报告要点】
1、实验目的 2、实验动物 3、简单的实验步骤 4、列表记录所有组的实验指标 5、实验讨论 6、实验结论
① ② ③
时间
Ⅰ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水 肿），无出血点 Ⅱ组：结扎→ BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身 调节）→再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血 点，BP低于正常>1/2时→休克
※ Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与I/R是不同的 损伤过程，后者损伤更严重
【结果不明显可能存在的问题】
（1）实验过程中是否发生了大血？ （2）缺血是否完全？ （3）再灌注是否通畅？ （4）记录结果时基线是否改变？
端，剪口部位尽量靠近远心
端，成45度角朝向近心端 剪一小口，约为管径的
1/3-2/3，插管方向朝向近
心端，插入2-4cm
【插管的注意事项】
插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气
泡，记录前应关闭三通管
插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠 勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血
【实验动物】
家兔（性别、体重）
【实验设计原理】
通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)来阻断部分 肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注， 以复制肠缺血/再灌注损伤的动物模型，探
讨缺血/再灌注损伤的发生机制
【实验分组】
Байду номын сангаас Ⅰ组：持续缺血组 结扎肠系膜上动脉
（2）再灌注时遵循低压、低温、低钙的原则
（3）清除活性氧
（4） Ca2+拮抗剂的使用
（5） 减少白细胞的激活和炎性介质的释放 （6）补充能量及促进能量生成 （7）启动细胞内源性保护机制
【实验报告要点】
1、实验目的 2、实验动物 3、简单的实验步骤 4、列表记录所有组的实验指标 5、实验讨论 6、实验结论
① ② ③
时间
Ⅰ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水 肿），无出血点 Ⅱ组：结扎→ BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身 调节）→再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血 点，BP低于正常>1/2时→休克
※ Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与I/R是不同的 损伤过程，后者损伤更严重
【结果不明显可能存在的问题】
（1）实验过程中是否发生了大血？ （2）缺血是否完全？ （3）再灌注是否通畅？ （4）记录结果时基线是否改变？
家兔肠缺血再灌注实验
家兔肠缺血再灌注实验
2010 李娜
•实验目的 •实验动物： 家兔2.5 Kg左右 •实验药品： 25% 乌拉坦 2ml/Kg… •实验方法：
1. 全身麻醉后，固定。 2. 颈部手术：① 气管切开插管 （3-4软骨环） 3.腹部手术 ： ① 膀胱颈部结扎，膀胱荷包缝合。 ② 分离肠系膜上动脉。 4. 颈部手术： 分离左侧颈总动脉，动脉插管，接测压装置记录血压 （充分肝素化 充分肝素化）并且做耳缘静脉穿刺，ivgtt 0.3%肝素生理盐水。 充分肝素化 5. 记录生理指征： 心电图，呼吸曲线，肛温等。 6. 动脉夹夹闭肠系膜上动脉，观察并记录各项生理指标的变化。 7. 分离腹主动脉，用肝素化的注射器抽取动脉血0.3 ml，立即针头插入橡皮塞并做血 气分析。 8. 将实验结果及数据整理、制表。 9.写出实验报告，一周后上交 一周后上交。 一周后上交
（一）生理指标的观测 1. 家兔体重： ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱg 2. 生理指标的变化
生理指标 皮肤黏膜 颜色
时间（分钟）
肠袢形态 学改变
呼吸
血压
心率
肛温
尿量
0 10 20 30 40
打开动脉夹
20
家兔正常血气参考值
2010 李娜
•实验目的 •实验动物： 家兔2.5 Kg左右 •实验药品： 25% 乌拉坦 2ml/Kg… •实验方法：
1. 全身麻醉后，固定。 2. 颈部手术：① 气管切开插管 （3-4软骨环） 3.腹部手术 ： ① 膀胱颈部结扎，膀胱荷包缝合。 ② 分离肠系膜上动脉。 4. 颈部手术： 分离左侧颈总动脉，动脉插管，接测压装置记录血压 （充分肝素化 充分肝素化）并且做耳缘静脉穿刺，ivgtt 0.3%肝素生理盐水。 充分肝素化 5. 记录生理指征： 心电图，呼吸曲线，肛温等。 6. 动脉夹夹闭肠系膜上动脉，观察并记录各项生理指标的变化。 7. 分离腹主动脉，用肝素化的注射器抽取动脉血0.3 ml，立即针头插入橡皮塞并做血 气分析。 8. 将实验结果及数据整理、制表。 9.写出实验报告，一周后上交 一周后上交。 一周后上交
（一）生理指标的观测 1. 家兔体重： ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱg 2. 生理指标的变化
生理指标 皮肤黏膜 颜色
时间（分钟）
肠袢形态 学改变
呼吸
血压
心率
肛温
尿量
0 10 20 30 40
打开动脉夹
20
家兔正常血气参考值
病生-第13章缺血-再灌注损伤PPT课件
案例三：肢体缺血-再灌注损伤
总结词
肢体缺血-再灌注损伤可导致肢体肌肉和 骨骼损伤，影响患者的运动功能和生活 能力。
VS
详细描述
肢体缺血-再灌注损伤通常发生在肢体动 脉阻塞后，血流重新恢复时。由于缺血期 间肌肉和骨骼受损，再灌注时会引起炎症 反应和氧化应激，导致肢体肌肉和骨骼损 伤。患者可能出现肢体疼痛、肿胀、活动 受限等症状，严重时可导致截肢或残疾。
药物治疗
使用抗氧化剂
使用细胞保护剂
抗氧化剂可以清除自由基，减少组织 损伤。
细胞保护剂可以保护细胞免受缺血和 再灌注损伤的影响。
使用抗炎药物
抗炎药物可以减轻炎症反应，减少组 织损伤。
其他治疗方法
手术治疗
对于严重的缺血-再灌注损伤，可 能需要手术治疗。
细胞移植
细胞移植可以促进组织再生和修复， 减少组织损伤。
02
优化治疗方案，根据患 者的具体情况制定个性 化的治疗方案，提高治 疗效果。
03
加强医护人员的培训和 教育，提高他们对缺血再灌注损伤的认识和救 治能力。
04
加强多学科协作，整合 医疗资源，为患者提供 全方位、高效的救治服 务。
THANKS
感谢观看
炎症介质释放
炎症细胞释放的炎症介质如TNF-α、 IL-1β等可诱导细胞凋亡和组织损伤。
03
缺血-再灌注损伤的防治
早期治疗
快速恢复血流
在发生缺血后，应尽快恢 复血流，以减少组织损伤。
减轻缺血程度
在血流恢复之前，应采取 措施减轻缺血程度，如使 用血管扩张剂等。
控制再灌注时间
在血流恢复后，应控制再 灌注时间，避免长时间缺 血和再灌注损伤。
案例二：脑缺血-再灌注损伤
缺血-再灌注损伤—参考 ppt课件
缺血组织、器官得到重新注后， 功能恢复，结构损伤得以修复。某 些情况下，再灌注反而加重组织、 器官的功能障碍和结构损伤，称为 缺血-再灌注损伤（ischemiareperfusion injury），简称再灌注 损伤（reperfusion injury）。
•原因
病因学
• 休克 • 器官复苏 • 冠状动脉痉挛的缓解
再灌注 微小血管堵塞、出现无复流现象 心肌顿抑 多突然发生 很快转化为室颤
α-阻滞剂有效
β-阻滞剂有效
心电图
ST段抬高，R波增高 ST段不抬高，R波降低，出现病理性u波
防治原则
• 尽早恢复血流，缩短缺血时间 • 采用低压、低温、低钙再灌注液 • 清除活性氧 • 钙拮抗剂 • 抗白细胞疗法 • 启动细胞内源性保护机制 • 缺血预适应
•线粒体DNA编码的呼 吸链复合物I, III 和 IV 活性↓
Self-study
钙超载
细胞内Ca2+的稳态调节
• 质膜钙通道 • Na+-Ca2+ 交换 • 线粒体膜调控 • 内质网调控
Ca 2+
VOC Ca2+
ROC [Ca2+]e：10-3M
Ca 2+
Ca2+ B Pr
Ca2+
肌浆网
线粒体[Ca2+]i：10-7M
活性氧的作用
( Reactive oxygen species, ROS)
1. 活性氧
• 活性氧(reactive oxygen)：指化学性质活泼的含氧代 谢物，包括氧自由基、单线态氧（1O2）、H2O2、 NO、脂性过氧化物（LOOH）及其裂解产物LO•、 LOO•等 O·2
O·2
•原因
病因学
• 休克 • 器官复苏 • 冠状动脉痉挛的缓解
再灌注 微小血管堵塞、出现无复流现象 心肌顿抑 多突然发生 很快转化为室颤
α-阻滞剂有效
β-阻滞剂有效
心电图
ST段抬高，R波增高 ST段不抬高，R波降低，出现病理性u波
防治原则
• 尽早恢复血流，缩短缺血时间 • 采用低压、低温、低钙再灌注液 • 清除活性氧 • 钙拮抗剂 • 抗白细胞疗法 • 启动细胞内源性保护机制 • 缺血预适应
•线粒体DNA编码的呼 吸链复合物I, III 和 IV 活性↓
Self-study
钙超载
细胞内Ca2+的稳态调节
• 质膜钙通道 • Na+-Ca2+ 交换 • 线粒体膜调控 • 内质网调控
Ca 2+
VOC Ca2+
ROC [Ca2+]e：10-3M
Ca 2+
Ca2+ B Pr
Ca2+
肌浆网
线粒体[Ca2+]i：10-7M
活性氧的作用
( Reactive oxygen species, ROS)
1. 活性氧
• 活性氧(reactive oxygen)：指化学性质活泼的含氧代 谢物，包括氧自由基、单线态氧（1O2）、H2O2、 NO、脂性过氧化物（LOOH）及其裂解产物LO•、 LOO•等 O·2
O·2
川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注损伤保护作用的实验研究的开题报告
川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注损伤保护作用的实验研究的开题报告一、研究背景和意义肠缺血再灌注（I/R）是一种常见的临床病理生理过程，可以导致肠黏膜坏死和溃疡等严重后果。
I/R损伤的发生原因可能与多种因素有关，如暴露于缺氧、自由基增加、炎性细胞渗出等。
大量的实验研究表明，川芎嗪具有一定的神经保护、抗氧化和抗炎作用。
因此，我们推测川芎嗪可能对大鼠肠I/R损伤产生保护作用。
本研究将探究川芎嗪对大鼠肠I/R损伤保护作用的可能机制，为临床治疗提供理论支持。
二、研究方法和内容本研究将使用大鼠作为实验动物，分为正常组、I/R组和川芎嗪组。
I/R组和川芎嗪组的大鼠将进行肠缺血处理，缺血时间为30分钟，然后灌注2小时。
川芎嗪组的大鼠在缺血前5分钟注射川芎嗪，摄入剂量为60mg/kg，I/R组和正常组不注射。
在实验操作时，开腹，将小肠离体，用钳子夹住小肠末端，将其隔离成离体小肠，实验结束后将放回到腹腔中。
实验结束后，用HE染色技术观察不同组间大鼠肠的形态结构，同时采用实时荧光定量PCR和ELISA方法分别检测肠黏膜细胞凋亡和肠道炎症因子的表达水平。
此外，还将进行川芎嗪对肠道微生物群的影响实验。
三、预期结果我们预计，在对大鼠肠I/R损伤进行川芎嗪保护处理后，相对于I/R 组，川芎嗪组将表现为更优的肠道形态结构、较低的细胞凋亡水平和炎症因子水平，并且可能会影响肠道微生物群的构成和数量。
四、研究意义和应用前景本研究旨在探索川芎嗪对大鼠肠I/R损伤保护作用的机制，并为此提供实验数据和理论基础，有望为临床治疗肠缺血再灌注损伤提供新的治疗思路。
当前，肠I/R损伤发生率较高，对患者的健康状况产生了极大的影响，因此，对其治疗方法的研究具有非常重要的临床应用前景。
肠缺血再灌注损伤及缺血预处理实验设计
肠缺血再灌注损伤及缺血预适应处理的干预作用研究背景：缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI) 是指各种原因导致组织器官缺血时, 会引起细胞代谢障碍和组织结构出现破坏, 而当血供恢复时, 组织及细胞损伤反而出现加重的现象称为。
微血管通透性增加、组织间质水肿、血管调节机制受损及炎症细胞浸润与缺血再灌注所引发的器官功能障碍相关。
肠缺血再灌注（intestinal ischemia reperfusion，IIR）损伤是由多种临床情况引起的，如出血性休克、败血症、严重创伤、绞窄性肠梗阻和急性肠系膜缺血等，具有高发病率和死亡率的一种常见临床问题。
IIR 会导致不可逆转的组织损伤，血流恢复后通过诱导细胞凋亡、炎症反应及氧化应激又会进一步加重损，严重者还会引起全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），甚至进一步诱发多器官功能衰竭（multiple organ failure，MOF）。
因此，防治肠缺血再灌注损伤是危重病研究领域的重点之一。
缺血预适应（ischemic preconditioning, IPC）是短期缺血应激使机体对随后长时间的缺血再灌注损伤产生明显保护作用的一种适应性机制进行反复的、短暂的、无创伤、无危害的缺血预适应训练，能够激发人体免疫系统的应急机制，产生和释放内源性保护物质（如：腺苷、缓激肽、一氧化氮等，这些物质参与保护心肌和能量代谢）减轻和抵抗随后更长时间因为人体缺血缺氧造成的损伤。
故本次研究的目的是探究不同的缺血预处理方法对肠道I / R损伤的可能保护作用。
材料与方法：1.动物与分组：中国家兔16只，雌雄各半，随机分为4组，分别为假手术组（只进行开腹手术，辨认肠系膜上动脉，不结扎）；对照组（进行肠系膜上动脉根部夹闭及复灌）；预适应处理A组（先进行缺血预处理，方法为夹闭5min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）；预适应处理B组（先进行缺血预处理，方法为夹闭20min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）。
缺血-再灌注损伤医学教学课件
第七章 缺血-再灌注损伤
（Ischemia – Reperfusion injury）
病例分析
患者，男，54岁，因胸闷、大汗1h入急诊病房。体 查：血压65/40mmHg，意识淡漠，心率37次/min， 律齐。既往有高血压病史10年，否认冠心病史。心电 图示Ⅲ度房室传导阻滞。给予阿托品、多巴胺、低分 子右旋糖酐等进行扩冠治疗。入院上午10时用尿激酶 静脉溶栓。10时40分出现阵发性心室颤动（室颤）， 立即给予除颤，至11时20分反复发生室性心动过速、 室颤，共除颤7次，同时给予利多卡因、小剂量异丙 肾上腺素后心律转为窦性，血压平稳，意识清楚。冠 状动脉造影证实：右冠状动脉上段85%狭窄，中段 78%狭窄。
1、线粒体内单电子还原生成氧自由基增加
2．血管内皮细胞内黄嘌呤氧化酶形成增加
黄嘌呤氧化酶(XO) 10%
Ca+2依赖性蛋白酶
黄嘌呤脱氢酶(XD) 90%
3、白细胞呼吸爆发产生大量活性氧
白细胞吞噬时伴耗氧量显著增加的现象，称呼吸爆发。
•OH OONO-
•NO O2
NADPH
n
NADPH
e
O2•-
协助维持维生 素E的活性状态
半胱氨酸 维生素C GSH
H2O2 + 2GSH GSHpx 2H2O + GSSG
（三）缺血-再灌注时活性氧增多的机制
1. 线粒体内单电子还原生成氧自由基增加 2. 血管内皮细胞内黄嘌呤氧化酶形成增加 3. 白细胞呼吸爆发产生大量活性氧 4. 儿茶酚胺的自身氧化 5. 体内清除活性氧的能力下降
无复流现象(no-reflow phenomenon )
恢复血液灌注后，缺血区依然得不到充分血 流灌注的现象称无复流现象 .
（Ischemia – Reperfusion injury）
病例分析
患者，男，54岁，因胸闷、大汗1h入急诊病房。体 查：血压65/40mmHg，意识淡漠，心率37次/min， 律齐。既往有高血压病史10年，否认冠心病史。心电 图示Ⅲ度房室传导阻滞。给予阿托品、多巴胺、低分 子右旋糖酐等进行扩冠治疗。入院上午10时用尿激酶 静脉溶栓。10时40分出现阵发性心室颤动（室颤）， 立即给予除颤，至11时20分反复发生室性心动过速、 室颤，共除颤7次，同时给予利多卡因、小剂量异丙 肾上腺素后心律转为窦性，血压平稳，意识清楚。冠 状动脉造影证实：右冠状动脉上段85%狭窄，中段 78%狭窄。
1、线粒体内单电子还原生成氧自由基增加
2．血管内皮细胞内黄嘌呤氧化酶形成增加
黄嘌呤氧化酶(XO) 10%
Ca+2依赖性蛋白酶
黄嘌呤脱氢酶(XD) 90%
3、白细胞呼吸爆发产生大量活性氧
白细胞吞噬时伴耗氧量显著增加的现象，称呼吸爆发。
•OH OONO-
•NO O2
NADPH
n
NADPH
e
O2•-
协助维持维生 素E的活性状态
半胱氨酸 维生素C GSH
H2O2 + 2GSH GSHpx 2H2O + GSSG
（三）缺血-再灌注时活性氧增多的机制
1. 线粒体内单电子还原生成氧自由基增加 2. 血管内皮细胞内黄嘌呤氧化酶形成增加 3. 白细胞呼吸爆发产生大量活性氧 4. 儿茶酚胺的自身氧化 5. 体内清除活性氧的能力下降
无复流现象(no-reflow phenomenon )
恢复血液灌注后，缺血区依然得不到充分血 流灌注的现象称无复流现象 .
机能实验学：肠缺血再灌注损伤
品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值：
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉取血1.5ml
三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三、实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉取血1.5ml
三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三、实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
银杏叶提取物对小肠缺血再灌注损伤保护作用的实验研究
马 玉 山
注损伤模 型制备 的缺血 前 ３ ０分钟 、 灌 再 注同时 ， 于阴茎背静脉注射等量生理盐水 注射液。 实验 指 标 的检 测 ： 式 细 胞 仪 检 测 小 流 肠 黏膜 上皮 细胞 凋亡情况 ： Ｒ组 及 Ｅ ｂ Ｉ ／ Ｇ 组于制模成 功后 ， 分别于缺血再灌注 ０小 时、 再灌注 １ 时 、 小 再灌 注 ２小时 ３个时 点 ， 个 时 点 各 ８只 ， 次 麻 醉 开腹 ， 距 每 再 取
药 品及 动 物 ： 杏 叶 提 取 物 （ ｉｋｏ 银 Ｇｎ ｇ
中 Ｔ Ｆ— 和 Ｉ ６的 浓 度 ：Ｇ Ｎ Ｌ一 Ｅ ｂ组 大 鼠 血 清 中 Ｔ Ｆ—ｄ的 含 量 在 ３个 时 点 明 显 Ｎ 低 于 各 相 同 时 点 ＩＲ 组 ， 用 Ｓ Ｓ １． ／ 采 Ｐ Ｓ １０ 统 计软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 １ 检 见 。 Ｅ ｂ组 大 鼠血 清 中 Ｉ ６的含 量 在 ３ Ｇ Ｌ一 个时点 明显低于各相 同时点 ＩＲ组 ， ／ 采用 Ｓ Ｓ １０统 计 软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 ２ Ｐ Ｓ１． 检 见 。 流 式 细 胞 仪 检 测 小 肠 黏 膜 上 皮 细 胞 凋 亡 的 比较 ： Ｇ Ｅ ｂ组 大 鼠小 肠 黏 膜 Ｊ 皮 细 ＿ 胞 凋 亡 率 相 对 于 ＩＲ组 明 显 降 低 。采 用 ／ Ｓ Ｓ １０统 计 软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 ３ Ｐ Ｓ１． 检 见 。
一
的水平 ， 流式细胞仪检Ｎ／肠 黏膜 皮细 Ｊ ＂ 胞凋亡情况 ， 报告如下 。 现
资 料 与 方 法
细胞 因子含量极微 ， 在各 种因素刺 激如 但 实验指标检测结果 ：ＬＳ Ｅ ＩＡ检测 血清 感染 、 外伤 、 缺血再灌注损伤后 ， 其表 达可 急剧 增 加 ， 度 表 达 可 导致 或 加 重 组 织 损 过
注损伤模 型制备 的缺血 前 ３ ０分钟 、 灌 再 注同时 ， 于阴茎背静脉注射等量生理盐水 注射液。 实验 指 标 的检 测 ： 式 细 胞 仪 检 测 小 流 肠 黏膜 上皮 细胞 凋亡情况 ： Ｒ组 及 Ｅ ｂ Ｉ ／ Ｇ 组于制模成 功后 ， 分别于缺血再灌注 ０小 时、 再灌注 １ 时 、 小 再灌 注 ２小时 ３个时 点 ， 个 时 点 各 ８只 ， 次 麻 醉 开腹 ， 距 每 再 取
药 品及 动 物 ： 杏 叶 提 取 物 （ ｉｋｏ 银 Ｇｎ ｇ
中 Ｔ Ｆ— 和 Ｉ ６的 浓 度 ：Ｇ Ｎ Ｌ一 Ｅ ｂ组 大 鼠 血 清 中 Ｔ Ｆ—ｄ的 含 量 在 ３个 时 点 明 显 Ｎ 低 于 各 相 同 时 点 ＩＲ 组 ， 用 Ｓ Ｓ １． ／ 采 Ｐ Ｓ １０ 统 计软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 １ 检 见 。 Ｅ ｂ组 大 鼠血 清 中 Ｉ ６的含 量 在 ３ Ｇ Ｌ一 个时点 明显低于各相 同时点 ＩＲ组 ， ／ 采用 Ｓ Ｓ １０统 计 软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 ２ Ｐ Ｓ１． 检 见 。 流 式 细 胞 仪 检 测 小 肠 黏 膜 上 皮 细 胞 凋 亡 的 比较 ： Ｇ Ｅ ｂ组 大 鼠小 肠 黏 膜 Ｊ 皮 细 ＿ 胞 凋 亡 率 相 对 于 ＩＲ组 明 显 降 低 。采 用 ／ Ｓ Ｓ １０统 计 软 件 进 行 ｔ 验 ， 表 ３ Ｐ Ｓ１． 检 见 。
一
的水平 ， 流式细胞仪检Ｎ／肠 黏膜 皮细 Ｊ ＂ 胞凋亡情况 ， 报告如下 。 现
资 料 与 方 法
细胞 因子含量极微 ， 在各 种因素刺 激如 但 实验指标检测结果 ：ＬＳ Ｅ ＩＡ检测 血清 感染 、 外伤 、 缺血再灌注损伤后 ， 其表 达可 急剧 增 加 ， 度 表 达 可 导致 或 加 重 组 织 损 过
缺血-再灌注损伤Ischemia-reperfusioninjuryIRIppt课件
ATP生成减少
膜流动性↓、通透性↑
■细胞内Ca2+超载（Ca2+ overload）
■DNA损伤和染色体畸变
胸腺嘧啶 5，6-双键
OH•
（占80%活性氧）
加成反应
胸腺嘧啶自由基
染色体畸变、断裂
碱基发生修饰、断裂、交联
■蛋白质变性和酶活性降低
【蛋白失活机制】
▲破坏酶的活性中心－巯基； ▲破坏酶活性所必需的脂质微环境；
■细胞内钙库释放通道
2．Ca2+离开胞液的途径
Ca2+泵、Na+-Ca2+交换、Ca2+-H+交换。
（二）钙超载产生（Calcium overload production)
1.细胞膜通透性增加（Membrane permeability increase）
■缺血
胞膜外板与糖被分离
胞膜通透性↑
膜磷脂降解↑ 激活PLA2
1960年 Jennings等 提出心肌IRI的概念。
到20世纪80年代
溶栓疗法、搭桥术、断肢再植、器官 移植开展，IRI成手术成败的关键之一。
一、概念（Conception） 缺血的组织、器官经恢复血液灌注后不但不能使其功能 和结构恢复，反而加重其功能障碍和结构损伤的现象。
Usually blood reperfusion should reduce the ischemia injury. However, recent clinical observations and animal experiments showed that blood reperfusion sometimes induces or aggravates the further reversible even irreversible cell damage, especially for a prolonged ischemia.
膜流动性↓、通透性↑
■细胞内Ca2+超载（Ca2+ overload）
■DNA损伤和染色体畸变
胸腺嘧啶 5，6-双键
OH•
（占80%活性氧）
加成反应
胸腺嘧啶自由基
染色体畸变、断裂
碱基发生修饰、断裂、交联
■蛋白质变性和酶活性降低
【蛋白失活机制】
▲破坏酶的活性中心－巯基； ▲破坏酶活性所必需的脂质微环境；
■细胞内钙库释放通道
2．Ca2+离开胞液的途径
Ca2+泵、Na+-Ca2+交换、Ca2+-H+交换。
（二）钙超载产生（Calcium overload production)
1.细胞膜通透性增加（Membrane permeability increase）
■缺血
胞膜外板与糖被分离
胞膜通透性↑
膜磷脂降解↑ 激活PLA2
1960年 Jennings等 提出心肌IRI的概念。
到20世纪80年代
溶栓疗法、搭桥术、断肢再植、器官 移植开展，IRI成手术成败的关键之一。
一、概念（Conception） 缺血的组织、器官经恢复血液灌注后不但不能使其功能 和结构恢复，反而加重其功能障碍和结构损伤的现象。
Usually blood reperfusion should reduce the ischemia injury. However, recent clinical observations and animal experiments showed that blood reperfusion sometimes induces or aggravates the further reversible even irreversible cell damage, especially for a prolonged ischemia.
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MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚 至细胞死亡。
三、实验技术路线
（三）实验步骤
1、家兔捉拿、称重、麻醉、固定 2、颈动脉插管——动脉血压标记
3、辨认、分离肠系膜上动脉
三、实验技术路线-实验步骤
实验分组
肠休克模型制备及其干预 取样要求
1、假手术组 1、3、5、7、9
（三）本课程只安排了5个学时，请各实验组合理 安排人员，分工合作完成实验；
（四）课后认真书写实验论文，一周后上交。
1、线粒体功能障碍-----ATP消耗，产生； 2、钙依赖性的降解酶 的激活------细胞结构破 坏，死亡； 3、促进活性氧的生成-----XO增多，花生四 烯酸代谢增强。
1、机械的阻塞作用-----内皮细胞坏死，产生 大量炎性介质； 2、白细胞对组织的损 伤作用------活性氧，水 解酶。
二、理论基础
2、阳性对照组 2、4、6、8、10
3、治疗组 ①硝苯地平组 11、13、15、17、19 ②氢化可的松组 12、14、16、18、20
1、检测实验前观察指标 2、夹闭肠系膜上动脉 假手术组仅分离，不夹闭（假手术）
缺血至第30min时开始治疗 ①假手术组: 生理盐水3ml/kg ②阳性对照组：生理盐水3ml/kg ③硝苯地平组：尼莫地平1mg/kg ④氢化可地松组：15mg/kg
品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值：
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉Leabharlann 血1.5ml三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
标准管ml
标准空白管ml
测定管ml
标准品
0.1
测试样品
0.1
甲醇
0.1
甲液
4.1
4.1
4.1
乙液
旋涡混匀器混匀，置沸水浴40分钟，4000转/1分钟、离心10分钟，吸取上清液
蒸馏水调零、1cm杯子、532nm处比色
测定空白管ml 0.1
4.1
③ 计算： （测定管吸光度－测定空白管吸光度）/（标准管吸光度－标准空白管吸光度）×10nM/ml=测定样
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三、实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
二、理论基础
（二）缺血再灌注损伤的机制
肠缺血后，小肠粘膜损伤，内皮细胞坏死，中性粒细 胞浸润，产生大量黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）及自由基等。
氧自由基生成增加
钙超载
炎性反应综合症
1、多价不饱和脂肪 酸的过氧化，损伤生 物膜； 2、蛋白质和DNA分 子结构的变化。
肠缺血再灌注损伤
基础医学院 医学基础实验教学中心
一、实验目的
（一）掌握缺血再灌注损伤的概念； （二）学会建立肠缺血再灌注损伤的实验动物模 型； （三）观察小肠缺血再灌注损伤时家兔的血流动 力学改变及血清MDA含量的测定方法； （四）熟悉肠缺血再灌注的致伤机制和防治原则。
二、理论基础
（一）缺血再灌注损伤的定义 指组织缺血一段时间，当血流重新恢复
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚 至细胞死亡。
三、实验技术路线
（三）实验步骤
1、家兔捉拿、称重、麻醉、固定 2、颈动脉插管——动脉血压标记
3、辨认、分离肠系膜上动脉
三、实验技术路线-实验步骤
实验分组
肠休克模型制备及其干预 取样要求
1、假手术组 1、3、5、7、9
（三）本课程只安排了5个学时，请各实验组合理 安排人员，分工合作完成实验；
（四）课后认真书写实验论文，一周后上交。
1、线粒体功能障碍-----ATP消耗，产生； 2、钙依赖性的降解酶 的激活------细胞结构破 坏，死亡； 3、促进活性氧的生成-----XO增多，花生四 烯酸代谢增强。
1、机械的阻塞作用-----内皮细胞坏死，产生 大量炎性介质； 2、白细胞对组织的损 伤作用------活性氧，水 解酶。
二、理论基础
2、阳性对照组 2、4、6、8、10
3、治疗组 ①硝苯地平组 11、13、15、17、19 ②氢化可的松组 12、14、16、18、20
1、检测实验前观察指标 2、夹闭肠系膜上动脉 假手术组仅分离，不夹闭（假手术）
缺血至第30min时开始治疗 ①假手术组: 生理盐水3ml/kg ②阳性对照组：生理盐水3ml/kg ③硝苯地平组：尼莫地平1mg/kg ④氢化可地松组：15mg/kg
品中丙二醛含量nM/ml。 ④ 参考值：
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉Leabharlann 血1.5ml三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
标准管ml
标准空白管ml
测定管ml
标准品
0.1
测试样品
0.1
甲醇
0.1
甲液
4.1
4.1
4.1
乙液
旋涡混匀器混匀，置沸水浴40分钟，4000转/1分钟、离心10分钟，吸取上清液
蒸馏水调零、1cm杯子、532nm处比色
测定空白管ml 0.1
4.1
③ 计算： （测定管吸光度－测定空白管吸光度）/（标准管吸光度－标准空白管吸光度）×10nM/ml=测定样
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三、实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
二、理论基础
（二）缺血再灌注损伤的机制
肠缺血后，小肠粘膜损伤，内皮细胞坏死，中性粒细 胞浸润，产生大量黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）及自由基等。
氧自由基生成增加
钙超载
炎性反应综合症
1、多价不饱和脂肪 酸的过氧化，损伤生 物膜； 2、蛋白质和DNA分 子结构的变化。
肠缺血再灌注损伤
基础医学院 医学基础实验教学中心
一、实验目的
（一）掌握缺血再灌注损伤的概念； （二）学会建立肠缺血再灌注损伤的实验动物模 型； （三）观察小肠缺血再灌注损伤时家兔的血流动 力学改变及血清MDA含量的测定方法； （四）熟悉肠缺血再灌注的致伤机制和防治原则。
二、理论基础
（一）缺血再灌注损伤的定义 指组织缺血一段时间，当血流重新恢复