稻瘟病菌培养方案

耗材：9cm玻璃培养皿20个；

9cm 灭菌塑料一次性培养皿50个

灭菌1.5ml离心管100个；

无水乙醇1瓶

接种棒 1支配有镍铬丝

接种针 1支尖端为硬针

滤纸 1盒

酒精灯 1个

试剂：PDA培养基 1瓶,500ml；玉米培养基1瓶,500ml；

培养步骤：

一.菌株培养

1.灭菌培养基，铺平板；

2.挑取小块菌种，置于平板上；

3.25℃培养7d，活化菌株；

4.大直径4-5cm滤纸片，滤纸片灭菌；

5.在单菌落周围，贴上滤纸片，菌丝继续生长繁殖；

6.当滤纸片周围布满菌丝后，将滤纸片置于超净工作台吹干，-80℃冰箱保存备用；

二.产孢培养

第一种方法：

1.将活化好的菌株，接种于PDA培养基上，产孢培养基做厚一点，25℃培养10-15d；

2.等待其菌丝颜色由白转黑时，用无菌水冲洗培养基表面，保存带孢子的菌悬液；

3.一个培养皿可收集三次孢子，每次间隔48h，合并后用于侵染；

第二种方法：

1.高粱培养基制备：取适当高粱粒，放入水中，水面高于高粱粒，煮沸30min，手能捏动即可，捞出，晾干后取适量装入三角瓶中，并在121℃灭菌，备用；

2.将活化好的菌块，接种于高粱培养基上；

3. 25℃培养10-15d，等待高粱长满菌丝体；

4.接种前，用无菌水洗掉表面菌丝体，并用灭菌纱布过滤后，置于灭菌托盘中，25℃培养2d，产生分生孢子后，无菌水清洗用于接种；