大豆水溶性蛋白质测定法

济南海能仪器有限公司

Jinan Hanon Instruments Co., Ltd.

地址：济南市高新区天辰大街677号 Tianchen Avenue No. 677，High-tech Zone, Jinan, China

本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。 1仪器和用具

1.1凯氏烧瓶：50m1； 1.2圆底烧瓶：100m1； 1.3万用电炉；

1.4锥形烧瓶：100m1；

1.5微量滴定管：5ml 、刻度0．01m1； 1.6容量瓶：50m1； 1.7移液管：5m1； 1.8量筒：10ml ； 1.9洗耳球：

1.10凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。

凯氏微量蒸馏装置图

1、蒸馏瓶；

2、冷凝管；

3、承接瓶；

4、回流管；

5、漏斗；

6、活塞；

7、簧夹；

8、烧瓶 2试剂

2.1浓硫酸过氧化氢水混合液(2：1：3)：在t00vtl 水中缓慢加入浓硫酸

200ml ，冷却后再国入30％过氧化氢300ml ，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月；

2.2混合催化剂：硫酸铜(cuso 4·5H20)10g ，硫酸钾(A ．R)100g ，硒粉0.2g ， 在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用； 2.3 40％氢氧化钠溶液； 2.4 2％硼酸溶液；

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2.5 O ．01N 盐酸溶液；

2.6 甲基红乙醇溶液：0.1g 甲基红溶于75ml 95％乙醇中(先在研钵中加乙醇 研磨)；

2.7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g 次甲基蓝溶于80m195％~．醇中。临用时将以上 两液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈 绿色。 3操作方法

3.1消化

按照含有10～30mg 粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2～0．3g(w ， 精确到0. 0001g)，用蜡光纸卷着倒入50nnl 凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g ，同 时加入硫酸过氧化氢水混合液3～5m1，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱 内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待 泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状 时，再继续加热沸腾l0min ，取出待消化液冷却至室温后，加水10～20m1，再 待溶液温度降到室温后，干净地转入50rnl 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。

3．2蒸馏

按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。

在烧瓶8内加水400ml 和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液 使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。

量取30m11％硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端

插入液面下1cm 处。量取稀释的消化液5m1，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml ， 冲洗漏斗5。量取40％氢氧化钠溶液1m1，提起活塞注入瓶1内，立即用水2～ 5m1冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时， 经2min 降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min 后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶l 内溶液全部吸入管4中，放松 簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水40～50ml ，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一 次备用。 3．3滴定

用0．01N 盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。 4结果计算

粗蛋白质的干基含量按下列公式计算：

粗蛋白质(干基%)=（V 1-V 0）* N * 14 * P *50/V * 10000/W （100-M ） 式中：v ——蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml ； V 1广实验用去的盐酸溶液体积，m1；

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v 。——空白试验用去的盐酸溶液体积，m1； N ——盐酸溶液的当量浓度，N ；

14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；

P ——蛋白质换算系数(小麦5．7，其他谷物及豆类6 25)； w ——试样重量，mg ； M_试样水分百分率，％。

双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15．O ％以下时，不超过O 2％；粗蛋白

质含量在15 1％以上时，不超过O ．4％。求其平均数，即为测定结果，测定结果

取小数点后第一位。

注：①消化过程中，若硫酸损失过多时，可酌量补加硫酸，勿使瓶内干涸。

②消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏，否则应保存消化液，临用时 加水稀释。

③加入蒸馏瓶1内的碱液，必须过量。

④也可使用由0．2％甲基红乙醇溶液1份和O ．2％溴甲酚绿乙醇溶液5份

配制的混合指示剂(临用时混合)，终点为灰红色。 附录A

大豆水溶性蛋白质测定法

(补充件)

A.1仪器和用具 A.1.1粉碎机；

A.1.2磨口带塞锥形瓶：50m1； A.1.3振荡器：国际型； A.1.4容量瓶：250m1；

A.1.5离心机，附50ml 离心管； A.1.6玻璃漏斗；

A.1.7锥形瓶、移液管；

A.1.8其他仪器和用具与本标准第1章同。 A.2试剂

所有试剂与本标准第2章同 A.3操作方法

A.3.1试样制备：将大豆粉碎使90％以上通过60目筛。

A.3.2提取：称取粉碎试样5g(w ，精确至0．Olg)于磨口带塞锥形瓶中， 加水200r~t1，摇混使均匀分散，然后在25～30℃温度下振荡2h ，取出后将混合