金标技术 PPT课件
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3. 胶体金的特性：
A 胶体性质，特别是对电解质敏感，对试验 有影响。
B 呈色性：胶体金的光散射性与溶胶颗粒的 大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光 散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著 的颜色变化。小：2~5nm橙黄色，中： 10~20nm酒红色，大：30~80nm紫红色。
C 光吸收性：胶体金有单一吸收峰，光波在 510~550nm之间，随颗粒变大而偏向长波长。 利用这特性，可进行吸光度检测。
加入5ml 1%PEG20000溶液
离心分离30~60min(胶体颗粒不同则离心条件不同)
沉淀悬浮于含0.2~0.5mg/ml PEG20000的缓冲液中7。
• 金标的渗滤装置渗滤装置：由塑料小盒、吸水垫料 和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成。 塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径 约0.4～0.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤 维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm 的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安 放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维 素膜片贴紧吸水垫料。如此即制备成一渗滤装置塑 料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之 滴金法的整 反应过程都是在渗滤装置上进行的，因 此又常称渗滤装置为滴金法反应板
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4. 胶体金的制备：
滴加还原剂
⑴方法： HAuCl4
胶体金颗粒
搅拌
0.01% HAuCl4 100ml
加热至沸，搅拌不断
定量还原剂
(常用0.7ml1%柠檬酸三钠水溶液)
2~3min内变色金黄紫红
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
继续煮沸15min
冷却至室温
加蒸馏水恢复至原体积。
（所得胶体金λmax为535nm，A535nm=1.12。) 6
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• 6）于小孔内滴加洗涤液4滴，待完全渗入。
• 判读结果：在膜中央有清晰的淡红色斑点显示者判 为阳性反应；反之，则为阴性反应。斑点呈色的深 浅相应地提示阳性强度。
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• 接下来我又学习了BV（细菌性阴道炎）， HP尿素酶。下图为BV板。
• HP尿素酶。它是从慢性活动性胃炎患者的胃 黏膜分离的一种革兰氏阴性杆菌。HP快速尿 酶的原理是HP具有丰富的尿素酶，分解尿素 产生氨，是反应产生氨，使反应变成碱性， 再由HP指示剂显色，这个方法很简便。。很 容易就可以检测出很多疾病。以下就是我做 很多的HP尿酶板了。
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• 接下来我说说我平时的实验方法吧。
• 1）将反应板从冷藏环境中取出。必须置37°C温箱 中平衡30分钟。后方可使用。
• 2）加2滴洗涤液于反应板孔中。待液体完全渗入。
• 3）加入100微升（约两滴）品（也就是血清）待完 全渗入。
• 4）加入4滴洗涤液，待完全渗入。。
• 5）假入3滴胶体金结合物（加入前反转摇匀）。待 完全渗入。
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一、概念：以胶体金作为标记物的免疫检测
技术。（灵敏度略低于其他标记技术）
二、有关胶体金的基本知识
1.胶体金概念及来源：
胶体金也称金溶胶，是由金盐还原成金后形 成的金颗粒悬液。
2.胶体金颗粒结构：
由一个基础金核(原子金)及包围在外的离子 层 H+构则成分，散离在子溶层液为中负。离呈子球(形Au(小Cl2颗-)，粒外)或层椭为圆 形(大颗粒)。
三、免疫金(金标金蛋白)的制备： 1.标记原理：表面带负电荷的胶体金与蛋白质
的正电荷基团因静电吸附而结合。 胶体金+Ag/Ab 金标Ag/Ab(Ag*/Ab*) 2.标记步骤：
调节金溶胶至所需pH (用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl) 加入蛋白质溶液(100ml:2~3ml)，搅拌
金免疫技术
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• 我们公司目前拥有 六大技术平台：酶联免疫 （ EIA ）、免疫荧光（ IFA ）、金标免疫（ GIA ）、 生物芯片（ BIOCHIP ）、快速检测卡（生化反应） 类及化学发光免疫类；
• 我主要是学习金标知识。金标是公司较为新的产品 的，它的全名叫做金标斑点免疫法斑点免疫渗滤试 验的基本原理是：以双抗体夹心法为例。在硝酸纤 维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。 当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗 原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。 其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上 的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即 在膜中央显示红色斑点。
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• 最后我又稍微学了一点芯片的知识。装玻片。 生物芯片分为膜芯片和玻璃芯片。。膜芯片 的操作方法和金标的差不多。。较为难的是 玻璃芯片。它所点的点多。它制作很麻烦。 玻璃要经过硫酸，氨水，盐酸，清水超声洗。 最后用酒精洗涤。最后进行装片。在去烤干。 后来还在芯片孔上面加上膜。最后经过重重 的关卡才可以进行点量。以下是玻璃芯片图。
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• 很感谢公司里的人教会了我很多..除了在工 作学习方面学会了很多东西.在做人处事方 面也学会了很多.
• 一回首一驻足，我们都会惊叹，因为我们 以为只过了一天，哪知时光已经过了一年。 时间过的很快.虽然很多东西已经在慢慢淡 忘.我们从龙岗到西校再到实习.时间已经过 去了三年了,还有将近一年半,或许应该说是 一年了.所以要好好珍惜了.大家如果毕业了. 应该会难再见了吧~其实我真的很喜欢这个 班,很喜欢班上的人,所以,我们都要幸福开 心
3. 胶体金的特性：
A 胶体性质，特别是对电解质敏感，对试验 有影响。
B 呈色性：胶体金的光散射性与溶胶颗粒的 大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光 散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著 的颜色变化。小：2~5nm橙黄色，中： 10~20nm酒红色，大：30~80nm紫红色。
C 光吸收性：胶体金有单一吸收峰，光波在 510~550nm之间，随颗粒变大而偏向长波长。 利用这特性，可进行吸光度检测。
加入5ml 1%PEG20000溶液
离心分离30~60min(胶体颗粒不同则离心条件不同)
沉淀悬浮于含0.2~0.5mg/ml PEG20000的缓冲液中7。
• 金标的渗滤装置渗滤装置：由塑料小盒、吸水垫料 和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成。 塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径 约0.4～0.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤 维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm 的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安 放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维 素膜片贴紧吸水垫料。如此即制备成一渗滤装置塑 料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之 滴金法的整 反应过程都是在渗滤装置上进行的，因 此又常称渗滤装置为滴金法反应板
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4. 胶体金的制备：
滴加还原剂
⑴方法： HAuCl4
胶体金颗粒
搅拌
0.01% HAuCl4 100ml
加热至沸，搅拌不断
定量还原剂
(常用0.7ml1%柠檬酸三钠水溶液)
2~3min内变色金黄紫红
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
继续煮沸15min
冷却至室温
加蒸馏水恢复至原体积。
（所得胶体金λmax为535nm，A535nm=1.12。) 6
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• 6）于小孔内滴加洗涤液4滴，待完全渗入。
• 判读结果：在膜中央有清晰的淡红色斑点显示者判 为阳性反应；反之，则为阴性反应。斑点呈色的深 浅相应地提示阳性强度。
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• 接下来我又学习了BV（细菌性阴道炎）， HP尿素酶。下图为BV板。
• HP尿素酶。它是从慢性活动性胃炎患者的胃 黏膜分离的一种革兰氏阴性杆菌。HP快速尿 酶的原理是HP具有丰富的尿素酶，分解尿素 产生氨，是反应产生氨，使反应变成碱性， 再由HP指示剂显色，这个方法很简便。。很 容易就可以检测出很多疾病。以下就是我做 很多的HP尿酶板了。
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• 接下来我说说我平时的实验方法吧。
• 1）将反应板从冷藏环境中取出。必须置37°C温箱 中平衡30分钟。后方可使用。
• 2）加2滴洗涤液于反应板孔中。待液体完全渗入。
• 3）加入100微升（约两滴）品（也就是血清）待完 全渗入。
• 4）加入4滴洗涤液，待完全渗入。。
• 5）假入3滴胶体金结合物（加入前反转摇匀）。待 完全渗入。
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一、概念：以胶体金作为标记物的免疫检测
技术。（灵敏度略低于其他标记技术）
二、有关胶体金的基本知识
1.胶体金概念及来源：
胶体金也称金溶胶，是由金盐还原成金后形 成的金颗粒悬液。
2.胶体金颗粒结构：
由一个基础金核(原子金)及包围在外的离子 层 H+构则成分，散离在子溶层液为中负。离呈子球(形Au(小Cl2颗-)，粒外)或层椭为圆 形(大颗粒)。
三、免疫金(金标金蛋白)的制备： 1.标记原理：表面带负电荷的胶体金与蛋白质
的正电荷基团因静电吸附而结合。 胶体金+Ag/Ab 金标Ag/Ab(Ag*/Ab*) 2.标记步骤：
调节金溶胶至所需pH (用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl) 加入蛋白质溶液(100ml:2~3ml)，搅拌
金免疫技术
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• 我们公司目前拥有 六大技术平台：酶联免疫 （ EIA ）、免疫荧光（ IFA ）、金标免疫（ GIA ）、 生物芯片（ BIOCHIP ）、快速检测卡（生化反应） 类及化学发光免疫类；
• 我主要是学习金标知识。金标是公司较为新的产品 的，它的全名叫做金标斑点免疫法斑点免疫渗滤试 验的基本原理是：以双抗体夹心法为例。在硝酸纤 维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。 当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗 原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。 其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上 的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即 在膜中央显示红色斑点。
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• 最后我又稍微学了一点芯片的知识。装玻片。 生物芯片分为膜芯片和玻璃芯片。。膜芯片 的操作方法和金标的差不多。。较为难的是 玻璃芯片。它所点的点多。它制作很麻烦。 玻璃要经过硫酸，氨水，盐酸，清水超声洗。 最后用酒精洗涤。最后进行装片。在去烤干。 后来还在芯片孔上面加上膜。最后经过重重 的关卡才可以进行点量。以下是玻璃芯片图。
11
• 很感谢公司里的人教会了我很多..除了在工 作学习方面学会了很多东西.在做人处事方 面也学会了很多.
• 一回首一驻足，我们都会惊叹，因为我们 以为只过了一天，哪知时光已经过了一年。 时间过的很快.虽然很多东西已经在慢慢淡 忘.我们从龙岗到西校再到实习.时间已经过 去了三年了,还有将近一年半,或许应该说是 一年了.所以要好好珍惜了.大家如果毕业了. 应该会难再见了吧~其实我真的很喜欢这个 班,很喜欢班上的人,所以,我们都要幸福开 心