(新)急性毒性试验
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急性毒性试验
急性毒性试验(单次给药毒性试验)主要观察对实验动物一次给药后所产生的毒
性症状及其程度，出现和消失的时间，死亡的发生率并计算出其最大给药量， 最小致死量、半数致死量(LD50)等。由于中药毒性常较小，单次给药往往不能表
现明显的毒性作用，我国药政部门把一日内多次给药观察受试药物毒性的实验
也称作急性毒性实验。 急性毒性试验的目的是推测新药对人的急性毒性的强弱。同时，它可以为长 期毒性试验、生殖毒性试验、致突变试验等试验设计提供剂量选择依据和有关 毒性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间，与半数有效量 (ED50)比较判断新药的安全系数。因此，急性毒性试验对了解新药的毒性是非常 必要的。 鉴于种种因素造成急性毒性试验结果(症状和致死量)在不同实验室内有较大的 差异，且耗费大量动物而所取得的动物毒性的信息量相对较少，因此，各国目 前都在修订急性毒性试验的技术要求，希望能利用尽可能少的动物数量而取得 有价值的信息，同样达到急性毒性试验的目的。
第一节
一、动物 (一)动物种
急性毒性试验方法的有关问题
动物种(或系)的差异是动物急性毒性差异的主要原因，药酶则是毒性种差
的重要原因之一。为推测新药对人的急性毒性，某些发达国家动物急性毒性 试验要求包含非啮齿类动物(除家兔外)在内的两种动物，我国对此未作出明 确规定。由于中药已在临床长期使用，一般认为，如尤特殊情况，使用一种 动物已基本上达到急性毒性试验的目的。目前虽常用的实验动物是小鼠或大 鼠。但在某些特殊情况下，例如受试物中已知含有强烈胃肠刺激物，就还应 再采用非啮齿类大动物进行实验，否则，即使毒性较大(如巴豆)也并不能引
视不同试验而异。最小致死量或半数致死量，小动物(大鼠、小鼠)试验组 在三组以上，每组—般至少10只动物(雌雄各半)。一些国家对动物数和组数 不作规定，因此，有只用3只一组经多组试Baidu Nhomakorabea测得近似致死量或LD50者。大动 物(犬、猴)并不—定要求得到LD50，可用少量动物采用剂量递增的方法观察 中毒症状，求近似致死量即可。最大给约量试验—般要求用小鼠或大鼠20只 即可。
三、给药方法 (一)动物禁食 动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。 (二)给药途径 中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药 物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。 各给药途径的容量一般为小鼠0．4—0．5ml／20g(体重)，大鼠lml／ l00g(体重)。小鼠口服最大容量不超过0．8ml／20g(体重)，其他途径不超过 0．5ml／20g(体重)。大鼠口服最大容量不超过2ml／l00g(体重)，其他途径不 超过lml／l00g(体重)。
(二)样品液的浓度及给药容量
为了求得最低致死且或半数致死量，需要设不同剂量组，使部分组反应率在50％以 上，部分组反应率在50％以下。不同剂量的设定有两种方式，—是浓度一定不同给药 容量，另—种是容量一定不同给药浓度，两者各有所长。
浓度一定适用于某些已经固定浓度的制剂，其有利之处是避免了渗透、粘度、溶质 颗粒的分散状态等理化性状不—致对毒性试验结果的影响，因此，浓度一定也可得到 较好的结果，但由于动物的投药用量是有限的，范围较窄，按体重给药容量难以达到 试验要求。因此，通常采用同容量不同浓度的给药方法，注射给药药液浓度应勺体液 浓度等渗(至少不应低渗)，口服液不必作特殊考虑，对毒性低的中药制剂而言，应以能 保持一定流动性的最大浓度作为口服样品液。
四、急毒试验观察指标和致死量的计算
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。 (二}致死剂量计算 可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
二、试验准备
实验应在符合GLP的实验室内进行，实验样品质量和稳定性应符合要求，与药效学 及临床试验一致。
(一)样品液的配制 中药材町用浓缩煎剂或浸膏，中药制剂可用不含辅料的提取物加水或用o．5％羧基 纤维素钠，0．5％吐温—80，5％阿拉伯胶等混悬剂、增溶剂配成混悬液等，尽可能配 成水溶液，水不溶性成分可用植物汕配成油溶、乳浊液。也有用乙醇、聚乙醇等溶剂 配成样品液者，但溶剂本身的急性毒性能干扰试验结果，因此，急性毒性试验报告中 应对样品液的配制方法加以详细说明，必要时设溶剂对照组。
起大、小鼠呕吐反应。
(二)动物的年龄、性别、体重 急性毒性受动物的健康状态、年龄、性别、遗传因素、体重、药物的吸收、 分布、代谢、排泄和内分泌激素等的影响。未成年的动物药酶活性一般较低， 对于经代谢后减毒的药物表现毒性较强。而且，年幼动物药物代谢功能和敏
感度较易发生变化，性别间的特性也尚未确立，因此，口服毒性通常使用年 轻的性成熟的动物，—般小鼠6—8周龄，两种性别，体重18-22g(同次试验体 重相差不超过2g)，大鼠6—8周龄，两种性别，体重120～150g(同次试验体重 相差不超过10g)。 (三)动物数量
急性毒性试验(单次给药毒性试验)主要观察对实验动物一次给药后所产生的毒
性症状及其程度，出现和消失的时间，死亡的发生率并计算出其最大给药量， 最小致死量、半数致死量(LD50)等。由于中药毒性常较小，单次给药往往不能表
现明显的毒性作用，我国药政部门把一日内多次给药观察受试药物毒性的实验
也称作急性毒性实验。 急性毒性试验的目的是推测新药对人的急性毒性的强弱。同时，它可以为长 期毒性试验、生殖毒性试验、致突变试验等试验设计提供剂量选择依据和有关 毒性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间，与半数有效量 (ED50)比较判断新药的安全系数。因此，急性毒性试验对了解新药的毒性是非常 必要的。 鉴于种种因素造成急性毒性试验结果(症状和致死量)在不同实验室内有较大的 差异，且耗费大量动物而所取得的动物毒性的信息量相对较少，因此，各国目 前都在修订急性毒性试验的技术要求，希望能利用尽可能少的动物数量而取得 有价值的信息，同样达到急性毒性试验的目的。
第一节
一、动物 (一)动物种
急性毒性试验方法的有关问题
动物种(或系)的差异是动物急性毒性差异的主要原因，药酶则是毒性种差
的重要原因之一。为推测新药对人的急性毒性，某些发达国家动物急性毒性 试验要求包含非啮齿类动物(除家兔外)在内的两种动物，我国对此未作出明 确规定。由于中药已在临床长期使用，一般认为，如尤特殊情况，使用一种 动物已基本上达到急性毒性试验的目的。目前虽常用的实验动物是小鼠或大 鼠。但在某些特殊情况下，例如受试物中已知含有强烈胃肠刺激物，就还应 再采用非啮齿类大动物进行实验，否则，即使毒性较大(如巴豆)也并不能引
视不同试验而异。最小致死量或半数致死量，小动物(大鼠、小鼠)试验组 在三组以上，每组—般至少10只动物(雌雄各半)。一些国家对动物数和组数 不作规定，因此，有只用3只一组经多组试Baidu Nhomakorabea测得近似致死量或LD50者。大动 物(犬、猴)并不—定要求得到LD50，可用少量动物采用剂量递增的方法观察 中毒症状，求近似致死量即可。最大给约量试验—般要求用小鼠或大鼠20只 即可。
三、给药方法 (一)动物禁食 动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。 (二)给药途径 中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药 物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。 各给药途径的容量一般为小鼠0．4—0．5ml／20g(体重)，大鼠lml／ l00g(体重)。小鼠口服最大容量不超过0．8ml／20g(体重)，其他途径不超过 0．5ml／20g(体重)。大鼠口服最大容量不超过2ml／l00g(体重)，其他途径不 超过lml／l00g(体重)。
(二)样品液的浓度及给药容量
为了求得最低致死且或半数致死量，需要设不同剂量组，使部分组反应率在50％以 上，部分组反应率在50％以下。不同剂量的设定有两种方式，—是浓度一定不同给药 容量，另—种是容量一定不同给药浓度，两者各有所长。
浓度一定适用于某些已经固定浓度的制剂，其有利之处是避免了渗透、粘度、溶质 颗粒的分散状态等理化性状不—致对毒性试验结果的影响，因此，浓度一定也可得到 较好的结果，但由于动物的投药用量是有限的，范围较窄，按体重给药容量难以达到 试验要求。因此，通常采用同容量不同浓度的给药方法，注射给药药液浓度应勺体液 浓度等渗(至少不应低渗)，口服液不必作特殊考虑，对毒性低的中药制剂而言，应以能 保持一定流动性的最大浓度作为口服样品液。
四、急毒试验观察指标和致死量的计算
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。 (二}致死剂量计算 可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
二、试验准备
实验应在符合GLP的实验室内进行，实验样品质量和稳定性应符合要求，与药效学 及临床试验一致。
(一)样品液的配制 中药材町用浓缩煎剂或浸膏，中药制剂可用不含辅料的提取物加水或用o．5％羧基 纤维素钠，0．5％吐温—80，5％阿拉伯胶等混悬剂、增溶剂配成混悬液等，尽可能配 成水溶液，水不溶性成分可用植物汕配成油溶、乳浊液。也有用乙醇、聚乙醇等溶剂 配成样品液者，但溶剂本身的急性毒性能干扰试验结果，因此，急性毒性试验报告中 应对样品液的配制方法加以详细说明，必要时设溶剂对照组。
起大、小鼠呕吐反应。
(二)动物的年龄、性别、体重 急性毒性受动物的健康状态、年龄、性别、遗传因素、体重、药物的吸收、 分布、代谢、排泄和内分泌激素等的影响。未成年的动物药酶活性一般较低， 对于经代谢后减毒的药物表现毒性较强。而且，年幼动物药物代谢功能和敏
感度较易发生变化，性别间的特性也尚未确立，因此，口服毒性通常使用年 轻的性成熟的动物，—般小鼠6—8周龄，两种性别，体重18-22g(同次试验体 重相差不超过2g)，大鼠6—8周龄，两种性别，体重120～150g(同次试验体重 相差不超过10g)。 (三)动物数量