TBHQ的急性毒性评价

《食品毒理学》课程实习论文（设计）

题目: TBHQ的急性毒性评价

姓名: 邵杰

学院: 食品药品学院

专业: 食品质量与安全

班级: 102班

学号: 2302100217 指导教师: 丁志刚

2012 年12 月12 日

安徽科技学院教务处制

TBHQ的急性毒性评价

食品质量与安全102班：邵杰

学号：2302100217

指导老师：丁志刚

摘要：本文主要研究的内容是TBHQ的急性毒性评价，通过选择健康的小白鼠，根据体重按

随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一次或24h内多次灌胃

给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死

亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，采用霍恩氏法求出TBHQ的半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将TBHQ进行急性毒性分级。

关键词：TBHQ、急性毒性、LD50、霍恩氏法

1．前言

TBHQ化学名：特丁基对苯二酚，又名叔丁基对苯二酚、叔丁基氢醌，:沸点295℃，熔点126.5~128.5℃。TBHQ几乎不溶于水（约为1g/100ml），但溶于乙醇、乙酸、乙酯、异丙醇、乙醚及植物油、猪油等。对大多数油脂均有防腐败作用，尤其是植物油。遇铁、铜不变色，但如有碱存在可转为粉红色。TBHQ是国家规定允许添加的食用抗氧化剂，跟BHT、BHA相比，TBHQ拥有更安全的无毒性能，因为添加量少。抗氧化性能优越，比BHT、BHA、PG（没食子酸丙脂）和维生素E具有更强的抗氧化能力在配置过程中适当的添加食品级植酸效果更优；可有效抑制枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，产气短杆菌等细菌以及黑曲菌、杂色曲霉、黄曲霉等微生物生长。

TBHQ与其他抗氧剂相比的缺点是它使用的行业比较窄，都是食品方面的，中国食品添加剂使用卫生标准GB2760-2011（04.007）规定:TBHQ可用于食用油脂、油炸食品、干鱼制品、饼干、方便面、速煮米、干果罐头、腌制肉制品中作抗氧化剂。因此，对TBHQ的急性毒性评价的研究就非常有意义。

2．材料与方法

2.1材料

实验动物：选用健康成年小鼠（20g左右），试验前要对动物饲养观察3~7天，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物。

2.2仪器与试剂

2.2.1器材：

注射器，灌胃针，电子天平，吸管，吸球，容量瓶，烧杯，棉棒，试剂瓶、棉纱手套；

2.2.2试剂：

TBHQ溶液，苦味酸，蒸馏水，植物油、生理盐水。

2.3实验方法

2.3.1实验动物与分组：

首选健康成年小鼠(20g左右)，同性别实验动物个体间体重相差不得超过平均体重的10%，试验前动物要在试验环境中至少适应3~7d时间，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物本次试验取体重18~22g的小鼠，试验时，将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，按随机分组表将实验动物分成4组，每组4只。

16只小鼠的完全随机分配表如下

2.3.2剂量选择：

经过预试或查资料得到LD50 的大致范围，经查资料得口服-小鼠LD50为: 1000 mg/kg；

各剂量组的间距可根据LD50计算方法要求按等比级数或等差级数安排。本实验用霍恩氏发法计算LD50，各组间计量递增公比为10^(1/3)，将LD50为: 1000 mg/kg设为第三剂量组，则染毒剂量组剂量分别为215mg/kg、464mg/kg、1000mg/kg、2150mg/kg。

2.3.3受试化学物配制与稀释

1、水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液，脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、植物油、淀粉等配制成混悬液。本实验用的是TBHQ，根据其性质则选用植物油做溶剂。

2、受试物的配制（等容量稀释）：根据计算结果精确量取需要的受试物的量，稀释成需要的浓度。

配制步骤：

又每组组实验动物都为四只，则每组所需TBHQ体积为1.6ml，每个剂量组配制5mlTBHQ溶液足够。根据上面表格数据得每组称取TBHQ的克数为0.0537、0.1175、0.25、0.5375。分别溶于5ml植物油中即可（若因溶解度限制可更据实验情况调整溶剂体积，但浓度不变）。

2.3.4灌胃：

1、灌胃实验试验前实验动物应禁食（一般12~16h），不限制饮水。然后对各组动物用经口灌胃法一次染毒或。一次灌胃液体积为小鼠0.2~1ml，染毒后继续禁食3~4h，本实验灌胃液体积统一为0.4ml（以植物油作为溶剂）。

不同体重小鼠灌胃容量计算：小鼠灌胃容量：V(ml)=体重(g)×20(ml/kg)=体重(g)×10ml/1000g

2、灌胃方法

小鼠、灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑入食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深入至胃部，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。一般进针深度小鼠2.5~4cm。

2.4检测/检测指标

3.结果分析

3.1实验结果

第一组：染毒剂量为215mg/kg，3号小鼠死亡，其它三只正常；第二组：染毒剂量为464mg/kg，5号小鼠死亡，其它三只正常；第三组：染毒剂量为1000mg/kg，四只小鼠都

正常，未出现死亡；第四组：染毒剂量为1250mg/kg，四只小鼠全部死亡。即四组的死亡数为1、1、0、4，但是在霍恩表上查不到对应的LD50值。

3.1结果分析

第一组3号小鼠的死亡可能是由于3号小鼠对外源化合物敏感性较强，而本身耐受性较差以及对外界环境抵抗力较低，导致3号小鼠死亡。第三小组都表现正常并未出现死亡可能是因为这四只小鼠对外源化合物不敏感，有较强的耐受性，对外界不良环境有较强的抵抗力，而且第三组小鼠体重比其它组小鼠体重偏高，所以抵抗力更强一点，第四组四只全部死亡是因为染毒剂量远远大于小鼠的半数致死量。由于第一组和第三组死亡情况不正常，导致在霍恩表上查不到相应的LD50值。